李金梅，李雨珊,劉 華，黃義山

(1.四川省南充市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川南充 637000)

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·論 著·

健康兒童腸道大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株耐藥性研究*

李金梅1，李雨珊1,劉 華1，黃義山2△

(1.四川省南充市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 637000；2.川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川南充 637000)

目的 了解無(wú)氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物用藥史的健康兒童腸道大腸埃希菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)菌株的檢出率及對(duì)常用藥物的耐藥狀況，為臨床兒科大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株異位感染的經(jīng)驗(yàn)用藥提供依據(jù)。方法 從440例健康兒童大便中分離、鑒定大腸埃希菌，采用法國(guó)梅里埃VITEK-2 compact的AST-13全自動(dòng)微生物鑒定藥敏檢測(cè)系統(tǒng)儀與K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)及ESBLs表型確認(rèn)試驗(yàn)。用WHONET5.3軟件分析藥敏試驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用SPSS19.0進(jìn)行耐藥率數(shù)據(jù)分析。結(jié)果 440株大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs率為47.3%，產(chǎn)酶株與非產(chǎn)酶株的耐藥率分別是：頭孢他啶80.8%、43.1%；頭孢噻肟80.8%、43.9%；頭孢曲松88.5%、51.7%；頭孢吡肟73.1%、34.5%；環(huán)丙沙星57.7%、39.7%；左氧氟沙星51.9%、37.9%；阿米卡星11.5%、3.4%。結(jié)論 南充地區(qū)部分無(wú)氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物用藥史的健康兒童腸道內(nèi)大腸埃希菌具有產(chǎn)ESBLs的較高概率，且對(duì)3、4代頭孢類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)抗菌藥物具有不同程度的多重耐藥性。

大腸埃希菌； 健康兒童； 耐藥性； 產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶

大腸埃希菌是人體腸道菌群中的主要正常菌,同樣也是重要的條件致病菌。了解它們對(duì)當(dāng)前常用抗菌藥物的耐藥狀況，對(duì)指導(dǎo)臨床兒科大腸埃希菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶(ESBLs)菌株異位感染的經(jīng)驗(yàn)用藥具有重要意義。有報(bào)道指出，部分感染患者大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株檢出率大于50%[1-2]。對(duì)于兒童，由于機(jī)體防御功能較成年人存在一定差異，感染率可能更高。而對(duì)于健康個(gè)體尤其是健康兒童(無(wú)氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物用藥史)的腸道大腸埃希菌這部分的調(diào)查研究數(shù)據(jù)較少。因此，為了解南充地區(qū)健康兒童腸道大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs的發(fā)生率及耐藥狀況，本文以10歲以下無(wú)氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物用藥史的健康兒童作為研究對(duì)象，將他們大便中分離出的440株大腸埃希菌進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

1.1.1 選取南充地區(qū)5個(gè)縣市440例10歲以下無(wú)氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物用藥史的健康兒童，其中男234例，女206例；年齡1～10歲，平均6歲。

1.1.2 菌株來(lái)源 (1)標(biāo)本：外觀正常、成形的大便標(biāo)本。(2)大腸埃希菌質(zhì)控菌株(ATCC 25922)：英國(guó)Oxoid公司。

1.2 菌株分離鑒定及藥敏試驗(yàn) 按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第3版)進(jìn)行細(xì)菌分離、鑒定。采用VITEK-2 compact的AST-13全自動(dòng)微生物鑒定藥敏檢測(cè)系統(tǒng)儀與K-B紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)并進(jìn)行ESBLs表型確認(rèn)試驗(yàn)?？咕幬锼幟艏埰侯^孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松、頭孢吡肟、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、阿米卡星，均購(gòu)自英國(guó)Oxoid公司。用大腸埃希菌(ATCC 25922)做室內(nèi)質(zhì)量控制。

1.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果及ESBLs確認(rèn)判定標(biāo)準(zhǔn) 美國(guó)臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)2010年版。頭孢噻肟及頭孢噻肟/克拉維酸和頭孢他啶及頭孢他啶/克拉維酸，任一組抑菌環(huán)直徑大于或等于5 mm者，確認(rèn)為產(chǎn)ESBLs菌株。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用WHONET5.3軟件進(jìn)行藥敏試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，采用SPSS19.0進(jìn)行耐藥率的數(shù)據(jù)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 大腸埃希菌ESBLs分離率 440株大腸埃希菌中，ESBLs確認(rèn)試驗(yàn)陽(yáng)性208株，陽(yáng)性率為47.3%。

2.2 440株大腸埃希菌對(duì)4種β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物藥敏試驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表1。440株大腸埃希菌對(duì)第3代頭孢類(lèi)抗菌藥物耐藥率超過(guò)60.0%；產(chǎn)ESBLs株的耐藥率明顯高于不產(chǎn)酶株，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。產(chǎn)酶株不敏感率(耐藥率+中介率)>50.0%；其中頭孢曲松(92.3%)>頭孢他啶(82.7%)和頭孢噻肟(82.7%)>頭孢吡肟(75.0%)。

表1 4種頭孢類(lèi)抗菌藥物耐藥性(%)

2.3 440株大腸埃希菌對(duì)氟喹諾酮類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表2。440株大腸埃希菌對(duì)氟喹諾酮類(lèi)耐藥率超過(guò)45.0%，對(duì)氨基糖苷類(lèi)超過(guò)11.0%。

表2 3種氟喹諾酮類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)抗菌藥物耐藥性(%)

3 討 論

大腸埃希菌是人體腸道的正常寄生菌，也是最常見(jiàn)的異位感染菌。部分兒童機(jī)體抵抗力較低，容易發(fā)生大腸埃希菌感染性疾病。本文調(diào)查了南充地區(qū)440例10歲以下無(wú)氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物用藥史的健康兒童腸道大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs的發(fā)生率及耐藥狀況，結(jié)果顯示，440株大腸埃希菌產(chǎn)ESBLs菌株檢出率為47.3%，與王麗和張永弘[3]報(bào)道相近；產(chǎn)酶株對(duì)第3代頭孢類(lèi)抗菌藥物不敏感率超過(guò)了80.0%，第4代頭孢類(lèi)抗菌藥物(頭孢吡肟)不敏感率達(dá)70.0%以上，同余珍珠和劉曉紅[4]的報(bào)道基本一致。造成如此高的耐藥率的可能原因?yàn)椋?1)我國(guó)臨床抗菌藥物的應(yīng)用存在嚴(yán)重不科學(xué)現(xiàn)象，從而導(dǎo)致醫(yī)院內(nèi)或社區(qū)耐藥細(xì)菌傳播；(2)β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗菌藥物，如頭孢2、3代是兒科常用藥物，有的醫(yī)療機(jī)構(gòu)占臨床抗菌藥物用藥的前3位[5]，曾經(jīng)患過(guò)細(xì)菌性感染疾病的兒童體內(nèi)正常菌群可能受這些藥物的壓力而出現(xiàn)耐藥株；(3)近年來(lái)兒童住院率增加、住院時(shí)間延長(zhǎng)也增加了ESBLs菌株的感染機(jī)會(huì)[6]。

氟喹諾酮類(lèi)藥物為腸桿菌科細(xì)菌尿路感染最常用且有效的藥物，但它可能影響骨骼發(fā)育而被兒童禁用?；诖?，本文也探討了此類(lèi)藥物在并無(wú)用藥史的兒童中的耐藥情況，結(jié)果顯示，440例健康兒童腸道大腸埃希菌對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物的耐藥率超過(guò)了45.0%。熊自忠等[7]報(bào)道成人產(chǎn)ESBLs大腸埃希菌對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物耐藥率在80.0%～90.0%。細(xì)菌質(zhì)粒介導(dǎo)的氟喹諾酮基因與超廣譜酶基因可以隨細(xì)菌感染播散，成人體內(nèi)的致病基因可播散至并無(wú)用藥誘導(dǎo)耐藥史的健康兒童，這可能是造成如此現(xiàn)象的原因之一[3]。

本文結(jié)果表明，就南充地區(qū)而言，隨著第3代頭孢類(lèi)抗菌藥物的廣泛應(yīng)用和濫用，大腸埃希菌作為人體腸道正常寄生菌，迫于生存壓力對(duì)以上常用抗菌藥物已產(chǎn)生多重耐藥的趨勢(shì)。產(chǎn)ESBLs菌株的概率較高，且在無(wú)氟喹諾酮類(lèi)抗菌藥物用藥史的健康兒童中耐藥率也如此之高，這給兒童腸桿菌科細(xì)菌異位感染疾病的治療與感染控制帶來(lái)了極大的困難。

因此，在診治兒童細(xì)菌性感染疾病時(shí)，臨床醫(yī)生應(yīng)充分考慮到南充所屬地區(qū)兒童腸道大腸埃希菌的耐藥趨勢(shì)，科學(xué)合理使用抗菌藥物。

[1]高偉，劉志敏．ICU內(nèi)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌的檢測(cè)及耐藥性分析[J]．中國(guó)綜合臨床，2011，27(6)：572-574．

[2]黃斌，張盛斌.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶革蘭陰性桿菌的檢測(cè)和耐藥性研究[J]．中國(guó)基層醫(yī)藥，2011，18(12)：1585-1586．

[3]王麗，楊永弘．兒科產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌耐藥的流行特征分析[J]．中華醫(yī)學(xué)雜志，2008，88(20)：1372-1375．

[4]余珍珠，劉曉紅．新生兒重癥監(jiān)護(hù)病房細(xì)菌感染及耐藥性檢測(cè)[J]．中國(guó)小兒急救醫(yī)學(xué)，2013，20(4)：413-416．

[5]Tonkic M,Goic-Barisic I,Punda-Polic V.Prevalence and antimicrobial resisyance of extended-spectrum beta-lactamas Esproducing Escherichia coli and Klebasiella pneumoniae strai-Ns isolated in a university hospital in Split,Croatia[J].Int Microbiol,2005，8(2):119-124.

[6]蔡桂豐．十二歲以?xún)?nèi)患兒大腸埃希氏菌和肺炎克雷伯氏菌的耐藥性監(jiān)測(cè)[J]．實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2005，21(7)：747-748．

[7]熊自忠，李濤，李慧，等．產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶大腸埃希菌對(duì)喹諾酮類(lèi)抗菌藥物的耐藥性檢測(cè)[J]．中國(guó)微生態(tài)學(xué)雜志，2005，17(6)：452-453．

Resistance research of E.coli producing ESBLs strains in the gut for healthy children*

LIJin-mei,LIYu-shan,LIUHua,HUANGYi-shan△

(1.DepartmentofClinicalLaboratory,NanchongCentralHospitalofSichuanProvince,Nanchong,Sichuan637000,China;2.DepartmentofClinicalLaboratory，theAffiliatedHospitalofNorthSichuanMedicalUniversity,Sichuan637000,China)

Objective To understand the fluorine free history of quinolones drugs in the intestines of healthy children E.coli to produce ultra broad spectrum beta lactamase (ESBLs)strains of detection rate and drug resistance to commonly used medicines,for clinical pediatric E.coli producing ESBLs strains of ectopic infection provides the basis for empirical use.Methods E.coli in the stool were separated and identificated from 440 healthy children,VITEK-2 compact AST-13 and K-B disc diffusion method were used for drug susceptibility and ESBLS phenotype confirmation test.WHONET5.3 software was used to analyze susceptibility data,and SPSS19.0 was used to analyze the percentages of data .Results The producing ESBLs rate was 47.3% for 440 strains of E.coli,The drug resistance rate of enzyme production strains and non-enzyme production strains respectively:Ceftazidime were 80.8%,43.1%;Cefotaxime were 80.8%,43.9%;Ceftriaxone were 88.5%,51.7%;Cefepime were 73.1%,34.5%;Ciprofloxacin were 57.7%,39.7%;Levofloxacin were 51.9%,37.9%;Aminoglycoside amikacin were 11.5%,3.4%.Conclusion The region part of fluorine-free quinolones drugs with a history of healthy children in the gut of E.coli has a higher probability of producing ESBLs,and for 3,4 generation cephalosporins,fluoroquinolone,aminoglycoside antibiotic drugs with different degree of multiple drug resistance.

E.coli； healthy children； drug resistance； ESBLs

四川省衛(wèi)生廳科研項(xiàng)目(090146)。

李金梅，女，本科，初級(jí)檢驗(yàn)技師，主要從事臨床微生物學(xué)研究。

△通訊作者,E-mail:13890731234@163.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.03.009

A

1672-9455(2015)03-0310-02

2014-08-26

2014-10-20)