盧善善，黃挺章，李遠(yuǎn)輝，黃 瑩，馬忠麗，張照平,黃鎖義

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院 護(hù)理學(xué)院，廣西 百色 533000;2.右江民族醫(yī)學(xué)院 臨床學(xué)院，廣西 百色 533000;3.右江民族醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，廣西 百色 533000)

薏苡莖甲醇提取物的抗氧化性研究

盧善善1，黃挺章2，李遠(yuǎn)輝2，黃 瑩2，馬忠麗2，張照平1,黃鎖義3*

(1.右江民族醫(yī)學(xué)院 護(hù)理學(xué)院，廣西 百色 533000;2.右江民族醫(yī)學(xué)院 臨床學(xué)院，廣西 百色 533000;3.右江民族醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，廣西 百色 533000)

薏苡莖；甲醇提取物；抗氧化性

薏苡(Coixlachryma-jobiL.)為禾本科(Gramineae)薏苡屬(CoixL.)草本植物,為常用中藥, 味甘淡，性微寒，具有健脾補(bǔ)肺、清熱利濕的功效,素有“滋補(bǔ)保健之王”的美譽(yù)，《本草綱目》中稱其乃上品養(yǎng)心藥[1]，流行病學(xué)研究顯示，中國(guó)西南地區(qū)癌癥發(fā)病率低可能與薏苡仁的食用有關(guān)[2]，20世紀(jì)60年代以來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)薏苡的化學(xué)成分及藥理活性開(kāi)展了多方面研究，并得到了多種化學(xué)成分[3]。近年來(lái)，中外學(xué)者從薏苡中分到的化合物類型包括：脂肪酸及脂、酚、生物堿類化合物、多糖類化合物等[3]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果初步表明，廣西薏苡莖可能含有多糖、黃酮、有機(jī)酸等化學(xué)成分[5]。薏苡仁谷殼(Adlay hull)的甲醇提取物顯示有DPPH自由基清除能力，且在該生物活性的跟蹤下經(jīng)過(guò)分離純化，在正丁醇萃取的部分得到6種化合物，這些化合物均顯示出較強(qiáng)的抗氧化活性[2]。薏苡莖化學(xué)成分的研究成果為薏苡莖的抗氧化性研究提供了一定的依據(jù)，在中藥藥理中發(fā)揮重要作用。目前以甲醇為溶劑來(lái)提取薏苡莖未曾看到過(guò)，為了充分開(kāi)發(fā)利用薏苡這種天然植物，探討及研究薏苡莖抗氧化活性研究有重要指導(dǎo)意義。本實(shí)驗(yàn)旨在研究薏苡莖甲醇提取物的抗氧化活性，為薏苡莖的開(kāi)發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 儀器與材料

722N可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海精科)；ZKJ-1002循環(huán)水式真空抽氣泵(上海嘉鵬科技有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器RE-52AA(上海安亭實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；HH-SA數(shù)顯恒溫水浴鍋(上海上登實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；DPPH (美國(guó)Sigma 公司)；薏苡莖采自廣西百色市西林縣。

2 方法與結(jié)果

2.1 薏苡莖甲醇提取物的提取

以烘干的薏苡莖，粉碎至粉末。稱取薏苡莖粉末100 g，加甲醇浸泡1 h，回流提取2 h,抽濾。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液減壓回收甲醇至濾液呈稠狀物為止，置于蒸發(fā)皿中蒸干。稱取0.6 g樣品，用甲醇溶解并定容至100 mL，得樣品溶液。

2.2 薏苡莖甲醇提取物抗氧化活性的測(cè)定

2.2.1 清除DPPH自由基能力

DPPH是一種穩(wěn)定的自由基，與抗氧化劑發(fā)生反應(yīng)，提供H被還原，顏色發(fā)生變化，由深紫色變?yōu)榈S色，可以用紫外可見(jiàn)分光度法定量測(cè)定。取0.5 mL新配置的DPPH溶液[c(DPPH)=6×10-4mol/L]置于10 mL的具塞比色管中，然后加入同體積不同濃度的樣品溶液，無(wú)水乙醇定容至5 mL，室溫暗光下反應(yīng)30 min，以無(wú)水乙醇調(diào)零，在517 nm處測(cè)定其吸光度A。以高濃度逐漸稀釋的方式檢測(cè)不同濃度樣品對(duì)自由基的清除率，以自由基清除率為50%時(shí)樣品的濃度(IC50)來(lái)衡量樣品對(duì)自由基的清除能力[9]。IC50越小，表明樣品清除自由基的能力越強(qiáng)。其清除率計(jì)算公式：

清除率(%)= [(A1-A2)/A1]×100%

其中A1為反應(yīng)時(shí)間t=0 min時(shí)空白吸光度，A2為反應(yīng)時(shí)間t=30 min時(shí)的吸光度。

取不同濃度的樣品溶液置于比色管中，加無(wú)水乙醇定容至5 mL，分別測(cè)其對(duì)DPPH自由基清除的作用，由圖1可以看出，隨著薏苡莖濃度的增加，對(duì)DPPH的清除作用增大，自由基清除率為51.61%時(shí)樣品的濃度(IC50)為0.3 mg/L，濃度較小，表明薏苡莖多糖清除DPPH自由基的能力較顯著。

圖1 薏苡莖提取物對(duì)DPPH自由基清除率

2.2.2 清除超氧自由基能力

采用鄰苯三酚自氧化法[9]進(jìn)行測(cè)定。具體方法如下：取0.5 mol/L、pH 8.2的Tris-HCl緩沖液4.0 mL于干燥具塞比色管中，置于25 ℃水浴中預(yù)熱20 min，分別加入不同濃度的待測(cè)品0.2 mL,后均加入2.5 mmol/L鄰苯三酚(由10 mmol/L HCl制)0.8 mL，混勻后25 ℃水浴中準(zhǔn)確反應(yīng)4 min，立即加入10 mmol/L HCl 2滴終止反應(yīng)，蒸餾水調(diào)零，在320 nm處測(cè)定吸光度A。其清除率計(jì)算公式：

清除率(%)=[1-(A1-A2)/A0]×100%

其中A0:為加鄰苯三酚但不加樣品時(shí)的吸光度；A1：為加樣品和鄰苯三酚時(shí)的吸光度；A2：為加樣品不加鄰苯三酚時(shí)的吸光度。

圖2 薏苡莖提取物對(duì)超氧自由基清除率

2.2.3 還原Fe3+能力

采用普魯士蘭法[10]測(cè)定樣品還原Fe3+能力。在系列10 mL具塞比色管中依次加入不同濃度的樣品溶液2.5 mL，2.5 mL磷酸鹽緩沖液[c(磷酸鹽緩液)=0.2 mol/L pH 6.6]和2.5 mL鐵氰化鉀(1%)，混勻后置于50 ℃水浴中反應(yīng)20 min，然后加入2.5 mL三氯乙酸(10%)，混勻后將溶液渾濁離心(3000 r/min) 10 min，取上清液2.5 mL，加入2.5 mL蒸餾水和0.5 mL 三氯化鐵(0.1%)溶液，混勻，以試劑空白作參比，在700 nm處測(cè)定吸光度值，吸光度值增加表明還原能力增強(qiáng)。

由表1可以看出，隨著提取物濃度增大，其吸光度值增加，對(duì)Fe3+還原能力增強(qiáng)。

表1 還原Fe3+能力吸光度值

3 結(jié) 論

隨著人們對(duì)健康要求的提高，食品添加劑的安全問(wèn)題成為整個(gè)社會(huì)的關(guān)注熱點(diǎn)，開(kāi)發(fā)安全有效的天然抗氧化劑是大勢(shì)所趨。植物是一種很有潛力的抗氧化劑資源，含有很多種類的抗氧化成分。植物抗氧化劑在食品、飼料、醫(yī)療保健中都有應(yīng)用。充分利用我國(guó)豐富的植物資源，從中找出安全可靠的高效天然抗氧化劑是眾望所歸[6]。

近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外對(duì)薏苡的開(kāi)發(fā)利用已逐漸加強(qiáng)，其在食品保健方面已引起注意[5,7]。植物類的中草藥因其具有藥源豐富、取材方便、節(jié)省費(fèi)用、加工簡(jiǎn)便、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，而引起越來(lái)越多人對(duì)其化合物進(jìn)行研究和開(kāi)發(fā)利用[4]。薏苡作為食用兼藥用的栽培作物，具備了較全面的營(yíng)養(yǎng)保健功能[3]。實(shí)驗(yàn)研究證明薏苡各部位均含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分[8]，隨著對(duì)薏苡化學(xué)成分及藥理作用的深入研究及我國(guó)膳食結(jié)構(gòu)由小康型向營(yíng)養(yǎng)保健型的轉(zhuǎn)變，薏苡將會(huì)在藥物及保健食品方面有著廣闊研究、開(kāi)發(fā)、應(yīng)用前景[3]。薏苡莖作為薏苡中重要的一部分，同樣有著可觀的研究前景。

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Study on Antioxidant Effect of the Extracts of Methanol from Stem of Coix lachryma-jobi L.

Lu Shanshan1, Huang Tingzhang2, Li Yuanhui2, Huang Ying2,Ma Zhongli2, Zhang Zhaoping1, Huang Suoyi3*

(1.School of Nursing; 2.School of Clinical Medicine; 3.School of Pharmacy，Youjiang Medical University for Nationalities, Baise 533000,China)

Objective: Study on antioxidant effect of the extracts of methanol from the stem of Coix lachryma-jobi L．Methods: The stem of Coix lachryma-jobi L．was extracted by methanol soaking．Clearance ability of the extracts of methanol on DPPH·and· and the reduction of Fe3+ability were measured with the spectrophotometry．Results:Extracts of stem ofCoixlachryma-jobiL.had significant scavenging effect to two kinds of radicals, moreover it had strong ability of reduction to Fe3+.Conclusion:In a certain rang ,there was an obvious dose-effect relationship between concentration and clearance rate.When the concentration increases, the two kinds of free radical clearance rate and the reduction of Fe3+ability increased.

Stem ofCoixlachryma-jobiL.; extracts of methanol；antioxidant activity

10.3969/j.issn.1006-9690.2015.01.004

2014-05-17

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81360684)；廣西自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2011GXNSFA018046)；廣西中醫(yī)藥科技專項(xiàng)資助課題(GZKZ10-128)；廣西教育廳課題(201106LX425)；廣西中醫(yī)藥管理局課題(gzzc1047)；廣西醫(yī)學(xué)科學(xué)實(shí)驗(yàn)中心開(kāi)放基金專項(xiàng)資助項(xiàng)目(KFJJ2011-04)。

盧善善，女，現(xiàn)就讀于右江民族醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)專業(yè)。研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)、藥物化學(xué)。E-mail：18777615250@163.com

*通訊作者:黃鎖義，男，教授，碩士研究生導(dǎo)師。研究方向：天然產(chǎn)物化學(xué)、藥物化學(xué)、食品衛(wèi)生、中草藥與植物化學(xué)。E-mail：huangsuoyi@163.com

R282.71

A

1006-9690(2015)01-0012-03