張凱輝 段行武

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院東區(qū)皮膚科，北京，101100； 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院皮膚科，北京，100007)

“消銀解毒飲”對銀屑病血熱證外周血淋巴細胞調(diào)控作用研究

張凱輝1段行武2

(1 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院東區(qū)皮膚科，北京，101100； 2 北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院皮膚科，北京，100007)

目的：觀察正常人及銀屑病患者應(yīng)用消銀解毒飲治療前后外周血T淋巴細胞及共刺激因子表達的變化，探討“消銀解毒飲”對銀屑病血熱證外周血淋巴細胞調(diào)控作用。方法：治療組給予連續(xù)8周消銀解毒飲治療，用流式細胞術(shù)檢測，與對照組相互比較外周血T細胞亞群及共同刺激分子CD28、CD80、CD86的表達情況。結(jié)果：治療組治療后皮損評分降低；治療前后與正常人相比CD3+、CD4+細胞及CD4+/CD8+降低，CD8+細胞升高；CD28療前高于、療后低于正常組；CD86治療前后均明顯高于正常組；CD80正常組與治療前均無明顯統(tǒng)計學(xué)意義，治療后有下降的趨勢。治療組治療前、后外周血T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和共刺激因子CD28、CD80、CD86均無明顯的統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論：消銀解毒飲臨床療效肯定；銀屑病患者外周血T細胞亞群及共刺激因子的表達存在異常；患者臨床癥狀的好轉(zhuǎn)與外周血T細胞亞群及共刺激因子表達的改變是否平行相關(guān)尚不確定。

消銀解毒飲；銀屑病血熱證；T淋巴細胞；共刺激因子

銀屑病中醫(yī)屬“白疕”“松皮癬”“干癬”等范疇，是一種常見的慢性炎癥性增生性皮膚病。關(guān)于其病機，《諸病源候論》最早記錄為：“此由風(fēng)濕邪氣，客于膝理，復(fù)值寒濕，與血氣相搏，則血氣否澀，發(fā)次疾也?！庇纱丝闯?，對本病的認識反映出內(nèi)因(血氣)，外因(風(fēng)、寒、濕)致病的學(xué)術(shù)思想。近現(xiàn)代醫(yī)家多從“血熱”“風(fēng)燥”“熱毒”等論治，認為本病以熱為主，病位在血分，血熱是發(fā)病的關(guān)鍵因素和主要根源。關(guān)于其治療原則，中醫(yī)多從清熱涼血、祛風(fēng)養(yǎng)血、滋陰潤燥等論證。自20世紀90年代初以來，對銀屑病發(fā)病機制的研究取得了重大突破，人們逐漸認識到銀屑病是多基因遺傳背景和環(huán)境等多因素作用下的T細胞介導(dǎo)的免疫異常性疾病[1]。一些針對T細胞的治療，如應(yīng)用抗CD4單克隆抗體、環(huán)孢素及白介素融合毒素直接清除活性T細胞或抑制其活性，以及阻斷細胞因子產(chǎn)生及其作用的發(fā)揮，均可有效治療銀屑病[2]，也提示了T細胞是銀屑病免疫發(fā)病環(huán)節(jié)的主要介導(dǎo)者。

東直門醫(yī)院皮膚科金起鳳教授為全國中醫(yī)藥專家，依據(jù)其創(chuàng)立的經(jīng)驗方“消銀解毒湯”而研制的“消銀解毒飲”，由水牛角、牡丹皮、赤芍、金銀花、蚤休、生甘草、全蝎等組成，功效為涼血清熱，解毒熄風(fēng)，已在本科臨床應(yīng)用多年，對銀屑病血熱證患者療效肯定。本研究采用流式細胞術(shù)方法，通過比較銀屑病患者治療前后與正常對照組外周血T細胞亞群及共同刺激分子CD28、CD80、CD86的表達情況，探討“消銀解毒飲”對銀屑病血熱證外周血淋巴細胞調(diào)控作用。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 鼠抗人FITC-CD4(No:555346)、鼠抗人PE-CD8(No:555367)、鼠抗人PE-Cy5-CD3(No:555334)、鼠抗人FITC-IgGI(No:555748)、鼠抗人FITC-CD28(No:555728)、鼠抗人FITC-CD80(No:557226)、鼠抗人FITC-CD86(No：555657)購于美國BD公司。流式細胞檢測劑購于北京市晶美基因谷科技有限公司。FACS Calibur型流式細胞儀為美國BD公司產(chǎn)品。

1.2 分組及檢測方法 治療組為30例進行期尋常型銀屑病患者(經(jīng)臨床和部分病理確診)，根據(jù)《中藥新藥治療白疕的臨床研究指導(dǎo)原則》和顧伯康主編的《中醫(yī)外科學(xué)》第1版，中醫(yī)辨證符合尋常型銀屑病血熱證型[3-4]。對照組為20例健康人，2組在年齡、性別構(gòu)成上無統(tǒng)計學(xué)意義。臨床療效評價以皮損情況的PASI評分為標(biāo)準。治療組給予消銀解毒飲(東直門醫(yī)院制劑室提供)100 mL/瓶，口服，每次50 mL，2次/d，連續(xù)用藥4周為1個療程，連續(xù)觀察2個療程。

流式細胞術(shù)檢測治療組治療前、后以及20名健康自愿檢查人員外周血中T細胞及共刺激因子的表達。治療組治療前、治療組治療后與對照組均抽取肘靜脈血2 mL，置于肝素抗凝管，2 h內(nèi)送檢。測定T細胞亞群及淋巴細胞CD28、CD80、CD86的表達情況。

2 結(jié)果

2.1 治療前后皮損PASI評分比較 經(jīng)t檢驗可得，30例患者治療前后皮損PASI評分顯著下降，結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見表1。

表1 患者治療前后PASI評分比較

2.2 治療前后外周血T細胞亞群及共刺激因子檢測結(jié)果比較 30例患者外周血T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值和共刺激因子CD28、CD80、CD86在治療前后結(jié)果均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表2。

表2 患者治療前后外周血T細胞亞群及共刺激因子檢測結(jié)果比較±s)

2.3 治療組治療前與正常組外周血T細胞亞群及共刺激因子檢測結(jié)果比較 30例患者治療前與20例對照組相比，CD4+治療前明顯低于正常組(P<0.01)，CD8+治療前明顯高于正常組，CD4+/CD8+治療前明顯低于正常組，CD28治療前明顯低于正常組，CD86治療前明顯高于正常組，CD3+、CD8+正常組與治療前均無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表3。

表3 治療組治療前與對照組外周血T細胞亞群及共刺激因子檢測結(jié)果比較±s)

2.4 治療組治療后與正常組外周血T細胞亞群及共刺激因子檢測結(jié)果比較 30例患者治療后與正常組對比，CD3+與CD4+治療后低于正常組，CD8+治療后高于正常組，CD4+/CD8+治療后低于正常組，CD28治療后低于正常組，CD86治療后明顯高于正常組，CD80正常組與治療后無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果見表4。

表4 治療組治療后與對照組外周血T細胞亞群及共刺激因子檢測結(jié)果比較±s)

3 討論

本研究結(jié)果顯示，消銀解毒飲對尋常型銀屑病血熱型治療后皮損評分降低；患者治療前后與正常人相比T細胞亞群CD3+、CD4+細胞及CD4+/CD8+比值降低，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.O5)，而CD8+細胞升高，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。CD28治療前高于正常組，而治療后CD28低于正常組。CD86治療前后均明顯高于正常組(P<0.05)，CD80正常組與治療前均無明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，但治療后有下降的趨勢(P<0.05)。30例銀屑病患者外周血T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值和共刺激因子CD28、CD80、CD86在治療前后結(jié)果均無明顯的統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

免疫學(xué)發(fā)病機制一直都是銀屑病的研究熱點。銀屑病動物模型的建立及T淋巴細胞在真皮和表皮的浸潤都有力證明了銀屑病是一個由T淋巴細胞介導(dǎo)的自體免疫性疾病[5]?，F(xiàn)有研究證實，T細胞活化是銀屑病關(guān)鍵的發(fā)病機制，T淋巴細胞通過信號刺激活化或通過非抗原依賴性方式活化,由活化后的T淋巴細胞通過特殊的方式或途徑遷移至病變部位，活化的T淋巴細胞釋放大量的細胞因子進而引發(fā)角質(zhì)形成細胞的過度表達及異常分化。

關(guān)于銀屑病外周血與皮損中的T細胞亞群的研究提示，銀屑病的外周血T淋巴細胞處于活化狀態(tài)，而抗原提呈細胞的活性增高可激活細胞免疫的發(fā)生，天然殺傷細胞與銀屑病的發(fā)病也有一定關(guān)系。韓義香[6]等對銀屑病患者外周血T細胞及其亞群的研究顯示，銀屑病患者外周血CD3+、CD4+細胞及CD4+/CD8+比值顯著降低，而CD8+細胞升高，提示銀屑病患者Th細胞明顯減少，可能為循環(huán)中的T細胞浸潤到銀屑病皮損內(nèi)或T細胞在干細胞水平即有損傷引起。Ferenczi[7]的研究也顯示銀屑病患者外周血中CD4+T細胞比例遠低于正常人，而CD8+T細胞比例遠高于正常人，T細胞亞群CD4+T細胞和CD8+T細胞的比例失衡、細胞免疫狀態(tài)的改變影響著銀屑病皮損的發(fā)生和發(fā)展，顯示T淋巴細胞在銀屑病的發(fā)病過程中確實起到重要的作用。

CD4+T細胞是最主要的免疫調(diào)節(jié)細胞，包括Thl和Th2，分別介導(dǎo)細胞免疫應(yīng)答和體液免疫應(yīng)答。本實驗顯示外周血CD4+細胞上CD80、CD86及T細胞CD28表達跟正常對照組相比明顯上調(diào)，且與病情嚴重程度呈正相關(guān)。Nickoloff[8]研究顯示，CD80、CD86在正常人表皮和真皮內(nèi)不表達或少表達，在銀屑病皮損中有較強的表達，相對正常皮膚均有明顯的上調(diào)，CD28、CD80、CD86是免疫網(wǎng)絡(luò)中主要的效應(yīng)分子，CD28與APC表面的CD86結(jié)合產(chǎn)生的共刺激信號，誘導(dǎo)其他共刺激分子的表達，相互作用進一步上調(diào)T細胞活性，放大T細胞的免疫效應(yīng)。Gottlieb[9]報道用單劑量IDEC_114(一種抗CD80單抗)治療24例中、重度慢性斑塊型銀屑病,結(jié)果斑塊變平，皮損內(nèi)T細胞數(shù)目下降。

東直門醫(yī)院皮膚科對消銀解毒飲治療銀屑病的前期研究顯示，瞿幸[10]等用消銀解毒飲治療銀屑病血熱證，對照組則服用復(fù)方青黛膠囊，治療8周后的結(jié)果顯示皮損PASI積分治療組顯著低于對照組，綜合療效、總顯效率治療組明顯高于對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義。段行武[11]的實驗研究表明，消銀解毒飲除通過免疫調(diào)節(jié)而發(fā)揮其治療作用外，還可通過對角質(zhì)形成細胞過度增殖的直接抑制及誘導(dǎo)其凋亡，抑制真皮微血管的異常增生而發(fā)揮治療作用。

研究表明，消銀解毒飲治療銀屑病血熱證，使患者皮損癥狀減輕，臨床療效顯著；銀屑病患者與正常人比較，外周血T細胞亞群及共刺激因子的表達存在異常，提示銀屑病有可能是一種T細胞介導(dǎo)的疾病，銀屑病患者存在細胞免疫的異常。本次實驗銀屑病患者服用消銀解毒飲治療8周后外周血T細胞亞群及共刺激因子的表達未出現(xiàn)明顯變化，故未表明銀屑病患者治療8周后臨床癥狀的好轉(zhuǎn)與外周血T細胞亞群及共刺激因子表達情況的改善是否存在平行相關(guān)性。消銀解毒飲對銀屑病患者外周血T細胞亞群及共刺激因子表達的調(diào)節(jié)作用有待于更進一步的研究。

[1]Lowes MA,Lew W,Krueger JG.Current concepts in the immunopathogenesis of psoriasis[J].Dermatol Clin，2004,22(4):34-369.

[2]鄭筱萸.中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2002:299.

[3]顧伯康.中醫(yī)外科學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社,1986:149.

[4]Gordon KB,McCormick TS.Evolution of biologic therapies for the treatment of psoriasis[J].Skinmed,2003Sep-Oct，2(5):286-94.

[5]Braddock M.Editorial：bio-markers as tools for discovery of new psoriasis therapies[J].Curr Drug Discov Techno1，2012 Mar，9(1):1.

[6]韓義香,楊毅，章圣輝,等.銀屑病患者外周血T細胞亞群及B7/CD28的表達.中國麻風(fēng)皮膚病雜志,2007,23(10):908-909.

[7]Ferenczi K，Burack L，Pope M，et al.CD69，HLA- DR and the IL-2R identify persistently activated T cells in psoriasis vulgaris lesional skin：blood and skin comparisons by flow cytometry[J].J Autoimmun，2000 Feb，14(1):63-78.

[8]Nickoloff B J，Mitra R S，Lee K et al.Discordant expression of CD28 ligands，BB-1 and B7 on keratinocytes in vitro and psoriatic; cells in vivo.Am J Pathol,1993 Apr;142(4):1029-40.

[9]Gottlieb AB，Lebwohl M，Totoritis MC，et al.Clinical and histologic response to single-dose treatment of moderate to severe psoriasis with an anti-CD80 monoclonal antibody.J Am Acad Dermatol.2002 Nov，47(5):692-700.

[10]瞿幸,張曉紅.消銀解毒飲治療銀屑病血熱證85例臨床研究[J].中醫(yī)雜志,2001，42(2):103-104.

[11]段行武.消銀解毒飲治療尋常型銀屑病的細胞生物學(xué)研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué),2007.

(2014-11-04收稿 責(zé)任編輯：徐穎)

Study on Regulation Role of Xiaoyinjiedu Drink on Peripheral Blood T-lymphocytes in Blood-heat Syndrome of Psoriasis Patients

Zhang Kaihui1, Duan Xingwu2

(1DermatologyofDongzhimenHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing101100,China； 2DermatologyofDongzhimenHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100007,China)

Objective: To explore the regulation role of Xiaoyinjiedu drink on peripheral blood T-lymphocytes in blood-heat syndrome of Ps(Psoriasis) patients by observing peripheral blood T lymphocytes and the expression of co-stimulatory factor changes of normal and Psoriasis patients, who received Xiaoyinjiedu Drink.Methods:Treatment group was given 8 weeks of medication, using flow cytometry, while comparison was made to the control group in terms of Peripheral Blood T-lymphocytes and Co-stimulatory factor CD28, CD80, CD86.Results:The treatment group's lesion scores decreased after treatment; CD3+, CD4+and CD4+/CD8+is reduced when compared with normal group before and after treatment; CD28 was higher than the normal group before treatment, but lower than normal group after treatment; CD86 was significantly higher than the normal group before and after treatment; There was no significant difference between the normal group and treatment before, but after treatment there was a downward trend in CD80. There was no significant difference in the peripheral T-lymphocytes CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+and Co-stimulatory factor CD28, CD80, CD86 before and after treatment in the treatment group.Conclusion:Xiaoyinjiedu Drink has positive clinical effect. Psoriasis patients' peripheral blood T-lymphocytes and Co-stimulatory factor have abnormal expression. It is uncertain whether the improvement of clinical symptoms of patients and the expression of T-lymphocytes and Co-stimulatory factor are parallel related.

Xiaoyinjiedu Drink; Blood-heat Syndrome of Ps; T-lymphocytes; Co-stimulatory factor

國家自然科學(xué)基金項目(編號：81273755)——新型T輔助細胞亞群Th17、Th22及效應(yīng)因子IL-22與銀屑病辨證論治關(guān)系的研究

段行武(1965.7—)，男，博士研究生，主任醫(yī)師，科主任，研究方向：中醫(yī)藥治療銀屑病硬皮病，E-mail：xwduan@sina.com

R243;R758.63

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.06.015