章　騫，沈建東，趙雪冰，張凌晶，曹敏杰

(1.集美大學食品與生物工程學院，福建 廈門 361021;2.福建省水產品深加工工程研究中心，福建 廈門 361021)

?

雜色蛤中牛磺酸含量與季節(jié)變化的關系

章騫1,2，沈建東1,2，趙雪冰1，張凌晶1,2，曹敏杰1,2

(1.集美大學食品與生物工程學院，福建 廈門 361021;2.福建省水產品深加工工程研究中心，福建 廈門 361021)

[摘要]旨在探明幾種常見海洋經濟水產品的牛磺酸含量，特別是雜色蛤(Ruditapes philippinarum)中牛磺酸含量隨季節(jié)變化的規(guī)律．以雜色蛤為原料，制備?；撬岵⒗酶邏阂合嗌V法分析牛磺酸的純度．結果發(fā)現，幾種常見海洋經濟水產品中，雜色蛤體內的?；撬岷孔罡?，達8.22 g/kg．以此為原料可制備純度達92.92%的天然?；撬幔s色蛤中?；撬岷康募竟?jié)變化規(guī)律為：1—4月牛磺酸含量逐漸升高，4—8月逐漸下降，至8月份達最低點，9月后又逐漸回升，牛磺酸含量介于1784.57~2519.74 μg/mL之間．而且，?；撬岷康募竟?jié)變化規(guī)律與氣溫變化基本呈反相關關系．

[關鍵詞]雜色蛤；?；撬?；季節(jié)變化

0引言

雜色蛤(Ruditapes philippinarum)又稱花蛤，學名菲律賓蛤仔，隸屬瓣鰓綱(Lamellibranchia)、異齒目(Hetrodonta)、簾蛤科(Veneridae)．雜色蛤富含蛋白質、呈味氨基酸和牛磺酸，味道鮮美、營養(yǎng)豐富，深受消費者喜愛．牛磺酸是一種含硫非蛋白質氨基酸，以游離狀態(tài)存在于生物體內，是人體所必需的營養(yǎng)素[1-2]．?；撬峋哂卸喾N獨特的生理功能[3]，人體主要靠攝取食物中的?；撬醽頋M足生理需要．研究表明，?；撬峋哂懈纳埔暳4]、消除疲勞[5]的作用，也能夠增加機體細胞的抗自由基損傷、抗氧化、抗病毒侵害的能力[6]，此外，還具有一定的抗腫瘤活性[7]和促進大腦發(fā)育[8]的功能．目前，?；撬岜粡V泛添加于嬰幼兒奶粉和功能性食品中．隨著人們生活水平的不斷提高和對?；撬峁δ艿闹饾u認識，安全性更有保障的天然?；撬岬氖袌鰸摿薮?，發(fā)展前景良好[9]．

?；撬岷亢图兌鹊臏y定主要利用高壓液相色譜法．高加龍等[10]測定了馬氏珠母貝(Pinctadamartensii)中的?；撬岷?，王麗雅等[11]建立了測定暗紋東方鲀(Takifuguobscurus)肉中牛磺酸含量的方法，蒲秋易等[12]測定了全蝎(Scorpion)牛磺酸的含量，章騫等[9]建立了一種用高壓液相色譜法檢測牛磺酸純度的方法．

天然?；撬岬闹苽渲饕院Ｑ髣游餅樵?，通過原料預處理、萃取、純化、濃縮、結晶等生物工程單元操作來制備[13]．從皺紋盤鮑(Haliotisdiscushannai)[9]、魷魚(Ommastrephesbartrami)[14]、太平洋牡蠣(Crassostreagigas)[15-17]、雜色蛤(Ruditapesphilippinarum)[18]、文蛤(Meretrixmeretrixlinnaeus)[19]中提取?；撬?，已有相關研究．近期，文獻[20]公開了一種能實現工業(yè)化制備天然牛磺酸的簡易方法．

不同種類的海洋生物中，?；撬岬暮坎町惡艽骩1]．本文選取幾種常見海洋經濟水產品，測定它們體內的?；撬岷浚M一步以?；撬岷孔罡叩碾s色蛤為研究對象，研究了其含量隨季節(jié)變化的規(guī)律，以期為工業(yè)制備天然?；撬崽峁﹨⒖迹?/p>

1材料與方法

1.1　材料與試劑

鮮活雜色蛤、太平洋牡蠣、文蛤、蟶子(Sinonovaculaconstricta)，購于廈門市集美區(qū)菜市場；冷凍的新鮮皺紋盤鮑內臟，由福建省詔安東欣食品有限公司提供；冰凍墨魚(Sepiaesculenta)、魷魚，購于廈門市集美新華都超市．

牛磺酸標準品(Sigma，美國)；HPLC級甲醇(FisherScientific，美國)；鄰苯二甲醛(化學純試劑，國藥集團化學試劑有限公司)；硼酸、氫氧化鈉、甲醇、2-巰基乙醇、三水合乙酸鈉、冰乙酸、無水乙醇、活性炭、溴化鉀(分析純試劑，國藥集團化學試劑有限公司)．

1.2　儀器與設備

Agilent1260高壓液相色譜儀(AgilentTechnologies，美國)；色譜柱DiscoveryC18,250mm×4.6mm,5μm(Supelco，美國)；組織搗碎機(Kinematica，瑞士)；JA-26SXP型高速冷凍離心機(Beckman，美國)；5417R小型臺式冷凍離心機(Eppendorf，德國)；pH計(Sartorius，德國)；電子天平(上海精科天平，中國)；恒溫水浴鍋(Memmert，德國)．

1.3　實驗方法

1.3.1?；撬針藴是€的繪制

1.3.2常見海洋經濟水產品中?；撬岷繙y定

1)樣品前處理

取樣品若干，用蒸餾水洗凈，取出相應的檢測部位，用于后續(xù)?；撬岬奶崛。?/p>

2)樣品中牛磺酸提取

精確稱量經前處理后的試樣，加5倍體積水充分搗碎，移入燒杯中；放入100 ℃水浴鍋中加熱30 min，取出冷卻至室溫后，樣液在2000 r/min下離心15 min，取上清液精確計量體積；上清液經0.22 μm微孔膜過濾后用于后續(xù)牛磺酸含量測定．

3)?；撬岷繙y定

取2)制備的上清液，按?；撬岷繙y定方法[9]測定其質量比．

4)原料中?；撬豳|量比的計算

牛磺酸質量比(g/kg)=上清體積(L)×上清中?；撬豳|量濃度(g/L)/前處理后原料質量(kg).

1.3.3雜色蛤牛磺酸的制備及其純度測定

雜色蛤?；撬針悠钒凑毡緦嶒炇野l(fā)明專利[20]制備．取制備得到的雜色蛤牛磺酸樣品，配制成質量濃度為20μg·mL-1的溶液，經0.22μm濾膜過濾后置于自動進樣器的樣品瓶中，柱前衍生反應后注入Agilent1260高壓液相色譜儀進行測定．記錄峰面積，根據所制得的標準曲線，采用峰面積歸一化方法計算雜色蛤?；撬針悠返募兌龋?/p>

1.3.4雜色蛤中牛磺酸含量的季節(jié)性變化研究

從2013年4月至2014年3月，每月20號在廈門市集美區(qū)菜市場3個固定攤位購買產自廈門島附近的雜色蛤，分別測定雜色蛤中?；撬岷?，研究其隨季節(jié)變化情況，該實驗持續(xù)12個月．

將來自三個不同攤位的鮮活帶殼雜色蛤清洗干凈，分別準確稱取1kg，加入1L水，100 ℃水煮30min后獲得湯汁．按本實驗室?；撬岷繙y定方法[9]測定湯汁中的?；撬岷浚?/p>

2結果

2.1　?；撬針藴是€的繪制

以?；撬針藴势窛舛葹闄M坐標，峰面積為縱坐標，制得標準曲線如圖1所示．

由圖1可以看出，?；撬岬馁|量濃度在1~20μgmL-1范圍時，進樣濃度與峰面積呈良好的線性關系，相關系數R2=0.9999，回歸方程y=118.72x+42.145．

2.2　常見海洋經濟水產品中?；撬岷繙y定

取鮮活雜色蛤、太平洋牡蠣、文蛤、蟶子，冷凍墨魚、魷魚，皺紋盤鮑內臟，按照1.3.2方法處理樣品，測定這幾種常見海洋經濟水產品中牛磺酸含量．結果如表1所示．

表1 常見海洋經濟水產品中?；撬岷縏ab.1 Determinationoftaurinecontentindifferentkindsofmarineproducts名稱Namew(?；撬酺aurine)/(g·kg-1)雜色蛤肉Ruditapesphilippinarummeat8.22文蛤肉Meretrixmeretrixlinnaeusmeat7.21太平洋牡蠣肉Crassostreagigasmeat5.49皺紋盤鮑內臟Haliotisdicushannaivis-ceral4.30蟶子肉Sinonovaculaconstrictameat0.94墨魚內臟Sepiaesculentavisceral5.86墨魚體壁Sepiaesculentabodywall2.27魷魚內臟Ommastrephesbartramivisceral2.99魷魚體壁Ommastrephesbartramibodywall1.43

據文獻報道，海洋軟體動物中?；撬岷枯^多[1]．所以，本研究選取了幾種有代表性的軟體動物，測定它們的?；撬岷浚杀?可知，不同物種中?；撬岷坎町惡艽螅渲须s色蛤肉中?；撬岷孔罡撸_8.22 g·kg-1，文蛤中的為7.21 g·kg-1，而蟶子中的僅為0.94 g·kg-1．本研究還發(fā)現，墨魚內臟中的?；撬岷渴求w壁的2.6倍；魷魚內臟中?；撬岷渴求w壁的3.0倍，表明在同一物種的不同組織中，?；撬岷坎煌?/p>

2.3　雜色蛤牛磺酸樣品的制備及其純度測定

本研究采用水煮、乙醇抽提、濃縮、結晶等工藝從雜色蛤中獲得白色單斜棱狀的?；撬峋w，用高壓液相色譜檢測其純度．

濃度為20 μg·mL-1的?；撬針藴势飞V圖如圖2所示，而雜色蛤?；撬針悠?20 μg·mL-1)的色譜圖如圖3所示．

對比圖2和圖3結果可知，?；撬針藴势返谋Ａ魰r間為5.796 min，雜色蛤?；撬針悠返谋Ａ魰r間為5.803 min．根據所制得的標準曲線，經峰面積歸一化方法計算得知，雜色蛤?；撬針悠芳兌葹?2.92%．

2.4　雜色蛤中?；撬岷康募竟?jié)變化規(guī)律

為了了解廈門地區(qū)雜色蛤中?；撬岷侩S季節(jié)變化的規(guī)律，本研究以廈門周邊地區(qū)所產的雜色蛤為原料，從2013年4月至2014年3月，每月20日均在同一市場的固定銷售攤位采樣，按1.3.4的方法分別測定．雜色蛤中?；撬岷侩S季節(jié)變化的結果如圖4所示．

由圖4可知，廈門地區(qū)雜色蛤中?；撬岷颗c季節(jié)變化有關，并且呈現一定的規(guī)律性：1—4月?；撬岷恐饾u升高，4—8月?；撬岷恐饾u下降，8—12月?；撬岷坑只厣觌s色蛤中?；撬豳|量含量介于1784.57~2519.74 μg·mL-1之間，4月份含量最高，而8月份含量最低．

為了分析雜色蛤體內?；撬岬暮颗c氣溫變化的關系，通過查詢廈門市氣象局公布的2013年4月至2014年3月間每月19日廈門海域的氣溫數據，繪制出該一年中廈門海域氣溫變化圖，如圖5所示．

由圖5可知，廈門海域氣溫與季節(jié)變化密切相關，并且呈現一定的規(guī)律性．1—2月氣溫有所下降，2—9月氣溫逐漸上升，至9月到最高點，9—12月氣溫又下降．

綜合圖4和圖5的結果可知，雜色蛤中牛磺酸含量的季節(jié)變化規(guī)律與廈門海域氣溫的變化規(guī)律基本呈反相關關系，也即隨著氣溫的升高，雜色蛤體內的牛磺酸含量降低，而隨著氣溫的降低，含量逐漸升高．

3討論

本研究測定了幾種常見海洋經濟水產品中的?；撬岷?，結果發(fā)現，不同物種中?；撬岷坎町愝^大，其中雜色蛤肉中?；撬岷孔罡撸幢阍谕晃锓N的不同組織中?；撬岷恳膊煌?，如魷魚內臟中?；撬岷渴求w壁的3.0倍．本研究結果與譚樂義等[1]、湯志方[21]的報道一致．對于海產品中?；撬岷康臏y定，很多學者展開過研究，但研究結果不盡相同．除了實驗誤差外，還可能存在以下幾方面的原因：1)樣品的部位不同導致差異．如魷魚、墨魚內臟中的牛磺酸含量遠遠高于體壁中的含量.2)生長季節(jié)和水域環(huán)境等因素的影響．如本研究發(fā)現，不同季節(jié)的雜色蛤中?；撬岷坑胁町?3)前處理方法的影響．牛磺酸提取的前處理方法不同，結果也會有差異[1]．

福建是我國雜色蛤的主要產區(qū)，加工企業(yè)常采用加熱蒸煮的方法取肉，冷凍出口．在此加工過程中會產生大量的湯汁，部分企業(yè)將其濃縮后作為調味料銷售，部分企業(yè)則直接排放，不僅浪費資源還造成環(huán)境污染，而雜色蛤蒸煮湯汁中含有大量的?；撬醄18]．因此，以其為原料來高效制備?；撬峥善鸬阶儚U為寶的作用．本研究測定的幾種水產品中，雜色蛤體內?；撬岷孔罡?，以其加熱蒸煮后的湯汁為原料來制備天然?；撬?，經檢測其純度為92.92%．

在制備?；撬岬倪^程中發(fā)現，采用不同季節(jié)的雜色蛤，產物的提取量不同，這使得牛磺酸的穩(wěn)定生產變得困難．推測可能原因是雜色蛤中?；撬岷颗c水域氣溫有關．通過對雜色蛤中牛磺酸含量隨季節(jié)變化規(guī)律的研究發(fā)現，1—4月含量逐漸升高，4—8月逐漸下降，8—12月又繼續(xù)回升，呈現一定的規(guī)律性，而該規(guī)律與氣溫的變化基本呈反相關關系．據文獻報道，雜色蛤在4—9月間生長最快[22]，而?；撬峥梢源龠M生物體的生長[23-25]，因此推測，雜色蛤中牛磺酸含量在4—8月持續(xù)下降的原因，可能與雜色蛤在生長過程中不斷消耗?；撬嵊嘘P，這也間接說明了?；撬嵩陔s色蛤的生長過程中發(fā)揮重要作用．但詳細的證據有待進一步的研究發(fā)現．本研究結果為今后以雜色蛤為原料工業(yè)制備天然?；撬崽峁┝藚⒖迹?/p>

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(責任編輯朱雪蓮英文審校曹敏杰)

Seasonal Variation of Taurine Content inRuditapesphilippinarum

ZHANG Qian1,2，SHEN Jian-dong1,2，ZHAO Xue-bing1，ZHANG Ling-jing1,2，CAO Min-jie1,2

(1.College of Food and Biological Engineering，Jimei University,Xiamen 361021,China;

2.Engineering Research Center for High Utilization of Aquatic Products，Xiamen 361021,China)

Abstract:This study aims to analyze the contents of taurine in different species of marine products，especially seasonal variation of taurine content in Ruditapes philippinarum.Using Ruditapes philippinarum as raw material，taurine was prepared and its purity was determined by high performance liquid chromatography.The results showed that the taurine content varies with species and the highest content was in Ruditapes philippinarum which was 8.22 g/kg.The purity of taurine extracted from Ruditapes philippinarum was 92.92%.Concerning seasonal variation of taurine content in Ruditapes philippinarum，it increased from January to April,then decreased from April to August，while from August to December，an increment was then observed.The taurine content was in the range of 1784.57~2519.74 μg/mL.Aninverse correlation between seasonal variation of taurine content and the change of air temperature was noticed.

Key words:Ruditapes philippinarum；taurine;seasonal variation

[文獻標志碼]A

[中圖分類號]S 986

[文章編號]1007-7405(2015)03-0167-06

[作者簡介]章騫(1991-)，男，助理實驗師，主要從事水產品深加工技術研究．通訊作者：曹敏杰(1964-)，男，教授，博士，主要從事蛋白質化學及水產品深加工研究，E-mail:mjcao@jmu.edu.cn.

[基金項目]國家自然科學基金資助項目(31471640)

[收稿日期]2014-10-13[修回日期]2014-12-04