鄭小平

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 401121）

羊藿三七膠囊中淫羊藿苷高效液相色譜法含量測(cè)定方法改進(jìn)

鄭小平

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 401121）

目的改進(jìn)測(cè)定羊藿三七膠囊中淫羊藿苷含量的高效液相色譜（HPLC）法。方法色譜柱采用Agilent C18柱(150 mm×4．6 mm，5 m)，流動(dòng)相為乙腈-0．05%磷酸溶液（26∶74），流速為1．0 mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，柱溫為30℃。結(jié)果樣品中淫羊藿苷色譜峰達(dá)到基線分離，進(jìn)樣量在0．514～6．616 g范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系（r=0．999 7），平均回收率為98．36%，RSD為1．76%(n= 6)。結(jié)論改進(jìn)方法簡(jiǎn)化了流動(dòng)相組成和供試品溶液制備方法，簡(jiǎn)便、快速，重復(fù)性好，可用于羊藿三七膠囊的質(zhì)量控制。

羊藿三七膠囊；淫羊藿苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

羊藿三七膠囊由淫羊藿和三七經(jīng)提取制成，具有溫陽(yáng)通脈、化瘀止痛的功效，用于陽(yáng)虛血瘀所致胸痹，癥見胸痛、胸悶、心悸、乏力、氣短等，可用于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(簡(jiǎn)稱冠心病)、心絞痛屬上述證候者。現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定方中淫羊藿所含淫羊藿苷的含量，流動(dòng)相為乙腈-水-四甲基氫氧化銨（28∶72∶0．1）[1]，組分復(fù)雜，其中四甲基氫氧化銨為不常用的試劑，供試品溶液制備采用甲醇索氏提取4 h，操作煩瑣。本試驗(yàn)中對(duì)流動(dòng)相組成和供試品溶液制備方法進(jìn)行了簡(jiǎn)化，即流動(dòng)相為乙腈-0．05%磷酸溶液（26∶74），樣品采用稀乙醇直接超聲提取，樣品中淫羊藿苷色譜峰達(dá)到基線分離，含量測(cè)定結(jié)果可靠，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀（Waters 2489型紫外檢測(cè)器＜美國(guó)＞，Empower色譜工作站）。淫羊藿苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110737-200415，含量測(cè)定用）；羊藿三七膠囊（重慶三峽云海藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為130601，131201，131202）；乙腈為色譜純，水為超純水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：Agilent C18柱（150 mm×4．6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0．05%磷酸溶液（26∶74），流速：1．0 mL／min；檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm，柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2．2 溶液制備

精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0．2 mg的溶液，即得對(duì)照品溶液。取羊藿三七膠囊裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取約0．5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲（功率 220 W，頻率50 kHz）處理1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。另取缺淫羊藿的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備，即得陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取 2．2項(xiàng)下 3種溶液各 10 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣。結(jié)果陰性對(duì)照品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相同保留時(shí)間處未見色譜峰，陰性無(wú)干擾。色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品33．08 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，質(zhì)量溶度為0．661 6 g／L，作為對(duì)照品貯備液。精密吸取3 mL，置5 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，制成質(zhì)量濃度為0．661 6，0．397 0，0．238 2，0．142 9，0．085 7，0．051 4 g／L系列對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量(C，μg)為橫坐標(biāo)、峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A=2．2×107C-99 693，r=0．999 7(n=6)。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣量在0．514～6．616 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：精密吸取同一對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果的 RSD=0．10%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，于放置0，2，4，8，10 h時(shí)依法測(cè)定淫羊藿苷峰面積。結(jié)果的 RSD=0．90%（n=5），表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批號(hào)的樣品，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液5份，測(cè)定淫羊藿苷的含量。結(jié)果平均含量為每粒4．4 mg，RSD=1．30%（n=5），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取已測(cè)定含量的同一批樣品約0．25 g，各5份，分別加入對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備待測(cè)溶液，依法測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2．4 樣品含量測(cè)定

取5批羊藿三七膠囊，依法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，計(jì)算淫羊藿苷的含量。結(jié)果批號(hào)為 130601，131201，131202，140101，120501的樣品中淫羊藿苷的含量分別為每粒4．5，5．5，4．7，4．4，4．8 mg。

3 討論

考察比較流動(dòng)相乙腈-水(28∶72)[2]和乙腈-0．05%磷酸(26∶74)，結(jié)果兩者均能使樣品中淫羊藿苷色譜峰達(dá)到良好的分離，陰性對(duì)照品溶液無(wú)干擾，但前者淫羊藿苷色譜峰保留時(shí)間不恒定，易發(fā)生飄移；后者因加入的適量酸，淫羊藿苷色譜峰保留時(shí)間恒定。故選定乙腈-0．05%磷酸(26∶74)為含量測(cè)定的流動(dòng)相。

樣品分別采用甲醇、50%甲醇、乙醇、稀乙醇超聲提取1 h和甲醇索氏提取4 h（原標(biāo)準(zhǔn)方法），含量測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯差異。綜合考慮，選定稀乙醇為提取溶劑。同時(shí)對(duì)稀乙醇超聲提取時(shí)間進(jìn)行了考察，結(jié)果1 h即可將樣品中淫羊藿苷基本提取完全。

[1]YBZ01792009．國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)[S]．

[2]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典（一部）[M]．北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：306．

Determination of Icariin in Yanghuo Sanqi Capsules by Modified HPLC

Zheng Xiaoping
(Chongqing Institute for Food and Drug Control,Chongqing,China 401121)

Objective To provide more effective HPLC method for the quality control of Yanghuo Sanqi Capsules by improving the method for content determination of icariin．Methods Agilent C18column(150 mm×4．6 mm，5 m)was used with the mobile phase of acetonitrile -0．05% phosphoric acid(26∶74)at the flow rate of 1．0 mL／min．The detection wavelength was 270 nm and the column temperature was 30℃．Results Icariin in Yanghuo Sanqi Capsules could be well separated，and the calibration curve was linear in the range of 0．514-6．616 μg(r=0．999 7)．The average recovery was 98．36% with RSD of 1．76%(n=6)．Conclusion This method is accurate，rapid，simple and reproducible，and can be used for the qualitative analysis of icariin in Yanghuo Sanqi Capsules．

Yanghuo Sanqi Capsules;icariin;HPLC;content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)21-0117-02

2015-05-13)