郭 珺 俞 軍 陳永亮 楊先樂 胡 鯤 曹海鵬

(上海海洋大學(xué), 上海 201306)

人參莖葉提取物對刺參生長、免疫及抗病力的影響

郭 珺 俞 軍 陳永亮 楊先樂 胡 鯤 曹海鵬

(上海海洋大學(xué), 上海 201306)

以初始體重為(4.91±0.17) g的刺參(Apostichopus japonicas)為研究對象, 研究投喂不同劑量人參莖葉提取物對刺參生長、免疫及抗病力的影響, 探討人參莖葉提取物在刺參養(yǎng)殖中的應(yīng)用。在每千克基礎(chǔ)飼料中分別添加10、20、40和80 g人參莖葉提取物作為實(shí)驗(yàn)組, 并以基礎(chǔ)飼料為對照進(jìn)行為期30d的飼喂養(yǎng)殖。結(jié)果顯示, 投喂人參莖葉提取物對刺參的生長并無顯著影響, 刺參特定生長率不隨人參莖葉提取物添加量的增加而提高。當(dāng)人參莖葉提取物添加量為80 g/kg時(shí), 刺參體腔細(xì)胞總數(shù)、呼吸暴發(fā)強(qiáng)度、細(xì)胞吞噬活性、超氧化物歧化酶活力、總一氧化氮合酶活力均顯著高于對照組(P＜0.05); 當(dāng)人參莖葉提取物添加量為40 g/kg 時(shí), 細(xì)胞吞噬活性也顯著高于對照組(P＜0.05), 但其余免疫指標(biāo)與對照組相比無顯著差異(P＞0.05); 當(dāng)人參莖葉提取物的添加量不大于20 g/kg時(shí), 各項(xiàng)免疫指標(biāo)與對照組之間均無顯著差異(P＞0.05)。攻毒實(shí)驗(yàn)表明, 20、40和80 g/kg人參莖葉提取物組的健康率要高于對照組, 其中80 g/kg人參莖葉提取物組健康率為80.56%要顯著高于對照組和10 g/kg人參莖葉提取物組(P＜0.05)。人參莖葉提取物可作為免疫增強(qiáng)劑應(yīng)用于刺參的養(yǎng)殖中來提高刺參的免疫和抗病能力。

刺參; 人參莖葉提取物; 生長; 免疫; 抗病

全世界約有1200多種海參[1], 而能夠?yàn)槿祟愂秤玫拇蠹s40種。海參含有豐富的蛋白質(zhì), 較低的脂肪和糖含量[2], 同時(shí)還具有鈣、鎂、鐵、鋅、硒、錳等微量元素[3]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明, 海參含有多種生物活性成分: 海參神經(jīng)節(jié)苷脂具有協(xié)同神經(jīng)生長因子(NGF)的作用從而誘發(fā)神經(jīng)軸突生長[4], 從而為治療老年癡呆等神經(jīng)退化病提供了可能; 從海參中分離得到的不同海參皂苷分別具有抑制腫瘤細(xì)胞生長、抗菌、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫、促進(jìn)骨髓紅細(xì)胞生長等作用[5—9]; 此外, 海參多糖有著抑制血管栓塞、治療慢性肝炎等特殊功效[10, 11]。在我國, 人們常說的海參通常指北方環(huán)渤海域的刺參(Apostichopus japonicas), 是所有海參中品質(zhì)最好的。

我國刺參養(yǎng)殖業(yè)在20世紀(jì)90年代得到快速發(fā)展, 各種病害問題也日益嚴(yán)重, 其中以腐皮綜合癥(又稱皮膚潰爛病、化皮病)危害最大, 造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失, 嚴(yán)重制約刺參產(chǎn)業(yè)的持續(xù)健康發(fā)展[12]。傳統(tǒng)抗生素和化學(xué)消毒劑的應(yīng)用雖然能起到防治病害的作用, 但同時(shí)也會(huì)帶來藥殘和耐藥性等問題。中草藥是天然藥物, 具有毒性低、易降解、安全環(huán)保等特點(diǎn), 王印庚等[13]發(fā)現(xiàn)穿心蓮、大青葉、金銀花和川芎4種中草藥對海參腐皮綜合癥4種重要病原菌燦爛弧菌、假交替單胞菌、哈維氏弧菌和惡臭假單胞菌有較好的抑菌效果; 侯文久等[14]發(fā)現(xiàn)訶子、五倍子、牡丹皮、石榴皮等8種草藥對海參腐皮綜合癥病原菌黃海希瓦氏菌有較好的抑菌活性。

人參(Panax ginseng C.A.Mey.)是一種名貴的藥用植物, 自古以來都有“百草之王”的美譽(yù), 是聞名遐邇的“東北三寶”之一。研究表明人參具有提高哺乳動(dòng)物機(jī)體免疫、增強(qiáng)機(jī)體適應(yīng)性、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌和抗腫瘤等效果[15—17]。人參的藥用價(jià)值主要體現(xiàn)在其根中, 需6、7年才能收獲取得, 而莖葉中其有效成分較少[18], 但也含有皂苷類、黃酮類、有機(jī)酸類、多糖類等多種化學(xué)有效成分[19, 20], 每年均可采摘價(jià)格也有很大優(yōu)勢, 因此同樣具有較好的藥用價(jià)值。許多研究表明人參莖葉中所含有的藥用有效成分可通過某種方法提取分離出來, 使得人參的價(jià)值可以得到最大的利用[19—22]。人參莖葉的有效成分本對水產(chǎn)動(dòng)物、低等動(dòng)物的影響暫無報(bào)道, 但對畜禽、哺乳動(dòng)物的影響有相關(guān)研究。目前在水產(chǎn)中還沒有關(guān)于人參莖葉應(yīng)用的報(bào)道, 本實(shí)驗(yàn)通過不同劑量的人參莖葉提取物與飼料預(yù)混投喂, 以探討不同劑量人參莖葉提取物對刺參生長、免疫及抗病的影響, 為刺參新型中草藥免疫增強(qiáng)劑的研究和臨床應(yīng)用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)刺參購于遼寧大連獐子島集團(tuán)有限公司,初始重量(4.91±0.17) g。人參莖葉提取物由北京中農(nóng)勁騰生物技術(shù)有限公司提供。實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)飼料的配方見表1。將人參莖葉提取物干燥并碾磨成粉狀, 然后在每千克基礎(chǔ)飼料中分別添加10、20、40和80 g, 對照組不添加, 將實(shí)驗(yàn)飼料混合均勻100目過篩, 30℃風(fēng)干并儲(chǔ)存于–20℃冰箱備用。

1.2 養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)分 4個(gè)實(shí)驗(yàn)組和1個(gè)對照組, 每組 3個(gè)重復(fù), 分別飼養(yǎng)在 120 L容量的塑料桶中, 每個(gè)塑料桶加水量為 100 L, 并投入兩張聚乙烯網(wǎng)片供刺參棲息和攝食, 每個(gè)水桶放20只刺參。正式實(shí)驗(yàn)前, 對刺參進(jìn)行暫養(yǎng), 投喂基礎(chǔ)飼料, 使刺參逐漸適應(yīng)新的環(huán)境。實(shí)驗(yàn)前饑餓刺參24h, 并稱重記錄。實(shí)驗(yàn)期間溶氧≥6 mg/L, 鹽度 28‰—32‰, pH 8.0±0.3, 每天早上全量換水并吸除糞便及殘餌, 新水為經(jīng)砂石過濾的新鮮海水, 每天投喂一次實(shí)驗(yàn)飼料, 投喂量為刺參體重的5%, 養(yǎng)殖周期為30d。

1.3 樣品的采集與處理

在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后, 每桶隨機(jī)選取 5只刺參, 用 1 mL無菌注射器分別于各刺參體腔中抽取等量體腔液并混合均勻, 取 300 μL體腔液與抗凝劑(0.02 mol/L EGTA, 0.48 mol/L NaCl, 0.019 mol/L KCl, 0.068 mol/L Tris-HCl, pH 7.6)[23]按體積比為 1∶1混勻制成抗凝體腔液, 用于總細(xì)胞計(jì)數(shù)、吞噬活性和呼吸暴發(fā)的測定; 700 μL體腔液經(jīng)離心 10min (3000×g, 4℃), 上清液即無細(xì)胞體腔液, 用于體液溶菌酶、酚氧化酶、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、酸性磷酸酶、總一氧化氮合酶活性的測定。若不能及時(shí)測定將待測樣本于–80℃下保存, 測定時(shí)需將在–80℃保存的樣本先轉(zhuǎn)移到冰塊中解凍, 再用于其他免疫指標(biāo)的測定。

表1 基礎(chǔ)飼料配方及營養(yǎng)組成(干物質(zhì)基礎(chǔ))Tab. 1 The nutritional composition of the dry matter in the basal diet

1.4 測定方法

特定生長率 在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后, 對刺參饑餓24h后計(jì)數(shù)并稱重, 計(jì)算特定生長率。

Wt為刺參終末體重, W0為刺參初始體重, t為養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)的天數(shù)。

體腔總細(xì)胞計(jì)數(shù) 體腔液總細(xì)胞計(jì)數(shù)采用血球計(jì)數(shù)板, 在 40×10倍光學(xué)顯微鏡下稀釋一倍后直接計(jì)數(shù), 計(jì)算出每毫升體腔液中體腔細(xì)胞數(shù)目。

細(xì)胞吞噬活性測定 吞噬活性的測定采用中性紅法[24, 25]。結(jié)果用全波長酶標(biāo)儀在540 nm波長處測吸光值, 以試驗(yàn)條件下每 106個(gè)體腔細(xì)胞對應(yīng)的吸光值來表示吞噬活性。

細(xì)胞呼吸暴發(fā)活力(O2–)測定 超氧陰離子(O2–)的測定采用四氮唑藍(lán)測定法[26]。以KOH/DMSO作為空白對照, 利用酶標(biāo)儀于波長630 nm處測定吸光值A(chǔ)630, 其定義為在試驗(yàn)條件下每l06個(gè)體腔細(xì)胞對應(yīng)的吸光度值。

溶菌酶活性測定 溶菌酶活力通過濁度比色法測定[27, 28]。反應(yīng)底物為用磷酸緩沖液 PBS (0.05 mol/L、pH=6.2)配制的0.2 mg/mL溶壁微球菌粉(Sigma)懸液。100 μL無細(xì)胞體腔液與1.9 mL菌懸液混合, 在25℃下反應(yīng)。在530 nm波長下, 分別在0.5min和4.5min測定吸光值(OD)。以每毫升反應(yīng)液每分鐘使含菌酶液吸光值減少 0.001定義為一個(gè)酶活力單位(U/mL)。

酚氧化酶活性測定 酚氧化酶的測定使用左旋多巴(L-DOPA)作為底物, 與酚氧化酶反應(yīng)后以光密度來檢測酚氧化酶活性[29]。取50 μL無細(xì)胞體腔液、50 μL磷酸緩沖液PBS (0.1 mol/L, pH 6.0) 和100 μL左旋多巴(L-DOPA, 0.01 mol/L)加入到96孔板中, 于 25℃下反應(yīng) 10min, 立即放入酶標(biāo)儀, 在490 nm處進(jìn)行吸光度測定, 每分鐘測定一次吸光度,連續(xù)測定10min, 以試驗(yàn)條件下每毫升體腔液每分鐘吸光度值每增加0.001定義為一個(gè)酶活力單位(U/mL)。

超氧化物歧化酶(SOD)的活性測定 超氧化物歧化酶(SOD)的活性測定是根據(jù)羥胺法來測定。SOD能通過抑制黃嘌呤與黃嘌呤氧化酶反應(yīng)體系中產(chǎn)生的超氧陰離子自由基來判斷, 產(chǎn)生的超氧陰離子自由基可與其他物質(zhì)顏色反應(yīng), 可以通過光密度來測定[30], 采用 SOD檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)和 96孔板檢測, 結(jié)果使用酶標(biāo)儀在550 nm處測吸光值。以每毫升體腔液中每分鐘抑制率達(dá)50%的酶量定義為一個(gè)活力單位(U/mL)。具體表示為每毫升體腔液中SOD的活力單位。

過氧化氫酶(CAT)的活性測定 過氧化氫酶的活性測定采用鉬酸銨比色法[31, 32]。CAT可催化H2O2釋放出氧氣, 迅速加入鉬酸銨可終止反應(yīng), 而多余的 H2O2與鉬酸銨作用生產(chǎn)黃色絡(luò)合物, 其在410 nm處有最大吸收峰, 因此可以通過鉬酸銨比色法來測定過氧化氫酶的活性。采用CAT檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)和96孔板測定, 以每毫升體腔液每秒分解1 μmol H2O2的量為一個(gè)活力單位(U/mL)。

酸性磷酸酶(ACP)活性測定 酸性磷酸酶(ACP)的測定采用磷酸苯二鈉法, ACP在酸性條件下可以分解磷酸苯二鈉產(chǎn)生游離酚和磷酸, 產(chǎn)生的酚與 4-氨基安替吡啉以及鐵氰化鉀反應(yīng)生成紅色醌衍生物, 利用光密度法在520 nm處測吸光值來確定酶活。采用酸性磷酸酶檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)和 96孔板進(jìn)行檢測, 依據(jù)試劑盒的操作手冊要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。酶活定義為37℃時(shí), 每100 mL體腔液在30min內(nèi)產(chǎn)生1 mg硝基酚為l個(gè)酶活單位(U/100mL)。

總一氧化氮合酶(T-NOS)活性測定 一氧化氮合酶(NOS)可以催化L-精氨酸生產(chǎn)一氧化氮(NO),一氧化氮(NO)再被氧化成亞硝酸鹽(NO2–)和硝酸鹽(NO3–), 硝酸鹽(NO3–)在硝酸還原酶的作用下生產(chǎn)亞硝酸鹽(NO2–), 通過加入 Griess試劑將所有的亞硝酸鹽(NO2–)轉(zhuǎn)變成有色化合物, 可以通過530 nm處的吸光值來確定酶活[33, 34]。采用一氧化氮合酶檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所)和96孔板測定,酶活定義為在試驗(yàn)條件下每毫升體腔液每min生成1 μmol NO 為1個(gè)酶活性單位(U/mL)

1.5 攻毒實(shí)驗(yàn)

攻毒實(shí)驗(yàn)使用病原菌燦爛弧菌, 方法參照 Liu[35]和孫永欣等[36]的方法。做適當(dāng)修改。在養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后, 每個(gè)實(shí)驗(yàn)桶隨機(jī)選取12只刺參放入20 L含燦爛弧菌(107cells/mL)的海水中不間斷充氣養(yǎng)殖 7d,攻毒實(shí)驗(yàn)期間不進(jìn)行投喂。觀察刺參的發(fā)病情況,并對刺參的健康率(刺參中未出現(xiàn)發(fā)病癥狀和死亡的比例)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。發(fā)病表現(xiàn)為體壁潰爛和腫嘴, 體壁潰爛癥狀為出現(xiàn)白藍(lán)色潰瘍表面, 并伴有大量黏液; 腫嘴癥狀表現(xiàn)為嘴部肌肉呈透明松弛狀, 并無法閉合[37]。

1.6 統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)結(jié)果采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行單因素方差分析(ANOVA)以及鄧肯(Duncan)多重比較, 當(dāng)P＜0.05時(shí)結(jié)果存在顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 人參莖葉提取物對刺參特定生長率的影響

與對照組(0 g/kg)相比, 基礎(chǔ)飼料中加入人參莖葉提取物能不同程度地促進(jìn)刺參的生長。數(shù)據(jù)表明刺參特定生長率的提高與人參莖葉提取物的添加量不成正比, 特定生長率最低的為對照組的 0.66%,最高為40 g/kg人參莖葉提取物添加組的0.88%, 但各添加組與對照組之間均無顯著性差異(P＞0.05)(表2)。

2.2 人參莖葉提取物對刺參體腔總細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞吞噬、呼吸暴發(fā)的影響

與對照組(0 g/kg)相比, 在基礎(chǔ)飼料中添加高劑量的人參莖葉提取物時(shí), 對刺參體腔總細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞吞噬活性和呼吸暴發(fā)強(qiáng)度有增強(qiáng)作用。其中80 g/kg人參莖葉提取物添加組刺參的體腔細(xì)胞總數(shù)、呼吸暴發(fā)強(qiáng)度都顯著高于對照組(P＜0.05), 細(xì)胞吞噬活性顯著高于對照組和其余人參莖葉提取物添加組(P＜0.05); 40 g/kg人參莖葉提取物添加組的細(xì)胞吞噬活性要顯著高于 20 g/kg人參莖葉提取物添加組、10 g/kg人參莖葉提取物添加組和對照組(P＜0.05), 體腔細(xì)胞總數(shù)和呼吸暴發(fā)強(qiáng)度相比對照組有不同程度提高, 但無顯著差異(P＞0.05); 20 g/kg人參莖葉提取物添加組與 10 g/kg人參莖葉提取物添加組的體腔細(xì)胞總數(shù)、細(xì)胞吞噬活性和呼吸暴發(fā)強(qiáng)度與對照組相比均無顯著差異(P＞0.05)(表3)。

2.3 人參莖葉提取物對刺參體液免疫指標(biāo)的影響

與對照組(0 g/kg)相比, 人參莖葉提取物高劑量添加組均能不同程度提高刺參體液免疫指標(biāo)各酶活力, 而人參莖葉提取物中低劑量組引起刺參部分體液免疫指標(biāo)的降低。其中, 80 g/kg人參莖葉提取物添加組刺參的超氧化物歧化酶活力、總一氧化氮合酶的活力都顯著高于對照組及其余各添加組(P＜0.05), 酚氧化酶活力和過氧化氫酶活力顯著高于10 g/kg人參莖葉提取物組(P＜0.05)但與其余各組無顯著差異(P＞0.05); 40 g/kg人參莖葉提取物添加組與對照組相比, 各體液免疫指標(biāo)均有提高, 但均無顯著差異(P＞0.05); 20 g/kg人參莖葉提取物添加組和 10 g/kg人參莖葉提取物添加組的部分體液免疫指標(biāo)要低于對照組, 但無顯著差異(P＞0.05); 在本實(shí)驗(yàn)條件下, 對照組與其余人參莖葉提取物不同劑量添加組在溶菌酶和酸性磷酸酶活力上無顯著差異(P＞0.05)。

2.4 攻毒實(shí)驗(yàn)

人工感染刺參腐皮綜合癥病原菌-燦爛弧菌 7d,刺參的健康率隨人參莖葉提取物添加量增加而提高。80 g/kg人參莖葉提取物添加組在為期7d的感染試驗(yàn)后的健康率為 80.56%, 要顯著高于對照組(0 g/kg)的58.33%和10 g/kg人參莖葉提取物添加組的55.56%(P＜0.05), 但與20 g/kg人參莖葉提取物添加組(66.67%)和 40 g/kg人參莖葉提取物添加組(69.44%)無顯著差異(P＞0.05); 40 g/kg人參莖葉提取物添加組和 20 g/kg人參莖葉提取物添加組刺參經(jīng)7d感染試驗(yàn)后的健康率不同程度高于對照組和10 g/kg人參莖葉提取物添加組, 但與其余各組均無顯著差異(P＞0.05)(圖1)。

表2 人參莖葉提取物對刺參特定生長率的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤, n=3)Tab. 2 Effects of the extracts from the stem and leaf of ginseng on the specific growth rate of Apostichopus japonicus (SGR, %/d, means± SE, n=3)

表3 人參莖葉提取物對刺參體腔總細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞吞噬、呼吸暴發(fā)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤, n=3)Tab. 3 Effects of the extracts from the stem and leaf of ginseng on the total coelomocytes counts, the phagocytic assay and the respiratory burst activity in Apostichopus japonicas (means±SE, n=3)

表4 人參莖葉提取物對刺參體液免疫指標(biāo)的影響(平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤, n=3)Tab. 4 Effects of the extracts from the stem and leaf of ginseng on the humoral immunity of Apostichopus japonicas (means±SE, n=3)

3 討論

3.1 人參莖葉提取物對刺參生長的影響

王本祥等[38]發(fā)現(xiàn)人參莖葉皂苷可促進(jìn)未成年小鼠、大鼠及豬的生長, 這可能與其促進(jìn)RNA和蛋白質(zhì)合成作用有關(guān), 其他研究也表明人參莖葉皂苷也能促進(jìn)雛雞的生長[39]。在本實(shí)驗(yàn)的30d投喂養(yǎng)殖周期內(nèi), 投喂人參莖葉提取物組較對照組的生長率有一定提高, 但效果不明顯, 這可能使由于人參莖葉提取物種人參皂苷含量較低所致。生長率最高的人參莖葉提取物投喂量是在40 g/kg, 而再增加投喂量至80 g/kg時(shí), 生長率反而下降, 具體原因尚不明確,有待進(jìn)一步研究人參莖葉提取物添加量與飼料利用率的關(guān)系。

3.2 人參莖葉提取物對刺參免疫細(xì)胞的影響

刺參體腔中含有大量參與免疫防御過程的細(xì)胞,包括吞噬變性細(xì)胞、有色和無色球形細(xì)胞、祖原細(xì)胞、晶體細(xì)胞、振顫細(xì)胞和血細(xì)胞[40], 它們具有吞噬和消化異物等功能, 細(xì)胞在吞噬異物或病原的過程中也會(huì)產(chǎn)生具有強(qiáng)烈殺傷能力的超氧陰離子自由基O–, 它的強(qiáng)弱直接反應(yīng)細(xì)胞的殺傷效能[41]。趙蕭蕭等[42]研究發(fā)現(xiàn)人參莖葉多糖能提高小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬和淋巴細(xì)胞的增殖, 人參莖葉提取物由于含有人參莖葉多糖, 對刺參細(xì)胞免疫也有著顯著影響,當(dāng)投喂人參莖葉提取物添加量達(dá)到20 g/kg時(shí), 刺參體腔總細(xì)胞數(shù)較對照有提高, 而當(dāng)添加量達(dá)到 80 g/kg時(shí)能顯著提高刺參體腔細(xì)胞總數(shù); 同樣, 人參莖葉提取物添加量大于等于 40 g/kg時(shí)能顯著提高刺參體腔細(xì)胞的吞噬能力; 超氧陰離子的含量在大于等于40 g/kg時(shí)才有提高, 并且80 g/kg的添加量能顯著提高刺參體腔細(xì)胞呼吸暴發(fā)的活力。這表明低劑量的人參莖葉提取物不能有效提高刺參的細(xì)胞免疫能力, 但隨著劑量的增加, 刺參細(xì)胞免疫力也逐步上升。3.3 人參莖葉提取物對刺參體液免疫指標(biāo)的影響

圖1 人參莖葉提取物對刺參抗?fàn)N爛弧菌的影響Fig. 1 Effects of the extracts from the stem and leaf of ginseng on the resistance to V. splendidus in Apostichopus japonicus

刺參除了細(xì)胞免疫外還有著多種對抗外界病原及異物的體液免疫, 由于刺參只具有非特異性免疫,因此這些免疫指標(biāo)在刺參體液免疫中起著不可替代的重要作用。人參莖葉皂苷已被證明可以提高小鼠超氧化物歧化酶的活性[43], 在本實(shí)驗(yàn)中, 投喂人參莖葉提取物不同添加量的飼料在4周的實(shí)驗(yàn)周期內(nèi),與對照組相比體液溶菌酶(LSZ)、酚氧化酶(PO)、過氧化氫酶(CAT)和酸性磷酸酶(ACP)的活性都無顯著性提高, 但40 g/kg和80 g/kg添加量組刺參體液中的這四種酶與對照組相比都有提高; 當(dāng)人參莖葉提取物添加量達(dá)到80 g/kg時(shí), 刺參體液中的超氧化物歧化酶(SOD)和總一氧化氮合酶(T-NOS)相比對照組具有顯著提高, 而其余各處理組與對照組酶活性相差不大。對刺參體液免疫指標(biāo)而言, 在實(shí)驗(yàn)條件下最高添加量組對免疫指標(biāo)影響最大, 大部分實(shí)驗(yàn)組對刺參免疫指標(biāo)的影響不夠顯著, 有待做時(shí)間與藥效之間關(guān)系的進(jìn)一步研究。

3.4 人參莖葉提取物對刺參抗病能力的影響

目前還未見有報(bào)道人參莖葉提取物對水產(chǎn)動(dòng)物抗病力影響的研究, 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明人參莖葉提取物在20 g/kg以上時(shí)可以提高刺參的健康率, 其中投喂含 80 g/kg的人參莖葉提取物飼料組與空白對照組相比, 效果最好, 這與提升刺參免疫力效果的結(jié)果相一致, 這可能是人參莖葉提取物通過提高刺參的非特異性免疫進(jìn)而提升其對燦爛弧菌病原感染的抵抗力的結(jié)果。

在本實(shí)驗(yàn)中, 人參莖葉提取物的添加量達(dá)到最高的80 g/kg時(shí), 刺參的免疫和抗病能力均顯著最高,這表明人參莖葉提取物可作為一種高價(jià)值的水產(chǎn)免疫增強(qiáng)劑得到應(yīng)用。與此同時(shí), 人參莖葉提取物是否能提高刺參的營養(yǎng)、藥用價(jià)值以及更高添加量能否進(jìn)一步提高刺參的生長、免疫和抗病力有待進(jìn)一步的研究。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)首次將人參莖葉提取物用于水產(chǎn)中, 作為高價(jià)值水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的免疫增強(qiáng)劑, 其對刺參的生長、免疫和抗病具有一定的影響。結(jié)合本次實(shí)驗(yàn)所有數(shù)據(jù), 表明飼料中添加人參莖葉提取物可以提高刺參的免疫能力, 同時(shí)也能減低刺參感染腐皮綜合癥的幾率, 但對促進(jìn)刺參生長效果不明顯, 本次試驗(yàn)的最佳添加量為80 g/kg。

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EFFECTS OF GINSENG STEM AND LEAF EXTRACTS ON THE GROWTH, IMMUNITY AND THE RESISTANCE TO DISEASES IN SEA CUCUMBERS (APOSTICHOPUS JAPONICAS)

GUO Jun, YU Jun, CHEN Yong-Liang, YANG Xian-Le, HU Kun and CAO Hai-Peng
(Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China)

To investigate the actual effects of ginseng stem and leaf extracts in the farming of sea cucumbers (Apostichopus japonicas), we conducted experiments to study the growth, immunity and the resistance to diseases in sea cucumbers treated with ginseng extracts. The sea cucumbers had an initial body weight of (4.91±0.17) g, and were fed with ginseng stem-leaf extracts at the levels of 10, 20, 40 and 80 g per kg for 30 days. Basal diet without ginseng abstract served as the control treatment. The specific growth rates (SGR) of sea cucumbers showed no changes in response to the increase in ginseng stem-leaf extracts. Compared to the control, sea cucumbers fed with 80 g/kg ginseng stem-leaf extracts showed significantly higher levels in total coelomocytes count (TCC), respiratory burst (RB) activity, phagocytosis, superoxide dismutase (SOD), and total nitric oxide synthase (T-NOS) (P＜0.05). Enhancement in phagocytosis was also observed in sea cucumbers fed with 40 g/kg ginseng stem-leaf extracts (P＜0.05). However, there were no significant differences in other immune parameters between the 10 g/kg group, the 20 g/kg group, and the control group (P＞0.05). Results of the challenge trial suggested that sea cucumbers fed with 20 g/kg, 40 g/kg and 80 g/kg ginseng stem-leaf extracts were healthier than the control. The health rate of sea cucumbers fed with 80 g/kg ginseng stem-leaf extracts was 80.56%, which was significantly higher than the control and the 10 g/kg group (P＜0.05). Therefore, we concluded that the treatment with ginseng stem-leaf extracts might improve the immunity and the resistance to diseases in sea cucumbers and thus could be used as an immunity enhancer in the farming of the sea cucumbers.

Sea cucumber; Ginseng stem-leaf extracts; Growth; Immunity; Disease resistance

S968.9

A

1000-3207(2015)06-1085-08

10.7541/2015.143

2014-10-15;

2015-01-11

科技部863課題“新型環(huán)境友好型漁藥的研制與漁藥安全性評價(jià)”(2011AA10A216); 上海高校水產(chǎn)一級學(xué)科建設(shè)與上海高校知識服務(wù)平臺(tái)項(xiàng)目(ZF1206)資助

珺郭 (1990—), 男, 湖南永州人; 碩士; 主要研究方向?yàn)樗a(chǎn)動(dòng)物醫(yī)、藥學(xué)。E-mail: 475579407@qq.com

楊先樂(1948—), 教授; E-mail: xlyang@shou.edu.cn