黃小容，劉廣芹，汪子豪，馮 敏，秦建如，郝建勇，李育豪，曹偉勝，廖 明

（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院農(nóng)業(yè)部獸用疫苗創(chuàng)制重點開放實驗室，廣東 廣州 510642）

J亞群禽白血病病毒（Subgroup Javian Leukosis virus，ALV-J）最早是由Payne 等于1988 年從肉雞中分離鑒定出的禽白血病/肉瘤病毒群的一個新的亞群，主要引起肉雞的骨髓細(xì)胞瘤、血管瘤、纖維肉瘤、腎瘤等多種腫瘤。自從我國于1999 年[1]商品代肉雞中分離到ALV-J以來，ALV-J的宿主范圍已由肉雞擴(kuò)大到蛋雞[2-3]以及地方品系雞，如麻雞[4]，黃雞[5]和地方柴雞[6]等。ALV-J除了引起腫瘤以外，還會導(dǎo)致免疫抑制和生產(chǎn)性能降低等表現(xiàn)。ALV-J已給我國養(yǎng)禽業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失[7]。

目前防控雞禽白血病主要采用凈化方法[8-9]。評估ALV-J經(jīng)不同途徑及日齡感染雞后感染模式的變化情況，對研究ALV-J的致病特點和防控有重要意義。綜合Pandiri 等[10]和孫貝貝等[11]的研究發(fā)現(xiàn)，ALV-J病毒血癥、抗體及排毒動態(tài)與病毒株、感染劑量、途徑及年齡密切相關(guān)。因為不同毒株的感染模式之間存在差異性，所以有必要闡明不同流行毒株感染時這一流行病學(xué)特點。針對我國蛋雞群中有血管瘤型ALV-J呈區(qū)域性流行的狀況[12-15]，本研究擬系統(tǒng)性地評估血管瘤型ALV-J經(jīng)不同接種途徑和日齡接種對雞感染模式的影響，從而為該病的凈化提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病毒、細(xì)胞和試劑 DF-1細(xì)胞來源于美國ATCC，ALV-J單克隆抗體JE9[16]由揚州大學(xué)秦愛建教授惠贈。血管瘤病變型克隆株ALV-JCHN06 株由農(nóng)業(yè)部獸用疫苗創(chuàng)制重點開放實驗室保存[17]，每0.2 mL感染細(xì)胞培養(yǎng)上清中含有104.5TCID50病毒。

1.2 隔離器 不銹鋼正/負(fù)壓雞隔離器（GJ-1型），蘇州市馮氏實驗動物設(shè)備有限公司。

1.3 實驗動物 11 日齡SPF 雞胚（白來航），購自北京梅里亞維通實驗動物技術(shù)有限公司，經(jīng)德州科裕KFK 微電腦全自動孵化機(jī)孵化。

1.4 試驗設(shè)計 分別經(jīng)11 日齡雞胚尿囊腔，1 日齡口服、點眼滴鼻、腿部肌肉注射、頸部皮下注射、腹腔注射和7 日齡腹腔注射途徑接種104.5TCID50/0.2 mL的ALV-JCHN06 感染細(xì)胞培養(yǎng)上清液，0.2 mL/只；對照組為1 日齡SPF 雞經(jīng)腹腔接種0.2 mL DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液。除11日齡雞胚尿囊腔組接種30枚雞胚，出殼后隨機(jī)挑選15 只健雛進(jìn)行試驗外，其余各組均接種15 只雞。每只雞帶翅號，各組雞分別置于不同的隔離器內(nèi)飼養(yǎng)，自由采食和飲水。

1.5 樣品采集和檢測 各組雞分別于接種后(11 日齡雞胚尿囊腔組于出殼后)第1、2、4、6 周無菌采集非抗凝血，抗凝血和泄殖腔棉拭子。分離血清，用IDEXX ALV-J抗體ELISA試劑盒檢測。血漿在DF-1 細(xì)胞上培養(yǎng)和泄殖腔棉拭子經(jīng)凍融處理之后，取上清用IDEXX ALV抗原ELISA試劑盒檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同感染方式下的病毒血癥、抗體和泄殖腔排毒動態(tài) 如圖1 所示，11 日齡雞胚尿囊腔組的病毒血癥和泄殖腔p27 抗原陽性率均自第4 周開始維持在峰值100%（15/15），6 周內(nèi)均未檢測到ALVJ抗體。1 日齡口服組和點眼滴鼻組各有53.3%（8/15）只雞呈現(xiàn)一過性病毒血癥，6 周內(nèi)均未檢測到ALV-J抗體，且第6 周才有6.7%（1/15）泄殖腔p27抗原檢測為陽性。1 日齡頸部皮下注射組、腿部肌肉注射組和腹腔注射組的病毒血癥陽性率和泄殖腔p27 抗原陽性率均分別在第2 周和第4 周達(dá)到峰值；第4 周時，1 日齡頸部皮下注射組和腹腔注射組的病毒血癥陽性率下降，均為67%(10/15)，而1 日齡腿部肌肉注射組仍維持在峰值，差異顯著（P＜0.05）；第4 周開始檢測到ALV-J抗體，第6 周時，抗體陽性率在33%～47%之間，差異不顯著。7 日齡腹腔注射組的病毒血癥陽性率在第2 周達(dá)到峰值67%（10/15）后開始降低，第6 周降為0%（0/15），與1 日齡組差異顯著（P＜0.05）。第4 周開始檢測到ALV-J抗體，第6 周時，抗體陽性率高達(dá)93%(14/15)，與1 日齡注射組均差異顯著（P＜0.05）。7 日齡腹腔注射組，泄殖腔p27 抗原陽性率一直維持在較低水平13%（2/15），與1 日齡組相比排毒時間推遲。

2.2 不同接種方式下的感染模式 如表1 所示，11 日齡雞胚尿囊腔組感染模式以V+S+為主，感染雞持續(xù)帶毒排毒。1 日齡口服組和點眼滴鼻組以V-S-感染模式為主。1 日齡注射組第2 周的感染模式以V+S-為主，但1 日齡腿部肌肉注射組有33%（5/15）感染模式為V+S+，部分雞開始帶毒排毒；在第4、6 周的感染模式均以V+S+為主。7 日齡腹腔注射組在第2 周67%（10/15）的感染模式為V+S-，而第6 周80%（12/15）的感染模式為V-S-。

圖1 ALV-J經(jīng)不同途徑和不同日齡感染SPF 雞后的病毒血癥、抗體和泄殖腔排毒動態(tài)

表1 ALV-J經(jīng)不同接種途徑和不同接種日齡接種SPF 雞后的感染模式

3 討論

不同接種途徑對ALV-J感染模式影響的結(jié)果顯示：注射途徑比非注射途徑更易誘導(dǎo)病毒血癥和排毒：1 日齡口服組和點眼滴鼻組感染模式以V-S-為主，而1 日齡注射組以V+S+為主。注射途徑中又以1日齡腿部肌肉注射組對病毒血癥和排毒的影響大。原因可能與不同接種途徑使得到達(dá)靶細(xì)胞的有效病毒量不同有關(guān)?？诜忘c眼滴鼻組因為黏膜屏障以及胃的消化作用的影響，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的有效病毒劑量少，而腿部肌肉等血管豐富的部位，進(jìn)入靶細(xì)胞內(nèi)的有效病毒劑量多，且病毒可經(jīng)血液快速在體內(nèi)傳播，病毒血癥和泄殖腔排毒水平提高。

不同感染日齡對ALV-J感染模式影響的結(jié)果表明，隨著感染日齡的增加，病毒血癥持續(xù)時間縮短，排毒水平降低，抗體生成水平升高。11 日齡雞胚尿囊腔接種的雞均呈現(xiàn)V+S+的感染模式，這個結(jié)果與王小芬等[18]用該毒株在麻黃雞上感染的結(jié)果一致，說明胚胎感染易導(dǎo)致ALV-J持續(xù)性病毒血癥。相比1 日齡感染組，7 日齡腹腔注射組的病毒血癥呈一過性，且第6 周的抗體陽性率顯著增高。原因可能是隨著年齡的增加，免疫器官的發(fā)育及成熟，雞對病毒的抵抗力越強。

由本試驗得知，ALV-J垂直傳播，感染雞持續(xù)帶毒排毒，是水平感染和先天感染的主要來源。在早期水平傳播過程中，ALV-J更容易經(jīng)肌肉注射等注射途徑傳播。

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