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DM大鼠腎組織Id2蛋白表達(dá)變化與纖維化病變發(fā)生發(fā)展關(guān)系的研究*

**通信作者 E-mail:yxhx20060725@126.com

網(wǎng)絡(luò)出版時間：2015-04-20網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20150420.1840.009.html

文箐潁， 蘇博， 肖瑛**， 王圓圓， 李霜， 劉麗榮， 石明雋， 郭兵

(貴陽醫(yī)學(xué)院 病理生理學(xué)教研室， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 動態(tài)觀察分化抑制因子2(Id2)在糖尿病大鼠血糖控制前后腎小管上皮細(xì)胞的表達(dá)變化，探討其在腎小管上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程(EMT)中可能發(fā)揮的作用。方法： 雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組(N)、糖尿病組(DM)，糖尿病胰島素治療組(DMT)，采用鏈脲佐菌素(55 mg/kg)尾靜脈注射復(fù)制Ⅰ型糖尿病大鼠模型，N組和DM組成模后分別于2周(2 w)、8周(8 w)、16周(16 w)、24周(24 w)時各處死6只；成模13周(13 w)起，DMT組大鼠采用胰島素個體化治療，以血糖控制在4~7 mmol/L,尿糖陰性為準(zhǔn)，分別于16 w和24 w時處死6只大鼠；觀察大鼠血糖、24 h尿蛋白并計算腎臟指數(shù)，HE、PAS染色光鏡下觀察腎組織結(jié)構(gòu)的變化，免疫組化觀察大鼠腎臟纖維連接蛋白(FN)的蛋白表達(dá)情況，Western blotting檢測大鼠腎組織分化抑制因子(Id2)、E-鈣粘素(E-cadherin)和α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的蛋白變化，RT-PCR檢測腎組織Id2 mRNA表達(dá)情況。結(jié)果： (1)與N組相比，不同時間點DM組血糖、24 h尿蛋白量、腎臟指數(shù)均顯著升高(P<0.01)，并出現(xiàn)腎組織形態(tài)學(xué)異常改變；而DMT組血糖、24 h尿蛋白量、腎臟指數(shù)均低于DM組(P<0.05)，腎纖維化病變改善；(2)與N組比較，DM組腎組織Id2蛋白和mRNA的表達(dá)從2 w開始減少，16 w、24 w顯著減少(P<0.05)，并伴有E-cadherin的表達(dá)減少(P<0.05)、α-SMA表達(dá)增加(P<0.05)和FN蛋白的沉積增多(P<0.05)，相關(guān)性分析顯示Id2蛋白與FN蛋白成負(fù)相關(guān)(r=-0.931,P<0.05)，與E-cadherin蛋白成正相關(guān)(r=0.900 0, P<0.05)；(3)與DM組相比，DMT組大鼠腎組織Id2蛋白和mRNA表達(dá)均明顯增加(P<0.05)，且E-cadherin的表達(dá)增加(P<0.05)、α-SMA的表達(dá)及FN在間質(zhì)沉積減少(P<0.05)。結(jié)論： 胰島素在控制血糖能上調(diào)腎小管上皮細(xì)胞Id2蛋白的表達(dá)，恢復(fù)Id2對腎纖維化的負(fù)調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而逆轉(zhuǎn)腎小管上皮細(xì)胞的EMT及減輕腎間質(zhì)ECM的沉積，改善DN腎纖維化病變。

[關(guān)鍵詞]糖尿病腎病; 纖維化； 分化抑制因子2； 纖維連接蛋白； E-鈣黏素； α-平滑肌肌動蛋白； 大鼠，Sprague-Dawley

越來越多的證據(jù)表明，腎小管上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(epithelial- mesenchymal transition, EMT)是腎間質(zhì)纖維化發(fā)生、發(fā)展的主要機(jī)制之一，也是DN腎小管間質(zhì)纖維化的主要原因[1-2]，故抑制或逆轉(zhuǎn)EMT對延緩DN病情發(fā)展具有重要的意義。EMT過程涉及多種細(xì)胞事件和分子介質(zhì)的參與和相互作用，影響因素眾多且作用復(fù)雜，故對其分子機(jī)制的認(rèn)識仍不甚清楚。分化抑制因子2或DNA結(jié)合抑制因子2(inhibitors of differentiation or inhibitors of DNA binding)屬于螺旋-環(huán)-螺旋(helix-loop-helix, HLH)轉(zhuǎn)錄因子家族，是一種廣泛存在于哺乳動物細(xì)胞中的核轉(zhuǎn)錄因子的負(fù)調(diào)控蛋白。研究發(fā)現(xiàn)，Id2蛋白除具有抑制細(xì)胞分化、促進(jìn)細(xì)胞增殖作用、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、維持細(xì)胞存活、促進(jìn)血管形成等作用外，Id2蛋白與一些臟器纖維化有關(guān)，如肝纖維化、肺纖維化、晶狀體等且可能有抑制EMT發(fā)生的作用。目前對于在DN腎臟纖維化過程中Id2與EMT的關(guān)系及Id2蛋白表達(dá)的動態(tài)變化，研究報道尚少。因此，本研究動態(tài)觀察分化抑制因子Id2蛋白在糖尿病大鼠腎組織中的表達(dá)變化及胰島素控制血糖后對Id2蛋白表達(dá)和纖維化病變的影響，初步探討Id2負(fù)調(diào)節(jié)腎纖維化的作用及可能機(jī)制。

1材料與方法

1.1　材料

1.1.1實驗動物雄性清潔級Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重180~220 g，購于北京華阜康生物科技投資有限公司，動物批號SCXK(京)2009-0004。大鼠在清潔條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)，大鼠兩次尿蛋白和尿糖定性均為陰性，空腹血糖4.0~7.0 mmol/L。

1.1.2主要試劑鏈脲佐菌素(STZ, Sigma公司,美國)，Id2兔多克隆抗體(Santa Cruze公司, 美國)，E-鈣粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、纖維連接蛋白(FN)(博奧森公司,北京)，β-actin 單克隆抗體、DAB顯色劑(博士德公司, 武漢)，免疫組化SP兩步法檢測試劑(中杉金橋公司,北京)，PVDF膜、Whatman 3MM濾紙(Millipore公司,美國)，RevertAidTM First Strand cDNA Synthesis Kit(Fermentas,立陶宛)，超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒(碧云天生物研究所,北京)，總RNA提取試劑盒、2×Taq PCR MasterMix、Marker(天根生化科技有限公司,北京)，Id2、β-actin引物(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司)。

1.2　實驗方法

1.2.1動物模型及分組60只大鼠隨機(jī)分為正常對照組(N組)、糖尿病組(DM)組和糖尿病胰島素治療組(DMT)組,DM組大鼠按55 mg/kg劑量尾靜脈注射溶于pH4.5、0.01 mol/L無菌檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液的STZ，48 h后測空腹血糖，血糖≥16.7 mmol/L、且尿糖陽性大鼠認(rèn)為造模成功；正常對照組于大鼠尾靜脈注射無菌檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(STZ溶媒)，N組和DM組分別取6只大鼠于成模后2周(2 w)、8周(8 w)、16周(16 w)、24周(24 w)處死；DMT組大鼠在DM成模13周(13 w)起采用胰島素個體化治療，以血糖控制在4~7 mmol/L，尿糖陰性為準(zhǔn)，分別于16 w和24 w時各處死6只大鼠。所有大鼠予標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.2.2血、尿及腎臟標(biāo)本的采集處死前1 d代謝籠收集24 h尿液，記錄尿量。禁食6~8 h，麻醉后稱重，股動脈放血，收集血液，4 ℃離心，分離血清，-20 ℃保存；處死大鼠，開腹取胰腺和腎臟，胰腺及一側(cè)腎臟固定于中性甲醛供制作石蠟切片用，另一側(cè)腎臟于-80 ℃冰箱保存供Western blotting和RT-PCR檢測。

1.2.3生化指標(biāo)測定全自動生化分析儀檢測血清葡萄糖濃度，考馬斯亮藍(lán)法測尿蛋白，按試劑盒說明書操作。尿蛋白濃度與尿量乘積為24 h尿蛋白量。

1.2.4腎組織形態(tài)學(xué)觀察中性甲醛固定的腎臟組織制成3 μm厚的石蠟切片，HE和PAS染色光鏡下觀察腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。以腎重(mg)與體重(g)比值作為腎臟指數(shù)。

1.2.5腎組織中FN蛋白的表達(dá)免疫組織化學(xué)SP法檢測腎組織中FN蛋白的表達(dá)。常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，微波抗原修復(fù)，正常羊血清工作液封閉，滴加FN一抗4 ℃，PBS沖洗3×5 min，滴加生物素標(biāo)記二抗,DAB顯色，蘇木素復(fù)染；結(jié)果判定：顯微鏡測微尺(0.5網(wǎng)形目鏡尺)下10個高倍(×400)視野內(nèi)十字交叉點與陽性染色重合的點數(shù)，取均值代表FN的表達(dá)程度。

1.2.6腎組織Id2、E-cadherin和α-SMA蛋白的表達(dá)Western印跡法檢測腎組織Id2、E-cadherin和α-SMA蛋白的表達(dá)。取-80 ℃保存的各組大鼠腎皮質(zhì)，每組200 mg，用BCA試劑盒在酶標(biāo)儀測定各組蛋白質(zhì)濃度；經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳分離，300 mV 1 h轉(zhuǎn)移至PVDF膜上；一抗孵育：加入Id2、E-cadherin、α-SMA或β-actin一抗，工作濃度分別為1∶150、1∶100、1∶100和1∶300，4 ℃孵育過夜；次日，TBST洗膜3×5 min，加入相應(yīng)的辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗(濃度為1∶5 000、1∶5 000、1∶5 000、1∶8 000)，加ECL熒光顯色液，暗室膠片曝光；Quantity one軟件分析各條帶的面積和灰度值，兩者乘積為積分灰度值，每個樣本重復(fù)操作3次。以β-actin蛋白條帶作為內(nèi)參，結(jié)果用目標(biāo)蛋白/β-actin比值表示，即同一張膠上Id2、E-cadherin、α-SMA與相應(yīng)的β-actin條帶所測積分灰度值的比值，即相對積分灰度值對Id2、E-cadherin、α-SMA蛋白半定量。

1.2.7腎組織Id2 mRNA的表達(dá)RT-PCR檢測腎組織Id2 mRNA的表達(dá)。反應(yīng)產(chǎn)物做1.5%瓊脂糖凝膠電泳，Bio-Rad 凝膠成像系統(tǒng)掃描，應(yīng)用Quantity one軟件將各Id2條帶的光密度值與β-actin條帶光密度值的比值作為Id2 mRNA相對表達(dá)水平參數(shù)，進(jìn)行半定量分析。

表1　PCR引物序列及擴(kuò)增條件

1.3　統(tǒng)計學(xué)方法

2結(jié)果

2.1　大鼠一般狀況

STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型復(fù)制成功后，DM組大鼠逐漸出現(xiàn)多飲、多尿、多食、消瘦等現(xiàn)象。N組無變化，體重明顯增加。而DMT組大鼠較同時間未治療組相比，多飲、多尿、多食現(xiàn)象有所改善，且體重較之增加。

2.2　生化指標(biāo)及腎臟指數(shù)

各時間點DM組與N組相比，血糖、24 h尿蛋白量、腎臟指數(shù)均顯著升高(P<0.01)，而DMT組上述各指標(biāo)比相應(yīng)時點DM組明顯降低(P<0.05)。見表2。

表2　各組大鼠的血糖濃度、尿

(1)與N組比較，P<0.01；(2)在相同時間點，與DM組比較，P<0.05

2.3　腎組織形態(tài)變化

HE染色見正常組大鼠腎小球形態(tài)完整，輪廓清晰，系膜細(xì)胞無增生，腎小管未見異常，基底膜完整。糖尿病大鼠可見腎小球系膜基質(zhì)增生，腎小管管腔擴(kuò)張，上皮細(xì)胞腫脹及空泡變性，基底膜不規(guī)則增厚，間質(zhì)可見炎癥細(xì)胞浸潤。胰島素治療組大鼠腎臟病變有所改善，炎癥細(xì)胞浸潤減輕。見圖1A-C。PAS染色顯示正常大鼠腎小球及腎小管結(jié)構(gòu)清晰，腎小管未見擴(kuò)張、變性壞死，無PAS陽性染色物質(zhì)沉積。糖尿病大鼠腎小球系膜區(qū)擴(kuò)張，細(xì)胞外基質(zhì)增多，腎小管上皮細(xì)胞變性，甚至可見萎縮和脫落細(xì)胞，間質(zhì)有較多細(xì)胞浸潤，腎小管間質(zhì)區(qū)PAS染色陽性物質(zhì)增多。治療組大鼠腎臟病變有所改善，腎小球和腎小管間質(zhì)區(qū)PAS染色紫紅色的陽性物質(zhì)明顯減少。見圖1D-F。

2.4　FN蛋白的表達(dá)

免疫組織化學(xué)染色顯示N組大鼠腎小管基底膜內(nèi)可見FN表達(dá)，排列呈線性，腎間質(zhì)內(nèi)未見表達(dá)。DM組可見腎小管間質(zhì)FN表達(dá)，從2 w開始逐漸增多(P<0.05)，DMT組較DM組FN表達(dá)顯著減少(P<0.05)。見圖2。

2.5　Id2、E-cadherin及α-SMA蛋白的表達(dá)

N組大鼠腎小管上皮細(xì)胞Id2蛋白表達(dá)較多，DM組Id2隨病程周數(shù)增加逐漸減少(P<0.05)，至24 w幾乎不表達(dá)，DMT組Id2蛋白的表達(dá)顯著增加，但仍低于正常對照組； E-cadherin與Id2的變化同步，N組表達(dá)較多，DM組大鼠隨病程進(jìn)展E-cadherin進(jìn)行性下降，DMT組大鼠在胰島素控制血糖后E-cadherin的表達(dá)明顯恢復(fù)；而α-SMA在N組中表達(dá)極少，DM組從16 w開始可見α-SMA蛋白表達(dá)明顯增多，以后維持在較高水平上，DMT組大鼠在給與胰島素治療后，α-SMA表達(dá)明顯降低(P<0.05)。見圖3。

2.6　Id2 mRNA表達(dá)

Id2 mRNA的表達(dá)同其蛋白表達(dá)趨勢一致，DM組大鼠腎組織中Id2 mRNA表達(dá)均顯著低于N組(P<0.05)。DMT組Id2 mRNA表達(dá)較同時間點DM組表達(dá)增多(P<0.05)，但仍低于N組。見圖4。

2.7　相關(guān)性分析

將各組大鼠腎小管FN蛋白免疫組化陽性結(jié)果以及E-cadherin蛋白的積分灰度值分別與各組腎小管中Id2 蛋白免疫組化陽性表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示r值分別為-0.931(P<0.05)和0.900(P<0.05)，說明Id2蛋白與FN蛋白成負(fù)相關(guān)，與E-cadherin蛋白成正相關(guān)。

3討論

本研究用STZ成功復(fù)制了大鼠DM模型。在整個實驗期間實驗組大鼠血糖持續(xù)在高水平。HE和PAS染色顯示了DM大鼠出現(xiàn)腎實質(zhì)損害的表現(xiàn)，24 h尿蛋白量和腎臟指數(shù)呈進(jìn)行性升高，表明發(fā)生了DN。

注：圖A-C為HE染色圖片，圖D-F為PAS染色圖片圖1　16 w時正常對照組、糖尿病組和胰島素治療組大鼠腎組織形態(tài)(200×)Fig.1　Histological changes of kidney tissues in N，DM and DMT group at 16 w

圖2　各組大鼠腎組織FN蛋白表達(dá)(SP法，×400)Fig.2　The levels of FN protein expressed in kidney tissues of each group

DN腎損傷早期可出現(xiàn)腎小管的病變，且不依賴腎小球病變直接導(dǎo)致腎功能惡化，其主要分子機(jī)制之一為EMT，而腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生EMT的主要標(biāo)志是上皮表型如E-cadherin、角蛋白絲等逐漸消失，而獲得間質(zhì)表型如α-SMA出現(xiàn)并增多，細(xì)胞極性喪失，與周圍細(xì)胞和基質(zhì)的接觸減少，細(xì)胞的遷徙和運動能力增強(qiáng)等。本研究結(jié)果顯示DM組大鼠腎組織細(xì)胞外基質(zhì)FN較N組表達(dá)顯著增多，并且伴有腎小管上皮細(xì)胞表型標(biāo)志物E-cadherin的顯著減少而間質(zhì)細(xì)胞表型標(biāo)志物α-SMA的大量表達(dá)；控制血糖后，F(xiàn)N表達(dá)顯著降低，同時α-SMA的表達(dá)顯著減少，而E-cadherin的表達(dá)增加，表明隨糖尿病病程的進(jìn)展，腎小管上皮細(xì)胞發(fā)生了EMT，引起細(xì)胞外基質(zhì)的沉積，纖維化程度進(jìn)行性加重，胰島素控制血糖后腎小管上皮細(xì)胞EMT被逆轉(zhuǎn)，腎臟纖維化程度減輕，這與本課題組以往的研究相一致。

越來越多的研究證明，螺旋-環(huán)-螺旋(helix-loop-helix，HLH)家族的一些成員也參與了EMT過程。Id蛋白是一種廣泛存在于哺乳動物細(xì)胞中的核轉(zhuǎn)錄因子的負(fù)調(diào)控蛋白，屬于HLH轉(zhuǎn)錄因子家族特別成員，哺乳動物含有四種Id因子(Id1-Id4)，含119~199個氨基酸殘基，因Id蛋白本身缺乏DNA結(jié)合所必須的堿性結(jié)構(gòu)域，與bHLH結(jié)合成異二聚體后，可抑制bHLH與DNA及其他組織特異性bHLH轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，具有抑制細(xì)胞分化、促進(jìn)細(xì)胞增殖作用、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、維持細(xì)胞存活，促進(jìn)血管形成等作用。目前一些研究發(fā)現(xiàn)Id蛋白與一些臟器纖維化有關(guān)且可能有抑制EMT發(fā)生的作用。在鼠乳腺上皮NMuMG細(xì)胞系中，Id2被認(rèn)為是EMT的負(fù)調(diào)控因子，TGF-β1可通過Smad依賴途徑誘導(dǎo)Id2/3轉(zhuǎn)錄因子的下調(diào)。在肺纖維化中，過表達(dá)Id2蛋白可影響肺泡上皮細(xì)胞表型改變，對肺纖維化具有抑制作用。Veerasamy M等研究發(fā)現(xiàn)了TGF-β1處理人近曲腎小管上皮細(xì)胞可致Id2的表達(dá)減少，Id2的減少對于TGF-β1誘導(dǎo)α-SMA表達(dá)是至關(guān)重要的，過表達(dá)Id2可阻止TGF-β1誘導(dǎo)的α-SMA，而BMP-7不僅可以上調(diào)Id2，與TGF-β1聯(lián)合共同孵育可以恢復(fù)Id2至基礎(chǔ)水平，BMP-7的這種作用可能與Smad1/5信號通路有關(guān)且單個敲低Smad1或Smad5都不能阻斷BMP-7對Id2的誘導(dǎo)作用。然而Id2在DN腎組織的動態(tài)變化如何及與腎臟纖維化的確切關(guān)系目前還不清楚。因此，我們的研究在I型糖尿病大鼠模型中檢測到Id2蛋白表達(dá)隨糖尿病病程的進(jìn)展逐漸減少，至DM24 w幾乎不表達(dá)，而mRNA水平隨病程延長逐漸減少，至24 w仍有表達(dá)，相關(guān)性分析顯示Id2蛋白與FN蛋白成負(fù)相關(guān)，與E-cadherin蛋白成正相關(guān)；使用胰島素控制大鼠血糖后發(fā)現(xiàn)大鼠腎組織Id2蛋白較同時間點糖尿病組表達(dá)有所增高，但仍低于正常對照組，而mRNA結(jié)果與蛋白變化一致，與此同時E-cadherin的表達(dá)增加、α-SMA表達(dá)減少和FN在間質(zhì)的沉積減少，提示控制血糖能上調(diào)腎小管上皮細(xì)胞Id2的表達(dá)，進(jìn)而上調(diào)E-cadherin表達(dá)而下調(diào)α-SMA蛋白，起到抑制腎臟纖維化效應(yīng)，延緩和減輕了腎小管上皮細(xì)胞的EMT及腎間質(zhì)ECM的沉積，改善DN腎纖維化病變，但是有關(guān)在糖尿病腎病時的具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步的研究證實。另外我們設(shè)想是否可以通過提高Id2的表達(dá)來抑制高糖致纖維化的作用，并且通過Id2促進(jìn)E-cadherin蛋白表達(dá)來逆轉(zhuǎn)EMT，從而達(dá)到改善糖尿病腎病預(yù)后的目的也待進(jìn)一步研究。

注：(1)與N組比較，P<0.05；(2)在相同時間點，與DM組比較，P<0.05 圖3　各組大鼠腎皮質(zhì)Id2、E-cadherin和α-SMA蛋白表達(dá)(Western blot)Fig.3　The levels of protein Id2，E-cadherin, and α-SMA expression in kidney tissues of each group

注：(1)與N組比較，P<0.05；(2)在相同時間點，與DM組比較，P<0.05 圖4　Id2 mRNA在各組大鼠腎組織中的表達(dá)(RT-PCR)Fig.4　The expression of Id2 mRNA in kidney tissues of each groups showed by RT-PCR

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(2015-03-10收稿，2015-03-28修回)

中文編輯： 劉平； 英文編輯： 劉華

Study on the Relationship of Changes of Id2 Protein Expression in Diabetic

Rat Kidney Tissues with Occurrence and Development of Fibrosis Lesions

WEN Qingying, SU Bo, XIAO Ying, WANG Yuanyuan, LI Shuang, LIU Lirong, SHI Mingjun, GUO Bing

(DepartmentofPathophysiology,GuiyangMedicalCollege,Guiyang55004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To investigate the expressions of Id2 in the renal tubules of STZ-induced diabetic rats before and after blood glucose control, and explore their roles and relationship in the development of diabetic nephropathy. Methods: SD rats were randomly divided into control (N), diabetes mellitus (DM) and insulin-treated DM groups (DMT). DM model was constructed by injecting streptozotocin (STZ) via tail vein (55 mg/kg). 48 SD rats were randomly divided into 4 groups: 2 weeks, 8 weeks, 16 weeks and 24 weeks group. Each group included a control subgroup and a diabetic model subgroup. In addition, for 16 weeks group and 24 weeks group, each group still included an insulin-treated subgroup. Since the 13thweek after modeling, rats in DMT group were given insulin individually. The blood glucose was controlled to the level of 4~7 mmol/L, and urine glucose remained negative. The blood glucose, 24 h urine protein were measured by biochemical method, and the kidney index was measured as well. And the renal fibrosis was examined by HE and PAS staining sections. Immunohistochemistry was employed to assay the expression of FN protein in the rat renal tissue. Western blotting was employed to assay the expression of Id2, E-cadherin and α-SMA protein in the rat renal tissue. In addition, the expression of Id2 mRNA was also examined by RT-PCR. Results: (1)Compared with group N, the blood glucose, 24 h urine protein and the kidney index of group DM increased significantly (P<0.01), and renal tissue presented typical morphologic changes at different time points. By comparison, the blood glucose, 24 h urine protein and the kidney index of group DMT were significantly lower than those in group DM (P<0.05). Lesions of renal fibrosis in DMT rats were obviously relieved. (2)The expression levels of Id2 protein and mRNA of group DM decreased significantly than that in N group at different time points (P<0.05), accompanied by the decreased expression of E-cadherin (P<0.05), increased expression of α-SMA (P<0.05), and increased deposition of FN protein. Correlation analysis showed Id2 protein was negatively correlated with FN protein(r=-0.931, P<0.05), but positively correlated with E-cadherin(r=0.900 0, P<0.05). (3)Compared with DM group, the protein and mRNA expression of Id2 and E-cadherin of DMT group increased significantly (P<0.05), while the expression of α-SMA and FN protein decreased. Conclusion: Blood glucose control can up-regulate the expression of Id2 in renal tubular epithelial cells and restore Id2 negative regulation of renal fibrosis, reverse EMT and relieve renal interstitial ECM deposition, and improve DN lesions of renal fibrosis.

[Key words]diabetic nephropathy; fibrosis; inhibitors of differentiation; fibronectin; E-cadherin; α-smooth muscle actin; rats,Sprague-Dawley

[中圖分類號]R363

[文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

[文章編號]1000-2707(2015)04-0330-07

*[基金項目]國家自然科學(xué)基金(81360116)；貴州省科學(xué)技術(shù)基金[編號：黔科合J字(2011)2120號]