胡北俠，許傳田，楊少華，黃艷艷，張 琳，黃慶華，霍亞飛，張 偉，張秀美*

(1.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250100；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，泰安 271018)

山東地區(qū)雞傳染性支氣管炎病毒抗原相關(guān)性和血清分型

胡北俠1，許傳田1，楊少華1，黃艷艷1，張 琳1，黃慶華1，霍亞飛2，張 偉1，張秀美1*

(1.山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 山東省畜禽疫病防治與繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，濟(jì)南 250100；2.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，泰安 271018)

為進(jìn)一步明確山東地區(qū)雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)的流行病學(xué)，對(duì)IBV分離株之間以及與疫苗株之間的抗原相關(guān)性進(jìn)行了分析。分別制備了3個(gè)疫苗株(4/91、H120和Ma5)和18個(gè)分離株的單因子陽性血清，通過雞胚交叉中和試驗(yàn)測(cè)定了陽性血清對(duì)同源病毒和異源病毒的中和效價(jià)，計(jì)算了不同毒株之間的抗原相關(guān)系數(shù)(R值)，并根據(jù)R值進(jìn)行血清分型。結(jié)果顯示，3個(gè)疫苗株和18個(gè)分離株可分為5個(gè)血清型。疫苗株4/91屬于血清Ⅰ型，H120、Ma5與2個(gè)分離株(SDWF0608和SDLY0701)屬于同一血清型，分離株SDZB0808與SDLY0702、CK/CH/SD08/007和CK/CH/SD09/001等15個(gè)毒株為同一血清型，CK/CH/SD09/006和CK/CH/SD10/001分別與其他3和6個(gè)分離株組成兩個(gè)血清型。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，部分IBV毒株之間表現(xiàn)單向中和反應(yīng)性，屬于同一血清型的IBV毒株之間抗原相關(guān)性可能存在明顯差異。本研究結(jié)果一方面表明IBV毒株之間復(fù)雜的抗原相關(guān)性，另一方面顯示IBV流行株與3個(gè)疫苗株之間抗原性存在明顯差異。

雞傳染性支氣管炎病毒；交叉中和試驗(yàn)；抗原相關(guān)性；血清型

雞傳染性支氣管炎(infectious bronchitis，IB)是嚴(yán)重危害世界養(yǎng)禽業(yè)的一種高度接觸性傳染病，病原是禽傳染性支氣管炎病毒(infectious bronchitis virus，IBV)。IBV為單股正鏈RNA病毒，很容易通過基因突變、插入、缺失和重組等分子機(jī)制產(chǎn)生新的變異株[1-3]。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果，山東地區(qū)近年來IBV流行株的基因型為QX，同時(shí)存在Mass和TC07-2基因型毒株[4-5]。疫苗免疫是預(yù)防IBV感染的主要技術(shù)措施之一。目前，包括H120在內(nèi)的多個(gè)疫苗株在山東地區(qū)廣泛應(yīng)用，但免疫雞群仍然不斷發(fā)生IBV的感染，提示IBV疫苗株與流行株之間可能存在明顯的抗原性差異。因此，本研究通過交叉中和試驗(yàn)對(duì)IBV流行株的抗原性進(jìn)行分析，以明確IBV流行株之間以及流行株與疫苗株之間的抗原相關(guān)性，以進(jìn)一步豐富IBV的流行病學(xué)信息并為此病的有效防控提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病毒

雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)疫苗株H120購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，4/91和Ma5購自英特威公司(Nobillis)，由本實(shí)驗(yàn)室鑒定保存。18個(gè)IBV流行株均是從山東地區(qū)發(fā)病雞群分離鑒定，相關(guān)背景資料見表1和本實(shí)驗(yàn)室相關(guān)研究報(bào)道[4-5]。

1.2 SPF雞胚和SPF雞

SPF雞和9～11日齡SPF雞胚均購自山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽研究所SPF雞研究中心。

1.3 IBV單因子陽性血清的制備

選擇3個(gè)IBV常用疫苗株(H120、Ma5和4/91)和18個(gè)分離株，參考文獻(xiàn)[6]方法，制備免疫用IBV滅活抗原，分別免疫4～5周齡的SPF雞，在負(fù)壓隔離器內(nèi)飼養(yǎng)，制備各個(gè)IBV毒株的單因子陽性血清。

1.4 雞胚交叉血清中和試驗(yàn)

根據(jù)文獻(xiàn)[6]、文獻(xiàn)[7]方法，測(cè)定3個(gè)IBV疫苗株和18個(gè)分離株的病毒滴度(EID50)，采用固定病毒稀釋血清的方法(β-微量法)進(jìn)行雞胚交叉中和試驗(yàn)。陽性血清進(jìn)行2倍倍比稀釋，每個(gè)稀釋度血清分別與等體積200 EID50的病毒液混勻，室溫作用60 min后接種9～11日齡SPF雞胚，0.2 mL·胚-1，每稀釋度接種5枚，置37 ℃培養(yǎng)至18日齡，棄去24 h內(nèi)死亡雞胚，根據(jù)雞胚死亡及病變進(jìn)行結(jié)果判定，以能使50%以上雞胚得到保護(hù)的血清最高稀釋倍數(shù)為血清的中和效價(jià)。首先測(cè)定陽性血清對(duì)同源病毒的中和效價(jià)，然后分別測(cè)定陽性血清對(duì)其他IBV毒株的中和效價(jià)。

1.5 IBV抗原相關(guān)系數(shù)的計(jì)算和血清分型

2 結(jié) 果

2.1 IBV病毒滴度(EID50)測(cè)定

3個(gè)IBV疫苗株H120、Ma5和4/91以及18個(gè)IBV分離株病毒滴度測(cè)定結(jié)果見表1。

2.2 雞胚交叉血清中和試驗(yàn)

3個(gè)IBV疫苗株和18個(gè)分離株單因子陽性血清對(duì)同源病毒的中和效價(jià)以及它們之間交叉中和試驗(yàn)結(jié)果見表2?？傮w而言，大多數(shù)IBV陽性血清對(duì)同源病毒的中和效價(jià)比對(duì)異源病毒的中和效價(jià)高。在3個(gè)IBV疫苗株之間，4/91不能被H120和Ma5血清中和，H120和Ma5也不能被4/91血清中和，H120和Ma5之間能夠交叉中和。

在18個(gè)IBV分離株與3個(gè)疫苗株之間，8/18、9/18和11/18的分離株可以分別被4/91、H120和Ma5陽性血清中和。其中3個(gè)分離株(CK/CH/SD09/005、CK/CH/SD08/007和SDIB702/2012)可以同時(shí)被4/91、H120和Ma5血清不同程度地中和，3個(gè)分離株(CK/CH/SD09/006、CK/CH/SD10/003和SDWF0711)可以被4/91和Ma5血清中和，4個(gè)分離株(SDWF0608、SDSG0801、SDIB669/2012和SDZB0808)可以被H120和Ma5血清中和。CK/CH/SD10/001和CK/CH/SD10/002僅被4/91血清中和，SDTA06111和SDLY0701僅被H120血清中和，SDLY0702僅被Ma5血清中和。而3個(gè)分離株(CK/CH/SD08/006、CK/CH/SD09/001和CK/CH/SD09/003)與這3個(gè)疫苗株血清反應(yīng)均為陰性。

表1 18個(gè)IBV分離株和3個(gè)疫苗株分離時(shí)間、基因型和病毒滴度

Table 1 Year，genotppe and viral titre of eighteen IBV isolates and three vaccine strains

毒株Strain分離時(shí)間Year基因型Genotype病毒滴度/(EID50·0.2mL-1)Virustiter(EID50·0.2mL-1)4/91-4/9110-5.5H120-Mass10-5.5Ma5-Mass10-5.2SDTA061112006Mass10-6.1SDWF06082006QX10-5.0SDLY07012007QX10-5.6SDLY07022007QX10-6.2SDWF07112007QX10-5.3SDSG08012008QX10-5.4SDZB08082008QX10-6.0CK/CH/SD08/0062008QX10-5.8CK/CH/SD08/0072008QX10-5.5CK/CH/SD09/0012009QX10-6.0CK/CH/SD09/0022009QX10-5.2CK/CH/SD09/0052009TC07-210-6.2CK/CH/SD09/0062009QX10-6.2CK/CH/SD10/0012010QX10-6.0CK/CH/SD10/0022010QX10-5.3CK/CH/SD10/0032010QX10-5.5SDIB669/20122012QX10-5.3SDIB702/20122012QX10-5.3

-.IBV疫苗株 -.IBV vaccine strain

在18個(gè)IBV分離株中， 5個(gè)分離株(SDZB0808、CK/CH/SD09/001、CK/CH/SD09/003、CK/CH/SD10/002和CK/CH/SD10/003)的陽性血清可以中和3個(gè)疫苗株和所有分離株，且對(duì)大部分異源病毒的中和效價(jià)與對(duì)同源病毒的中和效價(jià)相同。

此外，交叉中和試驗(yàn)結(jié)果顯示，無論疫苗株與分離株還是各分離株之間，兩個(gè)IBV毒株之間經(jīng)常表現(xiàn)單向交叉中和反應(yīng)。如4/91與SDZB0808之間，SDZB0808與4/91陽性血清反應(yīng)陰性，但是4/91可以被SDZB0808血清中和。再如分離株CK/CH/SD09/005陽性血清不能中和SDWF0608、CK/CH/SD08/006、CK/CH/SD08/007和SD/CH/SD09/001，但CK/CH/SD09/005可以被這4個(gè)毒株的陽性血清中和。

2.3 IBV抗原相關(guān)系數(shù)與血清型分析

表4 18個(gè)IBV分離株和3個(gè)疫苗株血清分型

Table 4 Serotype of eightteen IBV isolates and three vaccine strains

血清型Serotype參考株Referencestrain抗原相關(guān)系數(shù)Antigenicrelatednessvalues同一血清型的毒株IBVstrainsinthesameserotypeⅠ4/91R≥80%4/91ⅡH120R≥80%H12025%≤R<80%SDWF0608(Ⅱ,Ⅲ),SDLY0701(Ⅱ,Ⅲ),Ma5ⅢSDZB0808R≥80%SDLY0701(Ⅱ,Ⅲ),SDLY0702,CK/CH/SD08/007,CK/CH/SD09/001(Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ),CK/CH/SD09/003(Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ),CK/CH/SD10/003(Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ),SDIB669/2012,SDIB702/2012(Ⅲ,Ⅴ)25%≤R<80%SDTA06111(Ⅲ,Ⅴ),CK/CH/SD09/005,SDWF0608(Ⅱ,Ⅲ),SDSG0801,CK/CH/SD10/002,CK/CH/SD08/006,SD-WF0711(Ⅲ,Ⅴ)ⅣCK/CH/SD09/00625%≤R<80%CK/CH/SD09/001(Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ),CK/CH/SD09/003(Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ),CK/CH/SD10/003(Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ)ⅤCK/CH/SD10/00125%≤R<80%SDTA06111(Ⅲ,Ⅴ),SDWF0711(Ⅲ,Ⅴ),CK/CH/SD09/001(Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ),CK/CH/SD09/003(Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ),CK/CH/SD10/003(Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ),SDIB702/2012(Ⅲ,Ⅴ)

SDZB0808與SDTA06111、CK/CH/SD09/005和SDWF0608等15個(gè)分離株之間抗原相關(guān)系數(shù)為25%～100%，屬于同一血清型(Ⅲ型)。其中8個(gè)IBV分離株(SDLY0701、SDLY0702、CK/CH/SD08/007、CK/CH/SD09/001、CK/CH/SD09/003、CK/CH/SD10/003、SDIB669/2012和SDIB702/2012)與SDZB0808抗原相關(guān)系數(shù)為100%； SDZB0808與另外7個(gè)分離株(SDTA06111、SDWF0608、CK/CH/SD09/005、SDSG0801、CK/CH/SD10/002、CK/CH/SD08/006和SDWF0711)抗原相關(guān)系數(shù)為25%～50%，屬于同一血清型的不同亞型。

此外，CK/CH/SD09/006和CK/CH/SD10/001兩個(gè)毒株之間相關(guān)系數(shù)為3%，屬于不同血清型。它們與SDZB0808抗原相關(guān)系數(shù)分別為13%和18%，與SDZB0808血清也不同。CK/CH/SD09/006與CK/CH/SD09/001和 CK/CH/SD09/003兩個(gè)毒株相關(guān)系數(shù)均為35%，與CK/CH/SD10/003相關(guān)系數(shù)為25%，屬于同一血清型(Ⅳ型)的不同亞型。CK/CH/SD10/001與SDWF0711、SDTA06111、CK/CH/SD09/001、CK/CH/SD09/003、CK/CH/SD10/003和SDIB702/2012相關(guān)系數(shù)為25%～70%，屬于同一血清型(Ⅴ型)的不同亞型。不過需要指出的是，CK/CH/SD09/006、CK/CH/SD10/001與SDZB0808的抗原相關(guān)性分別為13%和18%，SDZB0808陽性血清對(duì)CK/CH/SD09/006、CK/CH/SD10/001兩個(gè)毒株的中和效價(jià)均與同源效價(jià)相同，如果按照J(rèn).B.Brooksby血清型劃分標(biāo)準(zhǔn)(R<10%為不同血清型)或IBV單向交叉中和試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行血清分型[6-7，11]，這兩個(gè)毒株也可以與SDZB0808劃入同一血清型。

值得注意的是，同一個(gè)IBV可能同時(shí)屬于多個(gè)血清型，如SDWF0608、SDLY0701同時(shí)屬于以H120和SDZB0808為參考株的Ⅱ型和Ⅲ型，此外還有SDTA06111(Ⅲ，Ⅴ)、SDWF0711(Ⅲ，Ⅴ)和SDIB702/2012(Ⅲ，Ⅴ)等。另一方面，屬于同一血清型的IBV之間抗原相關(guān)系數(shù)也可能差別較大，如與SDZB0808抗原相關(guān)系數(shù)均為100%的8個(gè)毒株之間(表5)，SDLY0701與SDLY0702和SDIB702/2012抗原相關(guān)系數(shù)分別為13%和35%，但與其他5個(gè)毒株之間抗原相關(guān)性為0；而CK/CH/SD09/001、CK/CH/SD09/003、CK/CH/SD10/003和SDIB669/2012等4個(gè)毒株之間抗原相關(guān)系數(shù)均為100%。與此類似，同屬于Ⅱ型的SDWF0608與Ma5抗原相關(guān)系數(shù)均為25%，但SDLY0701與Ma5之間相關(guān)系數(shù)為0。

基于S1基因序列的基因分型與血清分型結(jié)果不一致。如Mass基因型分離株SDTA06111與H120、Ma5抗原相關(guān)性分別為13%和0，屬于不同的血清型；而與QX基因型分離株SDLY0612、SDZB0808、CK/CH/SD09/001、CK/CH/SD10/001和CK/CH/SD10/002的抗原相關(guān)性為25%～70%， 屬于同一血清型的不同亞型。TC07-2基因型分離株CK/CH/SD09/005與QX基因型分離株SDLY0612、SDZB0808和SDIB702/2012之間抗原相關(guān)系數(shù)為35%～50%，屬于同一血清型的不同亞型。

表5 與SDZB0808抗原相關(guān)系數(shù)100%的8個(gè)毒株之間抗原相關(guān)系數(shù)

Table 5 Antigenic relatedness values of 8 IBV isolates showingRvalues of 100% with SDZB0808

%

3 討 論

3個(gè)疫苗株之間交叉中和試驗(yàn)結(jié)果顯示，4/91與H120/Ma5之間不能交叉中和，抗原相關(guān)系數(shù)均為0，說明4/91與H120/Ma5之間沒有共同的中和性抗原表位，但是3/18的IBV分離株(CK/CH/SD09/005、CK/CH/SD08/007和SDIB702/2012等)可以同時(shí)被4/91、H120和Ma5陽性血清中和，表明這些IBV分離株同時(shí)具有4/91、H120和Ma5部分中和性抗原表位。其中5個(gè)分離株(SDZB0808、CK/CH/SD09/001、CK/CH/SD09/003、CK/CH/SD09/002和CK/CH/SD10/003)陽性血清可以中和3個(gè)疫苗株和所有分離株，且對(duì)大部分異源病毒的中和效價(jià)與同源效價(jià)相同，表明這5個(gè)毒株的抗原譜較廣，能夠誘導(dǎo)交叉中和反應(yīng)抗體。

部分IBV毒株之間一方面表現(xiàn)單向交叉中和反應(yīng)，另一方面屬于同一血清型的IBV毒株之間抗原相關(guān)性可能存在明顯差異，表明IBV抗原的復(fù)雜性。這些特性也見于之前的相關(guān)研究，S.P.Mondal等研究發(fā)現(xiàn)IBV分離株 CU82805與DE072之間S1基因核苷酸相似性為96%， CU82805陽性血清可以中和DE072，但是CU82805不能被DE072陽性血清中和[10]。其他學(xué)者在對(duì)IBV進(jìn)行血清分型時(shí)也發(fā)現(xiàn)了IBV毒株之間復(fù)雜的抗原關(guān)系。B.S.Cowen等通過單向雞胚交叉中和試驗(yàn)對(duì)12株IBV進(jìn)行分型時(shí)發(fā)現(xiàn)屬于同一血清型的不同毒株之間抗原相關(guān)性存在差異[12]。R.W.Winterfield等發(fā)現(xiàn)同一血清型的不同毒株與其他血清型毒株之間的抗原相關(guān)性存在明顯差異[13]。

雖然IBV中和性抗原表位位于S1蛋白上，但是基于抗原相關(guān)系數(shù)的IBV血清分型與S1基因分型結(jié)果并不一致。如SDTA06111和疫苗株H120、Ma5S1基因處于同一進(jìn)化分支(Mass基因型)，但是SDTA06111與H120、Ma5屬于不同血清型，而與QX基因型SDZB0808屬于相同血清型的不同亞型。再如CK/CH/SD09/005屬于TC07-2基因型，但與QX基因型毒株SDZB0808抗原相關(guān)性為50%，屬于同一血清型的不同亞型。M.Li等采用雞胚氣管環(huán)單向交叉中和試驗(yàn)將廣西26個(gè)IBV分離株和3個(gè)疫苗(4/91、H120和Ma5)分成7個(gè)血清型，同時(shí)對(duì)其S1基因高變區(qū)(HVR1)進(jìn)行遺傳進(jìn)化分析，結(jié)果顯示血清分型與基因分型結(jié)果符合率僅為57.7%[6]。IBV血清分型與S1基因分型結(jié)果不一致的原因可能在于：(1)S1蛋白上個(gè)別氨基酸的突變可能導(dǎo)致中和性抗原表位的改變，從而導(dǎo)致血清型的改變[14]；(2)雖然IBV中和性抗原表位主要存在于S1蛋白上，但其S2蛋白上也存在中和性抗原表位[15]。S1基因分型和血清分型分別反映了IBV在基因序列和抗原決定簇方面的差異，二者分類方法不同，其不一致性是可以理解的，類似的現(xiàn)象也見于人乙型肝炎病毒[16]。但C.H.Wang等對(duì)9個(gè)臺(tái)灣分離株通過雞胚交叉中和試驗(yàn)進(jìn)行血清分型結(jié)果與S1基因分型結(jié)果一致[7]，原因可能在于毒株的數(shù)量有限。

目前，IBV中和試驗(yàn)采用的培養(yǎng)系統(tǒng)有雞胚腎細(xì)胞空斑減少試驗(yàn)、雞胚氣管環(huán)和雞胚中和試驗(yàn)。由于大多數(shù)IBV分離株在雞胚腎細(xì)胞上不能產(chǎn)生明顯的病變，多數(shù)學(xué)者采用雞胚氣管環(huán)或雞胚中和試驗(yàn)進(jìn)行IBV抗原性分析。在進(jìn)行IBV血清分型時(shí)尚沒有統(tǒng)一的參考標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于單向交叉中和試驗(yàn)，B.S.Cowen等認(rèn)為如果32～320 EID50/TCID50的IBV毒株A能被20單位的毒株B陽性血清中和，就認(rèn)為這兩個(gè)毒株是一個(gè)血清型[12]，而M.Li等認(rèn)為100 TOC-ID50的IBV毒株A被毒株B陽性血清中和的效價(jià)達(dá)到毒株B的同源效價(jià)，就認(rèn)為這兩個(gè)毒株血清型相同[6]。對(duì)于雙向交叉中和試驗(yàn)，有的學(xué)者認(rèn)為兩個(gè)毒株抗原相關(guān)系數(shù)(R值)小于5%為不同血清型[7]，有的學(xué)者認(rèn)為R值小于10%為不同血清型[11]，本研究采用雙向雞胚交叉中和試驗(yàn)，參考楊漢春的方法，采用R小于25%為不同血清型的劃分標(biāo)準(zhǔn)[9]。由于同一血清型IBV毒株之間可能存在抗原性差異以及不同血清型毒株之間的抗原交叉性，雙向交叉中和試驗(yàn)更有助于明確毒株之間的抗原相關(guān)性。另一方面，由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行血清分型采用的參考株不同，導(dǎo)致彼此的研究結(jié)果沒有可比性，大大限制了血清分型在IBV流行病學(xué)研究中的應(yīng)用。因此，有必要建立用于IBV流行株血清分型的標(biāo)準(zhǔn)參考株和陽性血清，使IBV的血清分型結(jié)果具有更為廣泛的流行病學(xué)意義和參考價(jià)值。

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(編輯 白永平)

Antigenic Relatedness and Serotype of Infectious Bronchitis Virus Isolated in Shandong Province

HU Bei-xia1，XU Chuan-tian1，YANG Shao-hua1，HUANG Yan-yan1，ZHANG Lin1，HUANG Qing-hua1，HUO Ya-fei2，ZHANG Wei1，ZHANG Xiu-mei1*

(1.ShandongKeyLabofAnimalDiseaseControlandBreeding，InstituteofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，ShandongAcademyofAgriculturalSciences，Jinan250100，China；2.CollegeofAnimalScience，ShandongAgriculturalUniversity，Tai’an271018，China)

To clarify the epidemiology of infectious bronchitis virus (IBV) in Shandong province，the antigenic difference among field isolates and vaccine strains was studied.The monovalent antisera against 3 commercial IBV vaccine strains (H120，Ma5 and 4/91) and 18 field isolates were prepared in SPF chickens.The cross viral neutralization (VN) test was performed in SPF chicken embryos to determine the endpoint titers for homologous and heterologous neutralization.The serotype of IBV strains was determined based on antigenic relatedness values (ARV) calculated by the formulaR=r1×r2.As a result，vaccine strain 4/91 was belong to serotype I.Vaccine strain H120，Ma5 and two isolates (SDWF0608 and SDLY0701)were grouped in the same serotype.SDZB0808 and the other 15 isolates were grouped in the same serotype.CK/CH/SD09/006 and CK/CH/SD10/001 were in 2 other different serotypes，together with other 3 or 6 IBV isolates，respectively.Moreover，some IBV strains showed one-way neutralizing reaction with others and some IBV strains in the same serotype had different ARVs.The resultes indicate that the antigenicity of IBV strains is very complicated and there are evident antigenic difference between IBV isolates and 3 vaccine strains.

infectious bronchitis virus；cross neutralization test；antigenic relatedness value；serotype

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.015

2014-08-21

現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金(CARS-42-Z12)

胡北俠(1974-)，女，江蘇東海人，博士，副研究員，主要從事禽病綜合防控技術(shù)研究，Tel:0531-88970857，E-mail：hubeixia917@sina.com

*通信作者：張秀美(1956-)，女，江蘇徐州人，研究員，主要從事禽病綜合防控技術(shù)研究，E-mail：zxm820410@163.com

S852.659.6

A

0366-6964(2015)04-0615-09