劉理靜，錢 紅，尹輝明，張 平，王在巖，肖 華

（1．湖南醫(yī)藥學院臨床醫(yī)學院，湖南懷化 418000；2．湖南醫(yī)藥學院附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，湖南懷化 418000；3．南華大學附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，湖南衡陽 421001）

IL-17單克隆抗體對肺纖維化大鼠的保護作用及部分機制研究

劉理靜1，2，錢 紅1，尹輝明2，張 平3，王在巖3，肖 華3

（1．湖南醫(yī)藥學院臨床醫(yī)學院，湖南懷化 418000；2．湖南醫(yī)藥學院附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，湖南懷化 418000；3．南華大學附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，湖南衡陽 421001）

中國圖書分類號：R-332；R322．35；R392．11；R392．12；R563.13；R977.6

摘要：目的 探討白介素（IL）-17單克隆抗體（mAb）對博萊霉素所致大鼠肺纖維化的保護作用及相關機制。方法 將♂SD大鼠75只隨機分為正常對照組、假手術組、模型組、非特異性IgG組、IL-17 mAb組，各組15只，后3組大鼠予以博萊霉素A5氣管內(nèi)注入構建肺纖維化模型，而假手術組給予等量生理鹽水氣管內(nèi)注入。后2組于d 7、14、21分別給予非特異性IgG、IL-17 mAb尾靜脈注射，其余3組給予等量生理鹽水尾靜脈注射。所有大鼠d 28處死，留取肺組織，行HE和Masson染色，通過酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定肺組織IL-17、IL-6、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量，Western blot分析肺組織胞核核因子-κB（NF-κB）p65以及細胞Ⅰ型膠原（ColⅠ）、Ⅲ型膠原（ColⅢ）蛋白表達情況，熒光實時定量PCR檢測肺組織ColⅠ、ColⅢmRNA表達水平，分離血清，采用ELISA檢測血清Ⅰ型前膠原羧基端前肽（PICP）、Ⅲ型前膠原氨基端前肽（PIIINP）濃度。結果 IL-17mAb組肺泡炎癥和肺纖維化程度明顯輕于模型組及非特異性IgG組（P ＜0.01）。模型組和非特異性IgG組肺組織IL-17、IL-6、TNF-α含量、胞核NF-κB p65蛋白表達、ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表達以及血清PICP、PIIINP濃度較正常對照組及假手術組明顯升高（P＜0.01）。經(jīng)IL-17 mAb處理后，上述指標相比模型組和非特異性IgG組明顯降低（P＜0.01）。但非特異性IgG組與模型組以及假手術組與正常對照組上述指標比較無差異（P＞0.05）。結論 IL-17 mAb通過下調(diào)NF-κB表達，抑制肺組織炎癥反應及減少膠原蛋白合成，對肺纖維化大鼠產(chǎn)生保護作用。

關鍵詞：白介素-17單克隆抗體；肺纖維化；炎癥反應；白介素-6；腫瘤壞死因子-α；核因子-κB；Ⅰ型膠原；Ⅲ型膠原

網(wǎng)絡出版時間：2015－10－16 9：52 網(wǎng)絡出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／34．1086．R．20151016．0952．042．html

肺纖維化是各種不同病因引起的間質(zhì)性肺疾病的最終結局，以肺間質(zhì)內(nèi)單核／巨噬細胞等炎癥細胞浸潤、成纖維細胞異常增殖和膠原蛋白過量沉積為特征，迄今尚無有效的臨床治療方法，預后極差，死亡率高，嚴重危害人類健康，因而迫切需要開發(fā)有效治療或逆轉肺纖維化的藥物［1］。盡管肺纖維化的發(fā)病機制尚未完全闡明，但多種炎癥因子在其發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著關鍵作用［2］。白介素-17（interleu-kin-17，IL-17）是由Th17細胞產(chǎn)生的一種重要促炎癥細胞因子，參與介導了多種炎癥反應和自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展［3－4］。研究表明，IL-17可促進心肌、肝臟及腎臟等組織纖維化［5－7］，向氣管內(nèi)注射大劑量IL-17可誘發(fā)肺纖維化［8］。我們前期研究也發(fā)現(xiàn)，IL-17在肺纖維化大鼠中表達增高［9］。這些結果提示IL-17與組織纖維化密切相關，阻斷IL-17表達可望成為分子治療新的靶點。IL-17單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）已被嘗試用于銀屑病、克勞恩病及強直性脊柱炎等自身免疫性疾病的治療，并顯示出較好的效果［10－11］。新近研究報道，IL-17中和抗體能減少成纖維細胞過度增殖，并明顯改善肺纖維化小鼠的肺功能［12－13］，但其作用機制仍不清楚。為此，本研究采用氣管內(nèi)注射博萊霉素構建大鼠肺纖維化模型，觀察IL-17mAb對大鼠肺纖維化病理改變、核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）、炎癥因子和膠原蛋白表達的影響，探索IL-17mAb對肺纖維化大鼠的保護作用及其相關機制，為其應用于肺纖維化的治療提供理論基礎和實驗依據(jù)。

1　材料與方法

1．1實驗動物與藥品 75只清潔級♂SD大鼠，8 ～10周齡，體質(zhì)量為（283±13）g，由南華大學實驗動物學部提供，實驗動物使用許可證號：SYKK（湘）2010-0006，隨機分籠于SPF級環(huán)境中，常規(guī)顆粒飼料飼養(yǎng)。博萊霉素A5為天津太和制藥有限公司產(chǎn)品（批號070501）。RNA提取試劑TRIzol、PVDF膜購自美國Invitrogen公司。逆轉錄試劑盒為美國Promega公司出品。兔抗大鼠IL-17單克隆抗體、非

特異性IgG、兔抗大鼠NF-κB p65、Ⅰ型膠原（colla-gen typeⅠ，ColⅠ）、Ⅲ型膠原（collagen typeⅢ，ColⅢ）、β-actin抗體購于Santa Cruz公司。ELISA檢測試劑盒為美國R＆D公司產(chǎn)品。

1．2模型制備與分組給藥 隨機將75只♂SD大鼠分為正常對照組、假手術組、模型組、非特異性IgG組、IL-17 mAb組，各組15只。后4組予以100 g·L－1水合氯醛（3 mL·kg－1）腹腔注射麻醉大鼠后，切開頸正中部，使氣管充分暴露，其中模型組、非特異性IgG組、IL-17 mAb組用溶解了博萊霉素A5 （5 mg·kg－1）的生理鹽水0.2 mL一次性向氣管內(nèi)注射，而假手術組給予等體積生理鹽水氣管內(nèi)注入，直立大鼠并旋轉，以使藥液在肺內(nèi)均勻分布。造模后d 7、14、21，非特異性IgG組尾靜脈注射非特異性IgG（200 μg·kg－1），IL-17 mAb組尾靜脈注射IL-17 mAb（200 μg·kg－1），正常對照組、假手術組、模型組則尾靜脈注射等量生理鹽水。d 28，麻醉大鼠后無菌開胸，以心臟采血法采集血液3 mL，離心并提取血清，保存于－20℃冰箱內(nèi)，用于測定Ⅰ型前膠原羧基端前肽（procollagen type 1 carboxyterminal propeptide，PICP）、Ⅲ型前膠原氨基端前肽（procol-lagen typeⅢaminoterminal propeptide，PIIINP）濃度。然后行頸動脈放血將全部大鼠處死，截取右肺組織，凍存于－70℃液氮中，以供雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、Western blot和熒光實時定量PCR檢測。再使用0．1 mol·L－1中性緩和福爾馬林經(jīng)主支氣管注入左肺內(nèi)，使胸膜展開后，再固定于0.1 mol·L－1中性福爾馬林中至少24 h，石蠟包埋，切片，用于肺組織病理學檢查。

1．3肺組織病理學改變 將左肺石蠟切片后，行常規(guī)蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色及Mas-son染色，參照Szapiel等［14］方法，采用HE染色在光鏡下評定肺組織肺泡炎癥程度：0分：無肺組織炎；1分：輕度肺組織炎，僅局部或近胸膜部有炎性細胞浸潤，面積在20%以內(nèi)；2分：中度肺組織炎，面積在20%～50%之間；3分：重度肺組織炎，面積達50%以上。采用Masson染色于光鏡下評定肺組織纖維化程度：0分：無肺纖維化；1分：輕度肺纖維化，病變面積未超過全肺20%；2分：中度肺纖維化，病變面積達到全肺20%～50%；3分：重度肺纖維化，病變面積在50%以上，肺泡結構破壞。

1．4Western blot 按照試劑盒（美國ProMab公司）的說明書提取右肺組織細胞核蛋白和細胞蛋白，并測定蛋白濃度。常規(guī)制備SDS-PAGE凝膠，上樣、電泳并轉膜，室溫下用5%脫脂牛奶封閉4 h，再分別滴加1∶500稀釋的兔抗大鼠NF-κB p65、ColⅠ、ColⅢ、β-actin一抗，于4℃條件下反應過夜，洗膜后加入1∶2 500稀釋的辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG，室溫下孵育1h，ECL顯色、暗室曝光，利用Labwork凝膠圖像分析系統(tǒng)掃描膠片后得出目的蛋白（NF-κB p65、ColⅠ、ColⅢ）灰度值，目的蛋白表達水平＝NF-κB p65、ColⅠ、ColⅢ灰度值／β-actin灰度值。

1．5熒光實時定量PCR 使用TRIzol試劑提取肺組織樣本中總RNA，并用無RNase水溶解后，每個樣本利用紫外分光光度計測定總RNA的A260／280比值，結果均在1.8～2.0之間，達到實驗要求。取2 μg總RNA，然后用逆轉錄試劑盒合成cDNA。引物序列由上海生工生物技術有限公司參照文獻［15］合成，ColⅠ引物序列：上游5′-CTTGGCTCCTGCTC-TACCTC-3′，下游5′-CAACGGCCAGAACTTAAGC-CCA-3′，擴增產(chǎn)物長度為114 bp；ColⅢ引物序列：上游5′-GGTGCAGCTCAGTTGCTTGAAT-3′，下游5′-GTTCTTGGTGCAGTGTTATGTAATG-3’，擴增產(chǎn)物長度145 bp；β-actin引物序列：上游5′-CTGATCATGT-CAAACTTAGCTCAA-3′，下游5′-TACTGTGGTGT-GTCG TTCCAGTGG-3′，擴增產(chǎn)物長度為136 bp。取10 μL的cDNA進行PCR循環(huán)，條件：94℃預變性3 min，94℃變性40 s，62℃復性40s，60℃延伸60 s，共40個循環(huán)。經(jīng)溶解曲線分析PCR反應產(chǎn)物為單獨的雙鏈DNA。以β-actin為內(nèi)參照，采用ΔΔCt值法定量ColⅠ、ColⅢmRNA的表達。

1．6ELISA 取適量右肺組織，進行充分勻漿后，離心并提取上清液，由專人按照ELISA試劑盒提供的方法分別測定上清液IL-17、IL-6、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）含量以及血清PICP、PIIINP濃度。

1．7統(tǒng)計學處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析全部資料，實驗數(shù)據(jù)以±s表示，采用單因素方差分析比較多組均數(shù)以及q檢驗進行兩兩之間比較。

2　結果

2．1IL-17mAb對博萊霉素所致大鼠肺纖維化的影響 實驗過程中，各組大鼠無死亡。正常對照組、假手術組大鼠肺組織無炎癥細胞浸潤及纖維化發(fā)生，肺泡結構清晰；模型組、非特異性IgG組HE染色可見較多的巨噬細胞等炎癥細胞浸潤，大量成纖維細胞增生，肺泡間隔明顯增厚，部分肺泡腔被纖維組織占據(jù)，肺泡壁被破壞，Masson染色可見大量藍色膠原沉積于肺間質(zhì)內(nèi)，廣泛纖維化形成；IL-

17mAb組的上述病理變化明顯減輕（Fig 1、2）。并且IL-17mAb組肺泡炎與肺纖維化評分較模型組及非特異性IgG組明顯降低（P＜0.01），而非特異性IgG組與模型組相比無差異（P＞0.05），見Tab 1。

Fig 1 Effect of IL-17mAb on inflammation of lung tissues （HE×200）

Tab 1 Comparison of alveolitis and pulmonary fibrosis scores among groups（±s，n＝15）

Tab 1 Comparison of alveolitis and pulmonary fibrosis scores among groups（±s，n＝15）

**P＜0.01 vs model group or non-specific IgG group

Group　Alveolitis （Scores）Pulmonary fibrosis （Scores）Model　1．51±0．35　2．21±0．42 Non-specific IgG　1．42±0．32　2．11±0．39 IL-17 mAb　0．75±0．14　1．38±0．27**

2．2IL-17mAb對肺纖維化大鼠肺組織IL-17、IL-6、TNF-α含量及血清PICP、PIIINP濃度的影響為了探討IL-17mAb是否通過抑制炎癥反應和膠原合成而保護肺纖維化大鼠，應用ELISA測定各組大鼠肺組織IL-17、IL-6、TNF-α含量及血清PICP、PII- INP濃度。結果顯示，與正常對照組、假手術組相比，模型組和非特異性IgG組肺組織IL-17、IL-6、TNF-α含量及血清PICP、PIIINP濃度明顯增加（P＜0.01），但IL-17 mAb組上述指標較模型組、非特異性IgG組明顯減少（P＜0.01）。然而，假手術組與正常對照組以及非特異性IgG組與模型組比較，差異無顯著性（P＞0.05），見Tab 2。

Fig 2 Effect of IL-17mAb on fibrosis of lung tissues（Masson ×200）

2．3IL-17 mAb對肺纖維化大鼠肺組織胞核NF-κB p65表達的影響 通過Western blot檢測各組肺組織中胞核NF-κB p65蛋白的表達，以進一步明確IL-17 mAb抑制肺纖維化大鼠炎癥反應的機制。如Fig 3所示，模型組、非特異性IgG組胞核NF-κB p65蛋白表達水平較正常對照組、假手術組升高（P ＜0.01），尾靜脈注射IL-17mAb治療后，胞核NF-κB p65蛋白表達水平較模型組、非特異性IgG組下降（P＜0.01），但非特異性IgG組與模型組及假手術組與正常對照組之間差異無顯著性（P＞0.05）。

Tab 2 Comparison of pulmonary tissues IL-17，IL-6，TNF-α contents and serum PICP，PIIINP concentrations among groups（±s，n＝15）

Tab 2 Comparison of pulmonary tissues IL-17，IL-6，TNF-α contents and serum PICP，PIIINP concentrations among groups（±s，n＝15）

**P＜0.01 vs normal control group or sham operated group；＃＃P＜0.01 vs model group or non-specific IgG group

Group　IL-17／μg·L－1　IL-6／μg·L－1　TNF-α／μg·L－1　PICP／μg·L－1　PIIINP／ng·L－1Normal control　43．45±4．68　54．27±4．76　31．42±3．43　7．11±1．48　85．73±10．11 Sham operation　45．13±4．45　56．08±4．65　32．81±3．65　7．23±1．61　87．12±10．67 Model　92．67±9．72　128．06±10．21　65．39±5．82　34．07±5．62　182．05±15．06**Non-specific IgG　88．54±9．65　122．74±10．33　62．71±5．68　31．85±6．15　173．83±14．85**IL-17mAb　51．08±6．33＃?！?2．15±6．29＃?！?5．76±3．68＃?！?6．95±4．23＃?！?18．87±13．35＃＃

Fig 3 Expression of NF-κB p65 in the pulmonary tissues nucleus among groups

2．4IL-17 mAb對肺纖維化大鼠肺組織ColⅠ、ColⅢ表達的影響 利用熒光實時定量PCR和Western blot檢測各組肺組織中ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表達，進一步證實IL-17mAb通過抑制膠原蛋白合成而抗肺纖維化。結果表明，與正常對照組、假手術組比較，模型組和非特異性IgG組肺組織ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表達水平明顯升高（P＜0.01），經(jīng)IL-17 mAb治療后，肺組織ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表達水平較模型組和非特異性IgG組明顯下降（P＜0.01），但非特異性IgG組與模型組以及假手術組與正常對照組相比無區(qū)別（P＞0.05），見Fig 4。

3　討論

Fig 4 Expression of ColⅠand ColⅢin the pulmonary tissues among groups

肺纖維化是肺泡不斷損傷、成纖維細胞增殖及細胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）大量沉積致使肺組織持續(xù)破壞，過度修復，最終大量膠原沉積于肺間質(zhì)的一類疾病，是肺損傷、免疫反應、炎癥反應和纖維生成4個要素的綜合結果。目前，臨床治療以激素和免疫抑制劑為主，但效果較差，且不良反應大，限制了其應用［1，16］。過度炎癥反應已被證實在肺纖維化形成中起重要作用［17］，IL-17作為一種強效的促炎癥因子在多種纖維化疾病中表達增高［18］，阻斷IL-17介導的炎癥反應已成為治療纖維化疾病的新途徑。實驗發(fā)現(xiàn)，中和IL-17活性能預防小鼠肺損傷后肺纖維化的發(fā)生［19］。本實驗結果顯示，行氣管切開術后的假手術組與正常對照組肺組織內(nèi)均無肺泡炎癥與纖維化改變，兩組無統(tǒng)計學差異，完全可以排除手術損傷本身以及氣管內(nèi)灌注生理鹽水的影響。模型組及非特異性IgG組肺組織炎癥與纖維化明顯，符合肺纖維化模型標準。此外，IL-17 mAb組肺泡炎與肺纖維化評分比模型組和非特異性IgG組明顯降低，與文獻報道一致［13，19］，說明IL-17 mAb通過特異性抑制IL-17的活性，從而減少巨噬細胞等炎癥細胞的趨化聚集，減輕博萊霉素所致急性肺損傷后的炎癥反應，抑制肺組織的過度修復，減少膠原纖維沉積，進而改善肺纖維化，提示IL-17 mAb對

博萊霉素所致大鼠肺纖維化具有良好的治療效果。然而，非特異性IgG組與模型組相比無區(qū)別，進一步證實了非特異性IgG無此阻斷作用。

肺損傷后炎癥細胞的浸潤、活化導致促炎細胞因子的異常表達與肺纖維化的病理生理過程密切相關［9］。Wilson等［8］發(fā)現(xiàn)，博萊霉素誘導的肺纖維化是由IL-17所介導的多種炎癥細胞因子共同作用的結果，肺損傷后Th17細胞分泌大量的IL-17可刺激并誘導成纖維細胞、巨噬細胞和上皮細胞產(chǎn)生IL-6、TNF-α、IL-1等多種促炎介質(zhì)，協(xié)同且放大加強TNF-α致炎效應，從而介導炎癥反應，最終導致肺纖維化。這表明IL-17、IL-6、TNF-α都是引起肺纖維化的關鍵促炎介質(zhì)，抑制這些介質(zhì)的產(chǎn)生可明顯改善肺纖維化［20－21］。本研究結果顯示，經(jīng)過IL-17 mAb治療后，大鼠肺組織IL-17、IL-6、TNF-α含量較模型組和非特異性IgG組明顯減少，說明抑制促炎介質(zhì)的分泌是IL-17 mAb抗肺纖維化的主要機制之一。NF-κB是炎癥反應中重要的轉錄調(diào)節(jié)因子，通常以p50-p65異二聚體的形式與其抑制性蛋白IκB結合形成復合體，呈失活狀態(tài)存在于靜息細胞質(zhì)里。當細胞外信號刺激細胞后，激活IκB激酶，將IκB磷酸化，隨即與NF-κB解離，游離的NF-κB迅速移位入胞核，與核內(nèi)TNF-α、IL-6、IL-8基因中特異性κB序列結合，強烈誘導TNF-α、IL-6等釋放［22－23］。研究發(fā)現(xiàn)，IL-17能夠通過NF-κВ信號通路促進成纖維細胞、上皮細胞分泌IL-6、IL-8以及上調(diào)TNF-α表達［24－25］。故本實驗通過Western blot檢測肺組織胞核NF-κB p65表達，進一步證實IL-17 mAb是否通過調(diào)控NF-κB減少這些促炎介質(zhì)的表達，結果顯示，與模型組和非特異性IgG組比較，IL-17 mAb處理組胞核NF-κB p65表達水平降低，提示IL-17 mAb通過下調(diào)NF-κB表達，減少促炎介質(zhì)的釋放，抑制肺組織炎癥反應而抗肺纖維化。

ColⅠ、ColⅢ主要由成纖維細胞及轉化后的肌成纖維細胞合成和分泌，是ECM的主要成分，它們過量聚積是肺纖維化的特征性病理改變［26－27］。當刺激因素作用于肺成纖維細胞后，能促進其合成ColⅠ、ColⅢ，增加ECM積聚，誘發(fā)肺纖維化，而IL-17抗體能減少肺成纖維細胞過度增殖及分泌羥脯氨酸［12］。本研究顯示，大鼠經(jīng)IL-17 mAb處理后，肺組織ColⅠ、ColⅢ表達水平較模型組和非特異性IgG組明顯減少，提示抑制肺成纖維細胞增殖而降低ColⅠ、ColⅢ合成可能是IL-17 mAb抗肺纖維化的重要機制之一。PICP、PIIINP分別是合成ColⅠ、ColⅢ的前體多肽，它們隨著ColⅠ、ColⅢ合成的增多而增加，故能良好反映ColⅠ、ColⅢ的含量，可用于間接評價纖維化程度［15］。本研究檢測了大鼠血清PICP、PIIINP濃度，進一步證實IL-17 mAb的這種作用，結果發(fā)現(xiàn)各組PICP、PIIINP的濃度變化同ColⅠ、ColⅢ的變化趨勢相同，證明IL-17 mAb通過降低肺組織膠原蛋白合成抑制大鼠肺纖維化。

綜上所述，IL-17 mAb對大鼠肺纖維化具有保護作用，其機制可能與下調(diào)NF-κB表達，抑制肺組織炎癥反應以及減少膠原蛋白合成有關，但其作用機制仍有待更深一步探討。

（致謝：本實驗在侗醫(yī)藥研究湖南省重點實驗室和南華大學附屬第一醫(yī)院臨床醫(yī)學研究所完成，感謝張平教授及各位老師的指導和幫助。）

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Protective effect of IL-17 monoclonal antibody on rats with pulmonary fibrosis and its partial mechanisms

LIU Li-jing1，2，QIAN Hong1，YIN Hui-ming2，ZHANG Ping3，WANG Zai-yan3，XIAO Hua3
（1．School of Clinical Medicine，Hunan University of Medicine，Huaihua Hunan 418000，China；2．Dept of Respiration，the First Affiliated Hospital，Hunan University of Medicine，Huaihua Hunan 418000，China；3．Dept of Respiration，the First Affiliated Hospital，University of South China，Hengyang Hunan 421001，China）

Abstract：Aim To explore the protective effects of in-terleukin-17（IL-17）monoclonal antibody（mAb）on bleomycin-induced pulmonary fibrosis rats and the re-lated mechanisms．Methods Seventy-five male SD rats were randomly divided into normal control group，sham operation group，model group，non-specific IgG group and IL-17 mAb group．Each group included fif-teen rats．Rats in the latter three groups were intratra- cheally administered with bleomycin A5 to establish pulmonary fibrosis model，whereas the ones in sham operation group were treated with the same volume of physiological saline．On day 7，14 and 21，rats in non-specific IgG group and IL-17 mAb group were in-jected with non-specific IgG and IL-17 mAb，respec-tively，through the caudal vein．However，the ones in the other groups were administered with the same volume

of physiological saline．All rats were sacrificed on day 28．Pulmonary tissues were then removed，and HE and Masson staining was performed．The contents of IL-17，IL-6 and tumor necrosis factor-α（TNF-α）in pulmo-nary tissues were measured by enzyme linked immu-nosorbent assay（ELISA）．Western blot was used to analyze the pulmonary tissues protein expression of nu-clear factor-κB（NF-κB）p65 in the nucleus as well as collagen type I（ColⅠ）and collagen type III（ColⅢ）in the whole cells．The levels of ColⅠand Col Ⅲin the pulmonary tissues were detected by fluores-cence real-time quantitative PCR．Serum was separa-ted，and the concentrations of procollagen type 1carboxyterminal propeptide（PICP）and procollagen type III aminoterminal propeptide（PIIINP）in serum were then measured by ELISA．Results The severity of alveolitis and pulmonary fibrosis was lower in IL-17 mAb group than that in model group and non-specific IgG group（P＜0.01）．In comparison with normal control group and sham operation group，pulmonary tissues IL-17，IL-6 and TNF-α contents，NF-κB p65 protein expression in the nucleus，ColⅠand ColⅢmRNA and protein levels，and serum PICP and PIIINP concentrations were significantly increased in model group and non-specific IgG group（P＜0.01）．Follow-ing treatment with IL-17 mAb，the above indicators were significantly decreased as compared to model group and non-specific IgG group（P＜0.01）．How-ever，there was no significant difference in these indi-cators between non-specific IgG group and model group （P＞0.05）．Similar results were also seen between sham operation group and normal control group（P＞0.05）．Conclusion IL-17 mAb protects rats from pulmonary fibrosis by inhibiting inflammatory response via downregulating NF-κB expression and decreasing collagen synthesis in the pulmonary tissues．

Key words：IL-17 monoclonal antibody；pulmonary fi-brosis；inflammatory response；IL-6；TNF-α；NF-κB；ColⅠ；ColⅢ

作者簡介：劉理靜（1976－），男，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：肺纖維化的防治，E-mail：wsfyz-000＠163．com；張 平（1956－），男，教授，主任醫(yī)師，碩士生導師，研究方向：肺纖維化的防治，通訊作者，Tel：0734-8281948，E-mail：zp9707＠sohu．com

基金項目：湖南省教育廳優(yōu)秀青年項目（No 14B142）；湖南省教育廳重點項目（No 10A107）

收稿日期：2015－07－31，修回日期：2015－08－27

文獻標志碼：A

文章編號：1001－1978（2015）11－1586－07

doi：10．3969／j．issn．1001－1978．2015．11．021