金哲峰，逄坤宇，張　晶，劉艷翔，高遠(yuǎn)軍，郝菲菲，李春成

(1.和龍市林業(yè)局，吉林 延邊　133500；2.吉林省白河林業(yè)局，吉林 延邊　133613)

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不同枸杞葉片和果實(shí)中枸杞多糖含量的測定

金哲峰1，逄坤宇2，張晶1，劉艷翔1，高遠(yuǎn)軍1，郝菲菲1，李春成1

(1.和龍市林業(yè)局，吉林 延邊133500；2.吉林省白河林業(yè)局，吉林 延邊133613)

摘要：采用苯酚-硫酸分光光度法對寧夏枸杞、新疆枸杞、枸杞葉片和果實(shí)中的多糖含量進(jìn)行測定與分析，結(jié)果表明：寧夏枸杞、新疆枸杞、枸杞葉片中多糖含量分別為167.08 μg·g-1、126.00 μg·g-1、62.40 μg·g-1，果實(shí)中的含量分別為80.00 mg·g-1、50.68 mg·g-1、29.64 mg·g-1，多糖含量高低依次均為寧夏枸杞>新疆枸杞>枸杞；果實(shí)和葉片中多糖含量具有顯著正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為0.97。

關(guān)鍵詞：枸杞；枸杞多糖；苯酚硫酸法；含量測定

枸杞屬(Lycium)植物為多棘刺落葉小灌木。枸杞為常用中藥，傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對枸杞子的藥理功效多有詳細(xì)記載：“春采葉，名天精草；夏采花，名長生草；秋采果，名枸杞子；冬采根，名地骨皮”[1~4]。 現(xiàn)代藥理研究表明，枸杞具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、抗衰老、降血脂和降血糖等作用。這些作用與枸杞多糖密切相關(guān)，枸杞多糖是枸杞生物學(xué)作用的主要有效成分之一[5,6]。

枸杞的營養(yǎng)成分豐富。枸杞子中含有大量的枸杞多糖、脂肪、蛋白質(zhì)、游離氨基酸、?；撬?、甜菜堿、維生素B、維生素E、維生素C，特別是類胡蘿卜素含量很高。此外，還含有大量的礦物質(zhì)元素，如鉀、鈉、鈣、鎂、鐵、銅、錳、鋅、硒等。枸杞干果中多糖含量達(dá)2.70%～4.90%，枸杞甜菜堿含量可達(dá)0.80%～2.24%。

目前，吉林省已有多地進(jìn)行枸杞栽培。作者選擇普遍認(rèn)為藥用價(jià)值較高的寧夏枸杞(LyciumbarbarumL.)、新疆枸杞(L.dasystemumPojark.)及枸杞(L.chinenseMill.)3個(gè)種，通過對比枸杞種間多糖含量變異趨勢，為枸杞栽培的良種選擇和推廣提供依據(jù)。

1 枸杞多糖含量的測定方法

采用苯酚-硫酸分光光度法測定樣品中多糖的含量，是測定多糖最常用的方法。多糖在濃硫酸作用下，水解成單糖，并迅速脫水生成糠醛衍生物，與苯酚縮合成有色化合物，并通過比色法確定含量[7~10]。該方法具有操作簡單、快速、重復(fù)性好、顯色后穩(wěn)定性較好等優(yōu)點(diǎn)，但有色樣品測定結(jié)果易偏高。

2 試驗(yàn)材料與步驟

2.1試驗(yàn)材料、試劑和儀器

試驗(yàn)材料：寧夏枸杞、新疆枸杞、枸杞3種枸杞植株相同部位的葉片與果實(shí)。

試劑：90%苯酚溶液、9%苯酚溶液、濃硫酸、1%葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、100 μg·L-1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液。

儀器設(shè)備：鼓風(fēng)干燥箱、干燥器、電子天平、分析天平、分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、容量瓶、刻度試管、刻度吸管。

2.2試驗(yàn)步驟

2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取20 mL刻度試管16支，從0～15分別編號，按表1加入溶液和水。

表1　苯酚法測定可溶性糖繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的試劑量

然后按順序向試管內(nèi)加入1 mL9%苯酚溶液，搖勻，再迅速加入5 mL濃硫酸，搖勻。比色液總體積為8 mL，在室溫下靜置30 min，比色。然后以空白為參比，在485 nm波長處測定吸光度值(見表2)。

表2　標(biāo)準(zhǔn)曲線吸光度值

根據(jù)平均吸光度值，以糖含量為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，用Excel軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖1)并得出標(biāo)準(zhǔn)曲線的一元回歸方程：y=83.0714-0.792 9x。

2.2.2枸杞多糖的提取

分別將3種枸杞的葉片、果實(shí)用粉碎機(jī)粉碎，置105℃干燥箱中干燥至恒重后，稱取0.50 g樣品各3份，每份樣品分別放入3支刻度試管內(nèi)，加入5～10 mL蒸餾水，用塑料薄膜封口，于沸水中提取30 min(共提取2次)，將提取液過濾入25 mL容量瓶中，反復(fù)漂洗試管及殘?jiān)?，定容至刻度?/p>

2.2.3 枸杞多糖的測定

圖1　吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線

吸取0.5 mL樣品液于試管中，加蒸餾水1.5 mL，然后向試管內(nèi)加入1 mL9%苯酚溶液，搖勻，迅速加入5 mL濃硫酸，搖勻。在室溫下放置30 min，測定樣品吸光度值，3次重復(fù)，算出平均值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算出各樣品中可溶性糖的含量。

3 結(jié)果與分析

3.1枸杞葉片中的多糖含量

通過對3種枸杞葉片樣品吸光度值的測定，得出葉片中枸杞多糖的含量，詳見表3。

表3　3種枸杞葉片中可溶性糖吸光度值

從表3中可以看出，3種枸杞葉片中多糖含量高低依次為寧夏枸杞>新疆枸杞>枸杞。植物葉片是植物進(jìn)行光合作用的主要器官，通過光合作用制造有機(jī)物并釋放氧，有機(jī)物主要是糖類，儲存能量，供生物體生長代謝所用。葉片中多糖含量的多少，直接影響果實(shí)中多糖的含量。

3.2枸杞果實(shí)中多糖含量

通過對3種枸杞果實(shí)樣品吸光度值的測定，得出果實(shí)中枸杞多糖的含量，詳見表4。

表4　3種枸杞果實(shí)中可溶性糖吸光度值

從表4中可以看出，3種枸杞果實(shí)中多糖含量高低依次為寧夏枸杞>新疆枸杞>枸杞，不同種枸杞果實(shí)中多糖的含量有較大差異，寧夏枸杞果實(shí)中多糖含量最高。

3.3相關(guān)性分析

從表3、表4數(shù)據(jù)可以看出，枸杞葉片、果實(shí)中的多糖含量高低依次均為寧夏枸杞>新疆枸杞>枸杞，因此，枸杞葉片與果實(shí)中的多糖含量可能具有一定的相關(guān)性。

經(jīng)計(jì)算，枸杞葉片中含糖量與果實(shí)中含糖量間的回歸方程y=0.012+0.457x，相關(guān)系數(shù)r=0.97>0.95=r0.05。3種枸杞葉片和果實(shí)中枸杞多糖含量的相關(guān)性分析見表5。

表5　3種枸杞葉片和果實(shí)中多糖含量相關(guān)性方差分析

由表5可見，F(xiàn)>F0.05，因此，枸杞葉片中多糖含量和果實(shí)中多糖含量之間具有顯著正相關(guān)性。

4 結(jié)論與討論

對枸杞、寧夏枸杞、新疆枸杞3種枸杞葉片和果實(shí)中枸杞多糖含量進(jìn)行測定，結(jié)果顯示，葉片和果實(shí)的含量分別為62.40 μg·g-1、167.08 μg·g-1、126.00 μg·g-1和29.64 μg ·g-1、80.00 mg·g-1、50.68 mg·g-1，多糖含量高低依次均為寧夏枸杞>新疆枸杞>枸杞；果實(shí)和葉片中多糖含量具有顯著正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)為0.97。

枸杞果實(shí)中的可溶性糖含量和葉片中可溶性糖含量成顯著正相關(guān)，說明枸杞子中含糖量多少可能和枸杞葉片的結(jié)構(gòu)存在著一定的相關(guān)性。據(jù)此，在枸杞良種選育過程中，可將枸杞葉片中枸杞多糖含量作為一項(xiàng)指標(biāo)，在苗期進(jìn)行早期選擇。通過對幼苗葉片中枸杞多糖含量的測定，在苗期即可對高產(chǎn)多糖植株進(jìn)行選育，這樣可大大縮短枸杞良種選育的時(shí)間。

我國傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為，寧夏枸杞的品質(zhì)為最高，現(xiàn)代藥理研究表明，枸杞中多糖是枸杞生物學(xué)作用的主要有效成分之一。

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Determination of polysaccharide content among

different wolfberry leaves and fruits

JIN Zhe-feng1, PANG Kun-yu2, ZHANG-Jing1,

LIU Yan-xiang1,GAO Yuan-jun1, HAO Fei-fei1, LI Chun-cheng1

(1. Helong Forestry Bureau, Yanbian 133500,China; 2.Baihe Forestry Bureau, Yanbian 133613,China)

Abstract：Polysaccharide content of leaves and fruits ofLyciumbarbarumL.,L.dasystemumPojark. andL.chinenseMill. were determinate by using phenol-sulfuric acid spectrophotometry. The experimental results showed that the polysaccharide content in leaves was 167.08 μg·g-1、126.00 μg·g-1and 62.40 μg·g-1, respectively; the polysaccharide content in fruit was 80 mg·g-1、50.68 mg·g-1and 29.64 mg·g-1, respectively. The polysaccharide content wereLyciumbarbarumL.>L.dasystemumPojark. >L.chinenseMill. There are significant positive correlations between fruits and leaves, the correlation coefficient was 0.97.

Key words：Wolfbrry; wolfbrry polysaccharide; phenol-sulfuric acid method; content determination

作者簡介：金哲峰(1984-)，男，吉林和龍人，助工，主要從事營林生產(chǎn)技術(shù)工作.

收稿日期：2013-10-15

文章編號：1005-7129(2014)01-0045-03

中圖分類號：S567.1+9

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A