張媛媛，王秀梅，張麗萍,尚海晶，張丹浩 綜述 王成彬 審校

綜 述

妊娠期單純皰疹病毒分型檢測(cè)應(yīng)用進(jìn)展

張媛媛1，王秀梅1，張麗萍1,尚海晶1，張丹浩1綜述 王成彬2審校

單純皰疹病毒；分型檢測(cè)；妊娠

單純皰疹病毒(herpes simplex virus,HSV)是人類病毒性疾病中常見(jiàn)的病原體之一[1]，屬于皰疹病毒科α病毒亞科雙鏈DNA病毒，呈球形，完整病毒由核心、衣殼、被膜及囊膜組成[2]。當(dāng)孕婦感染這種病原體后，可以不表現(xiàn)出明顯癥狀，但會(huì)引起習(xí)慣性流產(chǎn)、死胎、死產(chǎn)，以及胎兒先天缺陷或發(fā)育異常等不良妊娠結(jié)局[3，4]。隨著圍生醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展，優(yōu)生優(yōu)育越來(lái)越受到人們的重視，而HSV病毒感染也正是圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)與優(yōu)生遺傳醫(yī)學(xué)研究的重要內(nèi)容之一[5]。目前，HSV病毒感染有上升趨勢(shì)， 因此實(shí)驗(yàn)室HSV病毒抗體檢測(cè)對(duì)臨床診斷及預(yù)防不良妊娠至關(guān)重要。為此，筆者就實(shí)驗(yàn)室血清HSV1/2型特異性抗體IgG、IgM檢測(cè)結(jié)果在妊娠期間的應(yīng)用進(jìn)展做一綜述。

1 HSV病毒分型

感染HSV病毒后病毒將潛伏在神經(jīng)中樞，多種刺激都會(huì)導(dǎo)致病毒周期性復(fù)發(fā)。若機(jī)體免疫力強(qiáng)，機(jī)體會(huì)迅速產(chǎn)生特異性免疫力而康復(fù)，無(wú)明顯癥狀。但大多數(shù)機(jī)體不能徹底清除病毒，當(dāng)機(jī)體免疫力低下時(shí)，潛伏的HSV病毒復(fù)發(fā)，轉(zhuǎn)為增殖性感染，出現(xiàn)臨床癥狀[6]，如口唇皰疹、水皰、膿皰、生殖器皰疹等。HSV病毒直徑150～200 nm，用限制性內(nèi)切核酸酶或抗原分析可發(fā)現(xiàn)HSV有兩個(gè)自然變異體HSV-1和HSV-2兩型，兩者之間雖然有5%的基因位點(diǎn)相同，但對(duì)人體的感染大不相同：HSV-1主要通過(guò)直接、間接接觸或飛沫傳播，常引起腰部以上的黏膜感染，如口腔、皮膚、黏膜、眼黏膜及中樞神經(jīng)系統(tǒng)，偶見(jiàn)于外生殖器；HSV-2又稱生殖道型，占90%，通常為性傳播，偶見(jiàn)于口腔病變，主要引起生殖道黏膜的感染，也可經(jīng)胎盤宮內(nèi)傳播或經(jīng)產(chǎn)道傳播給新生兒。HSV病毒感染現(xiàn)已是常見(jiàn)的性接觸傳播疾病之一[5]。

2 HSV病毒感染對(duì)妊娠的影響

3 妊娠期實(shí)驗(yàn)室HSV抗體檢測(cè)

3.1 感染HSV病毒后的抗體變化 HSV病毒感染2～3 d，IgM可升高，1周后達(dá)峰值；HSV-IgG在1周后可被檢測(cè)出。HSV病毒感染后若機(jī)體免疫力高，機(jī)體會(huì)迅速產(chǎn)生特異性免疫力而康復(fù)，HSV-IgM可在峰值過(guò)后維持一段時(shí)間，在感染2周后可迅速下降至正常水平，而HSV-IgG數(shù)值會(huì)維持在愈合期水平。大多數(shù)機(jī)體不能徹底清除病毒，HSV病毒可能處于潛伏狀態(tài)。當(dāng)機(jī)體免疫力低下時(shí)，潛伏的HSV病毒復(fù)發(fā)，轉(zhuǎn)為增殖性感染，HSV-IgG會(huì)迅速升高，并在1周內(nèi)達(dá)到峰值。在潛伏期，無(wú)癥狀期，復(fù)發(fā)期，HSV-IgM則檢測(cè)不到。因此，HSV-IgM可作為HSV原發(fā)早期感染指標(biāo)，HSV-IgG可作為HSV亞臨床無(wú)臨床癥狀及HSV病毒感染復(fù)發(fā)的指標(biāo)[3]。

血清中特異性抗體IgM、IgG 陽(yáng)性，在一定程度上還可評(píng)估孕婦感染對(duì)胎兒的損害程度[12]。孕婦孕前檢查HSV-1，HSV-2型特異性抗體IgG、IgM可規(guī)避孕婦感染的風(fēng)險(xiǎn)，孕中檢查 HSV-1，HSV-2型特異性抗體IgG、IgM可評(píng)估產(chǎn)道自然分娩新生兒感染HSV的風(fēng)險(xiǎn)。因此孕前，孕早、中、晚期檢測(cè)血清HSV病毒特異性抗體IgG、IgM對(duì)了解胎兒感染情況，及早的給予臨床干預(yù)和預(yù)防不良妊娠的發(fā)生起到了至關(guān)重要的作用[13]。

另?yè)?jù)研究報(bào)道，孕20周前孕婦感染HSV-2型，可通過(guò)胎盤感染胎兒，流產(chǎn)率高達(dá)34%；孕20周后感染HSV-2型引起宮內(nèi)感染的病例罕見(jiàn)，先天發(fā)育異常兒極少發(fā)生[13]。HSV-2型經(jīng)產(chǎn)道感染最常見(jiàn)，占80%以上，并出現(xiàn)全身擴(kuò)散，其中近半數(shù)新生兒死亡或有嚴(yán)重中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷[14]。很多孕婦處于亞臨床狀態(tài)，很難早期診斷，因此，孕前、孕早期檢測(cè)HSV2-IgG就顯得尤為重要。

3.2 實(shí)驗(yàn)室HSV抗體檢測(cè) 目前HSV檢測(cè)診斷的方法很多，有直接檢查、病毒細(xì)胞分離培養(yǎng)法、HSV病毒抗原檢測(cè)法、間接免疫熒光檢測(cè)抗體法、抗體法、探針雜交、PCR。因檢測(cè)方法不同，其靈敏度和特異性也大不相同。

3.2.1 直接檢查 通常是用熒光素標(biāo)記或酶標(biāo)記單克隆抗體對(duì)感染組織、膿皰液、分泌物進(jìn)行免疫熒光染色或免疫組化染色，用熒光顯微鏡或光學(xué)顯微鏡直接檢測(cè)細(xì)胞內(nèi) HSV 特異性抗原[8]。

3.2.2 HSV病毒細(xì)胞分離培養(yǎng) 此方法是最敏感的檢測(cè)方法，被廣泛當(dāng)作金標(biāo)準(zhǔn)。病毒細(xì)胞培養(yǎng)是以活細(xì)胞為宿主，使活病毒得以繁殖擴(kuò)增，并且可對(duì)其分離株進(jìn)行鑒別分型。但此方法周期長(zhǎng)，病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中增值非常慢，長(zhǎng)者達(dá)數(shù)周才出現(xiàn)病變[2]。除此之外，此方法還要求嚴(yán)格，成本昂貴，操作繁瑣，此方法適用于科研研究，不適于臨床常規(guī)檢測(cè)。

3.2.3 HSV抗原檢測(cè) 臨床大多采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)用于皮膚破損處HSV抗原檢測(cè)[5]。HSV病毒感染典型者，臨床會(huì)出現(xiàn)潰瘍、水皰膿皰等，用棉簽蘸取破潰處作標(biāo)本，用雙抗體夾心法檢測(cè)抗原，可同時(shí)檢出HSV-1型和HSV-2型。此方法對(duì)感染典型者，檢出率高，對(duì)表現(xiàn)不典型者，檢出率就低。這可能與感染典型者水皰新鮮，病毒抗原強(qiáng)數(shù)量多有關(guān)系。HSV抗原檢測(cè)，敏感性、特異性較強(qiáng)，特別適合檢測(cè)臨床表現(xiàn)典型者。ELISA檢測(cè)抗原影響因素也過(guò)多，溫育箱溫度，標(biāo)本因素和人為操作因素等都會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響，會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性的出現(xiàn)。

3.2.4 間接免疫熒光法檢測(cè)HSV抗體 該方法屬半定量檢測(cè)方法，其原理是將待測(cè)標(biāo)本按1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512稀釋，將稀釋標(biāo)本加到包被了HSV抗原的玻片上，溫育一定時(shí)間，加入二抗即含Evens藍(lán)兔抗人IgG熒光抗體，在熒光顯微鏡下觀測(cè)滴度。此方法雖特異性強(qiáng)，但操作方法繁瑣，人為因素影響觀測(cè)結(jié)果太大，此方法檢測(cè)HSV抗體已被實(shí)驗(yàn)室逐漸淘汰。

3.2.5 抗體法 是臨床上最常用的檢測(cè)手段。HSVIgG 是抗 HSV 體液免疫應(yīng)答的主要靶位，且使用多肽作抗原有較好的特異性和抗原性。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)能夠?qū)?HSV1-IgG和 HSV2-IgG 進(jìn)行有效區(qū)分，從而進(jìn)行分型檢測(cè)。聯(lián)合使用 HSV-1和 HSV-2型特異性抗體檢測(cè)可以準(zhǔn)確判斷HSV 感染的發(fā)展階段、嚴(yán)重程度、發(fā)病周期等重要病情信息。雖然血清抗體檢測(cè)不能判斷有無(wú)活動(dòng)性 HSV 排放，但HSV 型特異性抗體診斷是發(fā)現(xiàn)HSV病毒感染亞臨床或無(wú)癥狀患者的可行措施，對(duì)于預(yù)防性伴間和母嬰間傳播也具有重要意義[8]。

3.2.6 探針雜交 根據(jù)堿基配對(duì)原則選定病毒 DNA 某段序列，合成或克隆為互補(bǔ)性探針序列，標(biāo)記上同位素或生物素，用以檢測(cè)樣本中是否存在相應(yīng)病毒 DNA。探針雜交技術(shù)具有一定的先進(jìn)性和準(zhǔn)確性，其特異度為 63%～100%，敏感度為 25%～92%。但要求條件較高，作為常規(guī)檢驗(yàn)受到一定限制[8]。

3.2.7 PCR檢測(cè) 臨床常用常規(guī)PCR檢測(cè)，PCR-DNA測(cè)序及FQ-PCR檢測(cè)。常規(guī)PCR檢測(cè)法,用特定PCR引物測(cè)定標(biāo)本是否含有特定病毒，由于引物局限，測(cè)定病毒種類也因此受限，此方法逐漸淘汰。PCR-DNA測(cè)序法對(duì)PCR擴(kuò)增并排序，測(cè)序，與數(shù)據(jù)庫(kù)比較即可確定標(biāo)本中是否有HSV病毒。但此法實(shí)驗(yàn)要求嚴(yán)格，成本又高，很難在臨床推廣。FQ-PCR是目前為止檢測(cè)HSV比較先進(jìn)的分子生物技術(shù)，此法應(yīng)用熒光探針技術(shù)，可以通過(guò)光電傳導(dǎo)系統(tǒng)直接探測(cè)PCR擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)的變化以獲得定量結(jié)果，具有DNA雜交的高特異性和光譜技術(shù)的高精確性，該技術(shù)已被應(yīng)用于HSV病原體的檢測(cè)[6]。此方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。孕婦做PCR檢測(cè)，則都需抽取羊水樣本或陰道分泌物，應(yīng)作為血清學(xué)檢查之后的臨床確診手段。

目前，臨床實(shí)驗(yàn)室多采用ELISA法檢HSV-IgM、HSV-IgG抗體，用于臨床HSV急性感染和復(fù)發(fā)感染的診斷指標(biāo)。大型醫(yī)院則采用全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)，速度快，極大減少人為干擾因素，操作流程簡(jiǎn)單，已成為臨床用于檢測(cè)HSV 特異性抗體的首選血清學(xué)檢測(cè)手段。 本院采用的就是意大利索林電化學(xué)微粒發(fā)光儀，進(jìn)HSV1/2-IgG、HSV 1/2-IgM的檢測(cè)。若HSV1/2-IgG、HSV1/2-IgM和HSV2-IgG、HSV2-IgM能聯(lián)合檢測(cè)，就能判別臨床由HSV病毒感染導(dǎo)致孕婦不良妊娠究竟是由HSV-1型還是HSV-2型引起。 對(duì)新近感染HSV 病原體的早、中孕期孕婦，因胎兒感染的概率相對(duì)較大，可結(jié)合定量PCR技術(shù)檢測(cè)，必要時(shí)可終止妊娠[14]。此項(xiàng)課題有待進(jìn)一步研究。

為了提高效價(jià)比，降低不必要的手術(shù)干預(yù)和藥物治療，近年來(lái)臨床上多不主張進(jìn)行妊娠期HSV 感染的常規(guī)篩查[15,16]。但對(duì)高危人群要重視妊娠早期HSV 感染的篩查和診治，從而自覺(jué)地在妊娠早期進(jìn)行 HSV-IgM、IgG 感染的常規(guī)檢測(cè)[17],根據(jù)孕婦的具體情況及時(shí)采取相應(yīng)的措施， 提出治療建議,采取有效的早期干預(yù)對(duì)優(yōu)生優(yōu)育以及促進(jìn)孕產(chǎn)婦健康具有重要意義[18]。

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(2014-12-11收稿 2015-02-11修回)

(責(zé)任編輯 梁秋野)

張媛媛，本科學(xué)歷，技師，E-mail:1797252214@qq.com

1.100039 北京，武警總醫(yī)院檢驗(yàn)科；2.100853 北京，解放軍總醫(yī)院檢驗(yàn)科

張麗萍，E-mail：zlp0461@sina.com

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