雞新城疫的癥狀與實(shí)驗(yàn)室診斷

吳佳寧

(沈陽市動物疫病預(yù)防控制中心110000 )

新城疫(ND)是由新城疫病毒引起禽的一種急性、熱性、敗血性和高度接觸性傳染病。以高熱、呼吸困難、下痢、神經(jīng)紊亂、黏膜和漿膜出血為特征。

1臨床癥狀

患雞體溫升高到43～44℃，精神沉郁或閉眼嗜睡，病雞腹瀉呈黃白色或綠色，有時帶血，常搖頭、噯氣，發(fā)出“咯咯”聲，口和鼻中有多量黏液，嗉囊內(nèi)積液，病程稍長或呈慢性經(jīng)過時，常有腿、翅麻痹或頭、頸歪斜等神經(jīng)癥狀。剖檢特征病變是腺胃的乳頭突起部或黏膜上有點(diǎn)狀或斑狀出血，有時形成潰瘍，尤其在腺胃與食道交界部更為明顯。肌胃黏膜上有點(diǎn)狀或不正形的出血斑點(diǎn)。腸道、尤其是盲腸扁桃體和小腸黏膜(迥言瓣部)以及直腸黏膜上出血和不同大小界限清楚、出血性纖維素壞死偽膜，其他各部位如心、腹部脂肪及喉頭、氣管等處都有出血斑點(diǎn)。

2病毒分離

材料應(yīng)采自早期病例，慢性病例不適宜于分離禽病毒，病雞撲殺后應(yīng)用無菌手術(shù)采取脾、腎、肝、肺(通常有較高的病毒滴度)，腦(病毒的存在時間較其他組織長)或骨髓(最不易被細(xì)菌污染)等組織。生前可用滅菌棉拭子獲取呼吸道或泄殖腔分泌物。將棉拭子浸出液或經(jīng)研磨的組織懸液制成1:5～10乳劑，每毫升加青、鏈霉素各1000～2000單位，以抑制可能污染的細(xì)菌，置冰箱中作用2～4小時，然后離心沉淀，取其上清液作為接種材料。

2.1　雞胚接種

常用9～10日齡的雞胚，每份病料至少注入5個雞胚，接種于絨毛尿囊膜或尿囊內(nèi)。照蛋，劃出氣室位置，在雞胚胎面觀看胚胎活動，選擇無大血管處標(biāo)一記號。在氣室頂部和標(biāo)記處用碘酊和酒精消毒，并各鉆一小孔。用較干的碘酊棉球涂布小孔。用1 mL注射器吸取上述處理過的材料，插入小孔內(nèi)約3mm，緩緩注入0.1～0.2mL，拔出針頭。用融化石臘封口，在蛋殼上標(biāo)明日期。置37℃溫箱培養(yǎng)，每天照蛋二次，至全部或大部分雞胚發(fā)生死亡為止(24h內(nèi)死亡的胚棄之)。將死胚收藏于4℃冰箱內(nèi)，氣室向上，6～24h獲尿囊液。

收獲尿囊液時，以碘酊涂擦氣室和氣室附近的蛋殼，用滅菌攝子將氣室處蛋殼敲破，剝?nèi)サ皻?，用另一滅菌小鑷子剝?nèi)サ皻つぃ⑺浩平q尿膜，暴露出清晰的尿囊液(混濁者已污染，應(yīng)棄去不收)，以鑷子將胚胎和胚膜壓向一邊，吸取尿囊液于滅菌瓶中，并加標(biāo)簽。

用透明而無菌者作血凝反應(yīng)，可在96孔微孔板上進(jìn)行，也可將尿囊液一滴與1%～2%雞紅細(xì)胞懸液一滴在一塊白瓷板上相混和，如發(fā)生紅細(xì)胞凝集，即用已知抗雞新城疫血清作血球凝集抑制試驗(yàn)(HI)，出現(xiàn)抑制反應(yīng)，便可得到確診。

2.2　組織培養(yǎng)(細(xì)胞培養(yǎng))

雞新城疫病毒能在禽源原代細(xì)胞，一些哺乳動物的原代細(xì)胞和細(xì)胞系中生長繁殖，因此也可用細(xì)胞培養(yǎng)的方法來分離病毒。最常用的是在玻璃和塑料容器內(nèi)長成單層的雞胚成纖維細(xì)胞。操作時可將待檢液作一系列十倍比的稀釋，分別注入到雞胚成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)管中，24～48h出現(xiàn)細(xì)胞病變(細(xì)胞圓縮顆粒化，拉長呈蜘蛛網(wǎng)或干枝梅樣)，取培養(yǎng)液作HA和HI試驗(yàn)，鑒定病毒。也可在細(xì)胞培養(yǎng)中用已知血清進(jìn)行中和試驗(yàn)，作出鑒定結(jié)果，如將待檢材料注入雞胚成纖維細(xì)胞的平皿培養(yǎng)中。新城疫強(qiáng)毒通常出現(xiàn)大而透明或大而紅色蝕斑(2～4mm)。根據(jù)蝕斑形成單位可測定病毒濃度。

3血清學(xué)檢查

由于循環(huán)抗體產(chǎn)生后，病毒可從寄主的組織中迅帶消失，所以慢性病例難于分離病毒，應(yīng)通過特異抗體的檢查來間接診斷此病。通常中和抗體較血凝抑制(HI)抗體維持時間要長些，但中和試驗(yàn)較費(fèi)時花錢，而HI試驗(yàn)?zāi)茉诙虝r間內(nèi)作大量測定，檢出的抗體滴度一般相當(dāng)于中和滴度。因此常用HI試驗(yàn)來檢查抗體。抗體滴度于感染后5～7d開始上升，15～20d可達(dá)高峰且能維持較長時間，受強(qiáng)毒感染而耐過的雞在體內(nèi)產(chǎn)生極高的抗體水平，滴度高達(dá)11(Log2)以上。在感染群內(nèi)出現(xiàn)高抗體的數(shù)量隨雞群原有的抗體水平而異，與雞的年齡也有關(guān)系，平均可達(dá)30%，在只有少數(shù)出現(xiàn)癥狀，不斷發(fā)生死亡的雞群中，可對活雞進(jìn)行抗體檢測。如有較多高抗體雞的出現(xiàn)，說明雞群已受過新城疫野毒感染。免疫過較長時間的雞群持續(xù)保持高水平的抗體，可能是隱性感染或慢性感染的結(jié)果。