董璐 李青

(北京林業(yè)大學(xué)，北京，100083)

責(zé)任編輯:任 俐。

大巖桐為苦苣苔科大巖桐屬多年生草本花卉，具有花期長、花型大、花色嬌艷等特點(diǎn)，觀賞價(jià)值及商品價(jià)值高，是人們喜愛的室內(nèi)觀賞花卉。但由于花期集中在夏季，一年中的觀賞時(shí)間僅限于其盛花期;且大巖桐存在花前營養(yǎng)生長時(shí)間較長，具有自花不親和及自交不結(jié)實(shí)現(xiàn)象［1］。而研發(fā)具有新穎視覺效果的大巖桐試管花卉產(chǎn)品，一方面，可開拓大巖桐新的觀賞形式，豐富花卉商品種類;另一方面，探索出較為穩(wěn)定的離體成花體系，為解決大巖桐自花不親和、自交不結(jié)實(shí)問題的試管育種等研究工作奠定基礎(chǔ)，對(duì)大巖桐生產(chǎn)及科研具有實(shí)際意義。但目前有關(guān)大巖桐試管開花研究僅報(bào)道過愈傷組織直接誘導(dǎo)再生花芽［2］，鮮有將再生出的植株誘導(dǎo)花芽分化的系統(tǒng)研究;大部分研究集中在快繁體系和再生體系的建立［3-8］。本試驗(yàn)通過對(duì)大巖桐(Sinningia speciosa)進(jìn)行成花誘導(dǎo)，研究不同因素對(duì)其試管內(nèi)花芽分化的影響，探索出較為穩(wěn)定高頻的離體成花體系，以縮短大巖桐成花時(shí)間，擺脫季節(jié)對(duì)其花期的限制，為開發(fā)大巖桐試管花卉產(chǎn)品提供組織培養(yǎng)技術(shù)理論。

1 材料與方法

以組織培養(yǎng)獲得的、經(jīng)4 次繼代，苗徑約為3.5 cm 的重瓣深粉色大巖桐(Sinningia speciosa)無菌試管苗為試驗(yàn)材料。

不同基本培養(yǎng)基對(duì)大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響:分別以MS、WPM、B5、N6、Miller、White 為基本培養(yǎng)基，將生長健壯、長勢一致的試管苗接種于其中，研究不同基本培養(yǎng)基對(duì)誘導(dǎo)花芽分化的影響。培養(yǎng)60 d 統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

不同細(xì)胞分裂素、生長素種類及質(zhì)量濃度配比對(duì)大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響:以WPM 為基本培養(yǎng)基，添加不同質(zhì)量濃度細(xì)胞分裂素6-BA(0.1、0.3、0.5 mg·L-1)、KT(0.1、0.5、1.0 mg·L-1)與不同質(zhì)量濃度生長素IBA(0、0.1、0.2 mg·L-1)、NAA(0、0.1、0.2 mg·L-1)兩兩配比，進(jìn)行完全隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)。培養(yǎng)60 d 后，統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)與不同質(zhì)量濃度6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂配比對(duì)大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響:采用L16(45)正交試驗(yàn)，研究在無機(jī)鹽、6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂5 個(gè)因子共同存在的條件下，不同水平配比對(duì)誘導(dǎo)大巖桐花芽分化的影響。培養(yǎng)60 d 后統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。正交設(shè)計(jì)因子 水平見表1。

表1 正交設(shè)計(jì)因子水平

不同質(zhì)量濃度赤霉素對(duì)大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響:設(shè)置添加不同質(zhì)量濃度赤霉素(0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 mg·L-1)，以不添加赤霉素作對(duì)照，培養(yǎng)60 d 后統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

不同苗徑對(duì)大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響:將苗徑分別為1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5 cm 的試管苗，轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)花芽分化的培養(yǎng)基上，以研究不同苗徑對(duì)大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響。培養(yǎng)60 d，統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

培養(yǎng)條件:每個(gè)處理pH 值調(diào)至6.0。培養(yǎng)溫度為(24±2)℃，光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx，光照時(shí)間14 h·d-1。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì):花芽分化率=花芽數(shù)/總試管苗數(shù)×100%。每個(gè)處理6 瓶，每瓶3 株試管苗，重復(fù)3 次。用SPSS 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，用LSD 法進(jìn)行多重比較，檢驗(yàn)各影響因素的差異顯著性(P≤0.05)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同基本培養(yǎng)基對(duì)大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響

培養(yǎng)基的種類及成分直接影響所培養(yǎng)的植物的生長，其中的基本營養(yǎng)元素對(duì)誘導(dǎo)植物花芽分化作用不同，所以選擇適宜的培養(yǎng)基極其重要。將生長健壯、長勢一致，苗徑約3.5 cm 的試管苗接種于不同基本培養(yǎng)基中，培養(yǎng)60 d 后統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

不同基本培養(yǎng)基中，大量元素、微量元素、有機(jī)化合物、鐵鹽等成分及質(zhì)量分?jǐn)?shù)不同，設(shè)置的6 種基本培養(yǎng)基各自特點(diǎn)不同:MS 為高鹽成分培養(yǎng)基，即其鉀鹽、銨鹽及硝酸鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)均較高，微量元素種類齊全;B5、N6 為硝酸鉀質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的培養(yǎng)基，其中B5 含有較低質(zhì)量分?jǐn)?shù)的銨態(tài)氮;Miller 與WPM 為中等無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)的培養(yǎng)基，其中Mn 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高;White 為低質(zhì)量分?jǐn)?shù)無機(jī)鹽培養(yǎng)基。對(duì)花芽分化率進(jìn)行方差分析和多重比較，對(duì)營養(yǎng)狀態(tài)相同的大巖桐花芽分化的促進(jìn)效果由大到小的順序?yàn)閃PM、N6、B5、MS、Miller、White。大巖桐在WPM 與N6 基本培養(yǎng)基中，花芽分化率顯著高于其他基本培養(yǎng)基中的花芽分化率;兩者相比較雖差異不顯著，但WPM 基本培養(yǎng)基中平均花芽分化率最高，達(dá)29.63%，且長勢健壯良好，葉片舒展;而N6基本培養(yǎng)基中平均花芽分化率為24.07%，葉片略皺縮，長勢不及WPM(表2)。綜上所述，WPM 是適宜大巖桐誘導(dǎo)花芽分化，且保證長勢健壯的基本培養(yǎng)基。

表2 不同基本培養(yǎng)基對(duì)大巖桐花芽誘導(dǎo)的影響

2.2 不同細(xì)胞分裂素、生長素種類及質(zhì)量濃度配比對(duì)大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響

植物的離體培養(yǎng)中，外源激素的調(diào)控對(duì)器官的形成、生長極為重要，尤其細(xì)胞分裂素在離體花的形成過程中起十分重要的作用。將生長健壯、苗高一致的無菌苗接種到附加有不同細(xì)胞分裂素、生長素種類及質(zhì)量濃度配比組合的培養(yǎng)基上，結(jié)果見表3。

由表3可知，所有試驗(yàn)組植株花芽分化率、苗高與生長情況不同。對(duì)6-BA、KT、IBA、NAA 作單因子多重比較，發(fā)現(xiàn)6-BA 與NAA 對(duì)大巖桐花芽分化率與苗高的影響均差異顯著，而KT 與IBA 的質(zhì)量濃度變化對(duì)誘導(dǎo)大巖桐花芽分化與苗高基本無影響，結(jié)果見表4。

表3 不同種類及質(zhì)量濃度細(xì)胞分裂素、生長素配比對(duì)大巖桐花芽誘導(dǎo)的影響

圖1 大巖桐試管結(jié)球現(xiàn)象

表4 6-BA、KT、IBA、NAA 對(duì)花芽分化率影響的單因子多重比較

6-BA 各質(zhì)量濃度水平的多重比較結(jié)果表明，隨著6-BA 質(zhì)量濃度的升高，大巖桐花芽分化率與苗高均呈下降趨勢，說明過高的6-BA 質(zhì)量濃度不利于大巖桐試管苗花芽分化與長高。當(dāng)6-BA 質(zhì)量濃度為0.1 mg·L-1時(shí)，大巖桐的平均花芽分化率最高，達(dá)17.28%，此時(shí)平均苗高為4.14 cm。而大巖桐在KT 作用下，花芽分化率較低，試管苗出現(xiàn)徒長現(xiàn)象，其質(zhì)量濃度變化對(duì)誘導(dǎo)花芽分化與苗高影響差異不顯著。所以6-BA 與KT 相比較，6-BA 是誘導(dǎo)大巖桐分化與生長適宜的細(xì)胞分裂素。

生長素IBA 的質(zhì)量濃度變化對(duì)大巖桐的苗高與花芽誘導(dǎo)率影響差異均不顯著，且在其作用下，植株有徒長趨勢。而NAA 各質(zhì)量濃度水平的多重比較結(jié)果表明，隨著NAA 質(zhì)量濃度的升高，大巖桐試管苗苗高呈上升趨勢，而花芽誘導(dǎo)率呈下降趨勢，說明在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)(0.1～0.2 mg·L-1)，較高質(zhì)量濃度的NAA 能促進(jìn)大巖桐長高，但不利于誘導(dǎo)大巖桐試管苗花芽分化。當(dāng)NAA 質(zhì)量濃度為0.1 mg·L-1時(shí)，大巖桐平均花芽誘導(dǎo)率較高，為13.89%，此時(shí)平均苗高較高，為3.87 cm。

大巖桐試管苗在6-BA 與IBA 配比作用下，整體長勢較弱，偶有徒長現(xiàn)象，植株基部除有愈傷組織產(chǎn)生，或出現(xiàn)叢生芽增殖較多的情況外，基部均有結(jié)球(圖1);在6-BA 與NAA 作用下，試管苗整體長勢較好，部分試驗(yàn)組植株基部產(chǎn)生愈傷組織，其余試驗(yàn)組植株基部結(jié)球。KT 無論與何種生長素(IBA 或NAA)配比作用，所有試管苗基部均結(jié)球，但不同培養(yǎng)基上結(jié)球情況不同，出現(xiàn)一株結(jié)多球、球莖大小不一、球莖上長根等現(xiàn)象。其中KT 與NAA 組合，植株整體長勢較好;而與IBA 組合時(shí)，植株整體徒長，且長勢較弱。

綜上所述，細(xì)胞分裂素6-BA 與生長素NAA 配比適宜誘導(dǎo)大巖桐試管苗花芽分化。添加0.1 mg·L-16-BA，與0.1 mg·L-1NAA，平均花芽分化率最高，為33.33%。

2.3 不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)與不同6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂質(zhì)量濃度配比對(duì)大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響

將生長健壯、長勢一致的試管苗轉(zhuǎn)接到不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)與不同6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂質(zhì)量濃度的正交設(shè)計(jì)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)60 d，試驗(yàn)結(jié)果見表5。

表5 不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)與不同6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂質(zhì)量濃度配比對(duì)花芽誘導(dǎo)的影響

由表5可知，各處理中試管苗花芽分化率及長勢不同，試驗(yàn)組雖有較高的花芽分化率，但有較多花芽敗育。大巖桐在4 號(hào)培養(yǎng)基WPM+6-BA0.30 mg·L-1+NAA0.20 mg·L-1+40 g·L-1蔗糖+9 g·L-1瓊脂中，平均花芽分化率最高，為48.15%，此時(shí)植株長勢健壯良好，花芽飽滿(圖2)，后期花芽開放正常(圖3)。對(duì)花芽分化率進(jìn)行極差分析，結(jié)果見表6。

由表6極差分析結(jié)果可知，D 因素(蔗糖)的極差最大，為35.65;其次是C 因素(NAA)，極差為15.74;A 因素(無機(jī)鹽)與E 因素(瓊脂)的極差相同，均為14.81;B 因素(6-BA)的極差最小，僅為5.09。說明不同因素水平變化對(duì)大巖桐花芽分化率的影響由大到小依次為蔗糖，NAA，無機(jī)鹽、瓊脂，6-BA。

表6 極差分析

圖2 適宜培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出飽滿花芽

圖3 飽滿花芽正常開放

D 因素的極差值最大，表明在所試驗(yàn)的5 個(gè)因素中，蔗糖的質(zhì)量濃度變化對(duì)大巖桐花芽分化率影響最大，隨蔗糖質(zhì)量濃度的升高，花芽分化率整體呈現(xiàn)先上升的變化趨勢，當(dāng)蔗糖質(zhì)量濃度為40 g·L-1時(shí)，平均花芽分化率最高，為44.91%，顯著高于其他質(zhì)量濃度作用下的花芽分化率。

C 因素極差次之，表明NAA 質(zhì)量濃度變化對(duì)大巖桐花芽分化率影響較大。隨NAA 質(zhì)量濃度升高，大巖桐花芽分化率整體呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢，添加NAA0.1 mg·L-1時(shí)，平均花芽分化率最高，為31.02%。

A 因素與E 因素極差值相同，說明無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化對(duì)大巖桐花芽分化率的影響，與瓊脂的質(zhì)量濃度變化對(duì)花芽分化的影響差異不顯著。從平均值看，無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)以第二水平最好，即WPM+N(WPM 大量元素中NH4NO3與Ca(NO3)2·4H2O 質(zhì)量分?jǐn)?shù)加倍)，此時(shí)平均花芽分化率最高，為28.24%;而瓊脂質(zhì)量濃度以第一水平最好，即添加6 g·L-1質(zhì)量濃度的瓊脂，平均花芽分化率最高，為28.70%。

B 因素6-BA 質(zhì)量濃度變化對(duì)大巖桐花芽分化率影響最小。除在質(zhì)量濃度為1 mg·L-1時(shí)，大巖桐平均花芽分化率下降，為18.52%外，在其他質(zhì)量濃度作用下，花芽分化率無明顯變化趨勢，且兩兩比較，差異不顯著。從平均值看，以第4 水平，即添加0.3 mg·L-1質(zhì)量濃度6-BA，平均花芽分化率最高，為23.61%。

因此，當(dāng)無機(jī)鹽、6-BA、NAA、蔗糖、瓊脂5 個(gè)因素同時(shí)存在時(shí)，提高大巖桐花芽分化率的理論培養(yǎng)基為WPM+N+6-BA0.30 mg·L-1+NAA0.10 mg·L-1+40 g·L-1蔗糖+6 g·L-1瓊脂。但植株長勢及花芽狀態(tài)可能受到培養(yǎng)基中各因素在不同水平的交互作用影響，此培養(yǎng)基是否適宜大巖桐花芽分化還需進(jìn)一步驗(yàn)證試驗(yàn)。

綜上所述，由試驗(yàn)篩選出，WPM+6-BA0.30 mg·L-1+NAA0.20 mg·L-1+40 g·L-1蔗糖+9 g·L-1瓊脂為適宜大巖桐花芽分化的培養(yǎng)基，此時(shí)試管苗花芽分化率較高，且保證植株長勢健壯良好，花芽飽滿。

2.4 不同質(zhì)量濃度赤霉素對(duì)大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響

赤霉素可替代低溫和長日照作用，以誘導(dǎo)有些長日照植物在短日照條件下開花。以不添加赤霉素作對(duì)照，設(shè)置不同質(zhì)量濃度(0.1、0.5、1.0、2.0、5.0 mg·L-1)，培養(yǎng)60 d 后統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率，試驗(yàn)結(jié)果見表7。

表7 不同質(zhì)量濃度赤霉素對(duì)花芽誘導(dǎo)的影響

對(duì)結(jié)果進(jìn)行方差分析可知，當(dāng)添加有赤霉素時(shí)，隨赤霉素質(zhì)量濃度升高，大巖桐花芽分化率呈上升趨勢，但植株長勢變?nèi)?，且趨于徒長。在低質(zhì)量濃度(0.5～1.0 mg·L-1)作用下，大巖桐花芽在植株基部分化，無花梗，花芽較小，但花色紅艷，后期開放時(shí)花瓣呈單瓣(圖4)。而當(dāng)赤霉素質(zhì)量濃度上升至5.0 mg·L-1時(shí)，平均花芽分化率較高，為15.28%，此時(shí)花芽較大，具花梗，但植株與花梗明顯徒長。而對(duì)照組不添加赤霉素時(shí)的平均花芽分化率為33.19%，顯著高于所有添加赤霉素的試驗(yàn)組，且植株長勢健壯良好，葉片舒展。因此，以不添加赤霉素對(duì)誘導(dǎo)大巖桐花芽分化較為有利。

圖4 赤霉素作用下植株徒長，花開基部，花瓣單瓣

2.5 不同苗徑對(duì)大巖桐試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)的影響

苗莖大小作為植物生長的指標(biāo)，可一定程度上代表植株體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)存貯狀況。將不同苗徑的試管苗接種到培養(yǎng)基中，培養(yǎng)60 d，試驗(yàn)結(jié)果見表8。

表8 不同苗徑對(duì)花芽誘導(dǎo)的影響

對(duì)結(jié)果進(jìn)行方差分析，大巖桐試管苗的苗徑大小對(duì)其試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)影響顯著。試管苗苗徑小于3.0 cm 時(shí)，植株無花芽分化現(xiàn)象;當(dāng)試管苗苗徑為3.0 cm 時(shí)，漸有花芽分化，但此時(shí)平均花芽分化率較低，僅為1.75%;苗徑大于3.0 cm 時(shí)，花芽分化率隨苗徑增大而增多，苗徑為4.5 cm 的試管苗，平均花芽分化率最高，為31.94%，與苗徑為4.0 cm 的試管苗平均花芽分化率29.74%相比，差異不顯著;而苗徑為3.5 cm 的平均花芽分化率為28.94%，又與4.0 cm 的花芽分化率差異不顯著。由此得出結(jié)論，大巖桐植株的苗徑大小影響花芽分化，3.0 cm 的苗徑大小是其營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)化的臨界條件;達(dá)到臨界條件后，花芽分化率隨苗徑增加而逐漸增多。

3 結(jié)論與討論

誘導(dǎo)不同種類植物試管開花時(shí)所需要的培養(yǎng)基各異，植株只有在適宜的營養(yǎng)狀態(tài)、適宜的激素調(diào)控以及適宜的培養(yǎng)條件下才能誘導(dǎo)花芽分化、花器官的形成。所以探究培養(yǎng)基種類及其組成成分極其必要及重要。

植物必需的礦質(zhì)元素對(duì)植物生長發(fā)育各個(gè)階段影響差異顯著。大巖桐常規(guī)栽培養(yǎng)護(hù)，常在生殖生長時(shí)，在原營養(yǎng)液配方的基礎(chǔ)上適量加大磷、鉀肥比例，再添加硼、鎂、錳等微量元素，以利開花。研究發(fā)現(xiàn)，Mn 質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的中等無機(jī)鹽培養(yǎng)基WPM，對(duì)誘導(dǎo)大巖桐試管內(nèi)花芽分化效果最佳，其次為硝酸鉀質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高的N6 和B5 培養(yǎng)基，低無機(jī)鹽培養(yǎng)基White 效果最差。結(jié)果與常規(guī)養(yǎng)護(hù)方法基本一致，同時(shí)得出，適量增加微量元素，較增加大量元素更利于成花。

研究發(fā)現(xiàn)，在無機(jī)鹽、細(xì)胞分裂素6-BA、生長素NAA、蔗糖和瓊脂的共同作用下，對(duì)誘導(dǎo)大巖桐花芽誘導(dǎo)影響由大到小的順序?yàn)檎崽?，NAA，無機(jī)鹽、瓊脂，6-BA。蔗糖質(zhì)量濃度對(duì)大巖桐花芽誘導(dǎo)率影響最為顯著。糖在培養(yǎng)基中，為植物提供碳源，影響植物體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸和積累，進(jìn)而影響營養(yǎng)生長和生殖生長。研究發(fā)現(xiàn)，不同蔗糖質(zhì)量濃度，對(duì)誘導(dǎo)植物試管內(nèi)花芽分化效果不同，以添加40 g·L-1質(zhì)量濃度，誘導(dǎo)大巖桐花芽分化效果最佳。

外源激素在組織培養(yǎng)中調(diào)控著植物器官的發(fā)生與發(fā)育，開花基因的表達(dá)同樣也會(huì)受到激素的影響。本試驗(yàn)中，細(xì)胞分裂素6-BA 與KT 相比較，6-BA是誘導(dǎo)大巖桐分化與生長適宜的細(xì)胞分裂素，且添加低質(zhì)量濃度較為適宜，與大部分試管開花研究報(bào)道一致［2-5］。生長素NAA 較IBA，添加低質(zhì)量濃度有利于大巖桐花芽分化，較高質(zhì)量濃度NAA 抑制花芽的形成。分析可能原因，一方面低質(zhì)量濃度的NAA 提高了某些能促進(jìn)成花的內(nèi)源激素的質(zhì)量濃度［4］，另一方面，較高質(zhì)量濃度的外源激素刺激植物細(xì)胞處于高速分裂的狀態(tài)，促使植物細(xì)胞不斷生長，難以誘導(dǎo)細(xì)胞分化，即花芽分化。

試管開花研究中，常降低培養(yǎng)基中N 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)［9-18］，或提高P 的質(zhì)量分?jǐn)?shù)［9，11，19］，以提高花芽誘導(dǎo)率;而栽培中常在大巖桐花前增施P、K 肥，以提高開花質(zhì)量，增加開花數(shù)量［20］。試驗(yàn)中通過改變基本培養(yǎng)基中大量元素N、P、K 質(zhì)量分?jǐn)?shù)(即無機(jī)鹽的質(zhì)量分?jǐn)?shù))，間接起到對(duì)植株增施肥的效果。試驗(yàn)結(jié)果顯示，在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上單獨(dú)加倍P、K質(zhì)量分?jǐn)?shù)，植株長勢健壯，但基部增殖多，花芽分化受到抑制;而同時(shí)加倍N、P、K 質(zhì)量分?jǐn)?shù)，或單獨(dú)加倍N 質(zhì)量分?jǐn)?shù)，或不改變基本培養(yǎng)基無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)，對(duì)誘導(dǎo)大巖桐花芽分化較為有利，與前人試驗(yàn)結(jié)果及盆栽的養(yǎng)護(hù)方法有差異，分析原因，可能是由于N 質(zhì)量分?jǐn)?shù)的相對(duì)降低，致使植物對(duì)大量元素吸收不平衡，影響了植物體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的貯存，不能及時(shí)充分供給花芽分化時(shí)所需養(yǎng)分，從而抑制了花芽分化。

赤霉素有促進(jìn)發(fā)芽、枝葉生長、提早開花結(jié)果等作用，對(duì)植物的影響貫穿整個(gè)生命周期中的各個(gè)發(fā)育進(jìn)程［21］，有研究表明，赤霉素對(duì)雄蕊和花瓣發(fā)育很重要［22］。本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示，添加赤霉素，不能提高大巖桐花芽誘導(dǎo)率;高質(zhì)量濃度赤霉素較低質(zhì)量濃度的有利于提高花芽誘導(dǎo)率，增加成花數(shù)量，但植株徒長，長勢弱。但添加赤霉素的試驗(yàn)組，花芽后期能正常開放，且花色紅艷。杭州師范大學(xué)通過赤霉素和細(xì)胞分裂素協(xié)同作用，建立起離體大巖桐花被切塊直接再生花芽的體系，同時(shí)用酶聯(lián)免疫方法測定出花器官中的赤霉素質(zhì)量濃度水平持續(xù)增加，高于營養(yǎng)器官中的赤霉素質(zhì)量濃度［23］。結(jié)合前人研究，得出施加外源赤霉素確實(shí)能夠促進(jìn)誘導(dǎo)大巖桐花芽分化。而添加赤霉素的花芽誘導(dǎo)率低于不添加的誘導(dǎo)率，可能原因是具一定苗徑大小的試管苗，已完成營養(yǎng)生長，可以自主成花誘導(dǎo)途徑向生殖生長轉(zhuǎn)變，此時(shí)添加不適宜質(zhì)量濃度的赤霉素，會(huì)影響相關(guān)成花基因的表達(dá)，同時(shí)起到促進(jìn)莖葉生長的作用，從而表現(xiàn)出無花芽分化，植株徒長的現(xiàn)象。所以，赤霉素在植株不同生理狀態(tài)時(shí)作用，可能存在不同機(jī)制，還有待進(jìn)一步研究。但在完成花芽誘導(dǎo)后，可考慮添加赤霉素，以提高成花品質(zhì)。

常規(guī)栽培中，大巖桐以自主途徑完成花芽誘導(dǎo)，即其植株要達(dá)到一定的年齡才能開花，否則將促進(jìn)開花阻抑物基因的表達(dá)而不能開花。在花芽誘導(dǎo)試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中各成分的種類或質(zhì)量濃度變化僅對(duì)花芽誘導(dǎo)率有影響，并無培養(yǎng)基中不可或缺的絕對(duì)成分，適宜的培養(yǎng)基成分能使大巖桐試管苗有較高的花芽誘導(dǎo)率;而大巖桐試管苗的大小(即自身營養(yǎng)狀態(tài))直接影響其是否能夠分化花芽，是誘導(dǎo)其花芽分化的必要條件。植株的營養(yǎng)狀態(tài)對(duì)試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)有影響，其基本原理是植物體內(nèi)的一些化合物種類，如脯氨酸等能與激素類共同作用以誘導(dǎo)開花［24］，而處在不同生理階段的植物體內(nèi)所含化合物種類及質(zhì)量濃度不同。近年的研究中發(fā)現(xiàn)，在相同增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到的不同高度的試管苗，可能由于所處的生理狀態(tài)或生理階段不同，花芽誘導(dǎo)率有差異［10］。本試驗(yàn)中，以苗徑作為衡量植株?duì)I養(yǎng)狀態(tài)的指標(biāo)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)3.0 cm 的苗徑大小是大巖桐由營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)化的臨界條件，之后隨苗徑的增加，花芽誘導(dǎo)率增多。分析原因，可能不同苗徑的植株，所處營養(yǎng)狀態(tài)的不同，苗徑＞3.0 cm 的大巖桐試管苗，植株體內(nèi)的化合物種類與內(nèi)源激素水平與外源激素共同作用，有利于促進(jìn)成花基因的表達(dá)。

總之，WPM 是適宜大巖桐誘導(dǎo)花芽分化，且保證長勢健壯的基本培養(yǎng)基;細(xì)胞分裂素6-BA 與生長素NAA 配比適宜誘導(dǎo)大巖桐試管苗花芽分化;在WPM 的基礎(chǔ)上，增加N、P、K 質(zhì)量分?jǐn)?shù)，或增加N質(zhì)量分?jǐn)?shù)，或不改變基本培養(yǎng)基無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)，對(duì)提高大巖桐花芽分化率較為有利;誘導(dǎo)大巖桐試管內(nèi)花芽分化的適宜培養(yǎng)基為WPM+6-BA0.30 mg·L-1+NAA0.20 mg·L-1+40 g·L-1蔗糖+9 g·L-1瓊脂;赤霉素不利于健壯生長。3.0 cm 的苗徑大小是大巖桐營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)化的臨界條件，達(dá)到臨界條件后，花芽分化率隨苗徑增加而逐漸增多。

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