姜 倩，張加研,雷福厚，劉祖廣

·研究報(bào)告——生物質(zhì)活性成分·

大孔吸附樹(shù)脂AB- 8分離肉桂原花青素的研究

姜 倩1，張加研,雷福厚2，劉祖廣2

(1.西南林業(yè)大學(xué) 材料工程學(xué)院，云南 昆明 650224；2.廣西民族大學(xué) 廣西林產(chǎn)化學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530006)

采用AB- 8大孔吸附樹(shù)脂分離肉桂原花青素, 將1 000 mg肉桂原花青素初提物溶解在少量60%乙醇中，制得的濃溶液勻速加入吸附柱中，分別用10%、50%、70%、100%體積分?jǐn)?shù)的乙醇對(duì)吸附在樹(shù)脂上的原花青素進(jìn)行梯度洗脫。從10%乙醇的洗脫液中可以得到F10290 mg，從50%乙醇的洗脫液中可以得到F50150 mg，從70%乙醇的洗脫液中可以得到F70410 mg，從100%乙醇的洗脫液中可以得到F10080 mg。4部分中，純度最高的為F10，為90.03%，純度最低的為F100，為42.11%。洗脫過(guò)程中原花青素回收率達(dá)到93%。分析不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇洗脫液中原花青素平均聚合度和抗氧化性，結(jié)果顯示10%～50%乙醇洗脫液中主要為低聚體，而70%～100%乙醇洗脫液中主要為高聚體，10%乙醇洗脫液中原花青素的抗氧化性最高，對(duì)DPPH ·清除的IC50為0.91 g/L。

原花青素;分級(jí)處理;抗氧化性

通常所稱(chēng)的肉桂為樟科喬木植物肉桂(CinnamomumcassiaPresl)的干皮和粗枝皮[1]，肉桂樹(shù)的嫩葉(桂枝)、幼嫩果實(shí)(桂丁)、葉都可以入藥[2]。在我國(guó)肉桂主要分布于廣西、廣東，其次是海南、云南、福建，而四川、江西、貴州、湖南、浙江、臺(tái)灣南部也有少量的栽培，到2000年為止，全國(guó)肉桂產(chǎn)量占世界的38.1%[3],而廣西、廣東兩省肉桂產(chǎn)量占我國(guó)肉桂產(chǎn)量的95%以上[4]。廣西作為我國(guó)最大的肉桂產(chǎn)區(qū)，主要分布于防城與西江流域[5]。原花青素屬黃酮類(lèi)物質(zhì)，以?xún)翰杷?、表兒茶素及其取代物作為結(jié)構(gòu)單元，具有多種生物活性，在食品、保健品、化妝品等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景[6]，1995年被美國(guó)公眾評(píng)為最受歡迎的10種植物藥之一[7]。按照原花青素聚合度的大小，通常將二～四聚體稱(chēng)為低聚原花青素(OPC)，五聚體以上的稱(chēng)為多聚原花青素(PPC)，OPC與PPC相比，OPC在抗氧化、酶抑制、預(yù)防心血管疾病、抗癌、抗炎止痛、止血、增進(jìn)免疫調(diào)節(jié)，促進(jìn)心臟缺血后復(fù)蘇，防止動(dòng)脈硬化，減少對(duì)皮膚的刺激和抗糖尿病等方面有顯著的生物活性[8],其在體內(nèi)的抗氧化能力是VE的50倍、Vc的20倍[9]。Gu等[10]對(duì)41種食品中原花青素的含量進(jìn)行評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)肉桂中原花青素含量最高，然而其中高聚原花青素占49.3%，高聚原花青素由于受到空間位阻的影響，生物活性降低。因此為了有效發(fā)揮原花青素的抗氧化性，需對(duì)原花青素進(jìn)行分級(jí)處理，富集原花青素低聚體成分，提高原花青素生物功效。本實(shí)驗(yàn)采用資源豐富的廣西肉桂為原材料，提取的原花青素以及用AB- 8大孔吸附樹(shù)脂對(duì)肉桂原花青素按聚合度進(jìn)行分離，以期為肉桂原花青素的工業(yè)化生產(chǎn)及應(yīng)用提供參考。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 材料與儀器

無(wú)水乙醇、甲醇、丙酮、香草醛、鹽酸(分析純，上海國(guó)藥集團(tuán)有限公司);(+)-兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品、(- )-表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品、原花青素標(biāo)準(zhǔn)品(國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢定所)， 1，1-二苯基苦基苯肼(DPPH ·)，AB- 8大孔吸附樹(shù)脂。TU-1810DASPC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)，Agilent 1200series 高效液相色譜儀。

1.2 肉桂原花青素的提取

1.2.1 原花青素的提取 分別稱(chēng)取5 000.0 mg 肉桂粉末(0.078～0.178 mm)于500 mL三口燒瓶中，分別量取蒸餾水、無(wú)水乙醇、 60%乙醇、無(wú)水丙酮各150 mL，置于預(yù)熱的50 ℃恒溫水浴鍋中，安裝好冷凝管、磁力攪拌器攪拌，啟動(dòng)攪拌裝置提取1.5 h，隨后取出燒瓶并冷卻至室溫，過(guò)濾后，濾液利用石油醚萃取，萃取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器于45±5 ℃減壓干燥，得到干燥肉桂原花青素初提物，稱(chēng)質(zhì)量，利用公式(1)計(jì)算出初提物提取率。

(1)

式中：y—初提物提取率，%；m—肉桂粉末質(zhì)量，mg；m1—初提物質(zhì)量，mg。

1.2.2 初提物中原花青素含量以及原花青素提取率測(cè)定 在實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有條件下用香草醛-鹽酸法測(cè)定原花青素的含量[11]，稱(chēng)取2 mg初提物，置于10 mL比色管中，用甲醇定容，將其配制成0.2 g/L的初提物甲醇溶液，取0.5 mL初提物甲醇溶液加入10 mL比色管中后，依次加入3 mL 40 g/L的香草醛-甲醇溶液，1.5 mL濃鹽酸，加塞搖勻，在20±1 ℃避光條件下反應(yīng)15 min后，于500 nm處測(cè)其吸光度,利用(+)-兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),稱(chēng)取10 mg(+)-兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品，甲醇溶解定容至25 mL，質(zhì)量濃度為0.4 g/L，混勻(避光保存)。分別取0、 2、 4、 6、 8、 10 mL至10 mL比色管中，甲醇定容至 10 mL(質(zhì)量濃度分別為：0、 0.08、 0.16、 0.24、 0.32、 0.4 g/L)。在上述條件下反應(yīng)并測(cè)定吸光度，以此繪制(+)-兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算得到溶液中原花青素濃度，并利用公式(2)計(jì)算初提物中原花青素質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

(2)

式中：y1—初提物中原花青素質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；ci—初提物甲醇溶液中原花青素質(zhì)量濃度，g/L；Vi—初提物甲醇溶液體積，mL；mi—初提物質(zhì)量，mg。

利用公式(3)計(jì)算出原花青素提取率。

(3)

式中：y2—原花青素提取率，%；y1—初提物原花青素質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；m—肉桂皮粉末質(zhì)量，mg；m1—初提物質(zhì)量，mg。

1.3 AB- 8大孔吸附樹(shù)脂對(duì)原花青素分級(jí)處理

1.3.1 原料的制備 選擇原花青素提取率最高的提取條件進(jìn)行提取，提取后溶液用石油醚萃取，萃取后溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器于45±5 ℃溫度下蒸餾除去乙醇、水，既得所需原料樣品。

1.3.2 原花青素的分級(jí) 將1 000 mg肉桂原花青素初提物作為樣品溶解在少量60%乙醇中，制得的濃溶液勻速加入吸附柱中，依次用10%、 50%、 70%、 100%體積分?jǐn)?shù)的乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，分批收集不同體積分?jǐn)?shù)乙醇的洗脫液。

1.3.3 樣品原花青素含量及回收率測(cè)定 對(duì)各部分洗脫液于45±5 ℃溫度下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，所得樣品分別標(biāo)記為F10、F50、F70、F100，稱(chēng)質(zhì)量并利用公式(4)計(jì)算回收率。

(4)

式中：R—樣品回收率，%；mi—各部分洗脫液所得樣品質(zhì)量，mg；m樣—上柱樣品質(zhì)量，mg。

按照1.2.2節(jié)所述香草醛-鹽酸法測(cè)定樣品中原花青素含量。

1.4 平均聚合度的測(cè)定

1.4.1 測(cè)定原理 本試驗(yàn)采用HPLC法測(cè)定聚合度，然而HPLC法不能直接測(cè)定原花青素(PC)的平均聚合度，測(cè)定之前先采用硫解法預(yù)處理，PC可在親核試劑存在的酸性條件下降解，末端的黃烷3-醇結(jié)構(gòu)單元(兒茶素或表兒茶素)被釋放出來(lái)的同時(shí)，另一結(jié)構(gòu)片段(延伸單元)中C環(huán)4位所形成的碳正離子易被適當(dāng)?shù)挠H核試劑捕捉，從而形成親核試劑附加產(chǎn)物。這兩個(gè)片段可直接由HPLC得到對(duì)應(yīng)的峰面積，利用建立的(+)-兒茶素、 (- )-表兒茶素、硫解目標(biāo)產(chǎn)物的峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算得到對(duì)應(yīng)的物質(zhì)的量。然后利用公式計(jì)算聚合度。

1.4.2 色譜分析條件 色譜柱：Agilent Analytical Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×150 mm,0.5 μm)；流動(dòng)相A:水(含TFA 0.1%),B：乙腈體系(含TFA 0.1%)；梯度洗脫0～40 min (4%～25% B),40～45 min (25%～30% B)，45～55 min(30%～95% B),55～65 min(95%～4% B)；柱溫30 ℃；流速1.0 mL/min；進(jìn)樣量0.01 mL；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。

1.4.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立

1.4.3.1 (+)-兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立 分別稱(chēng)取(+)-兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品0.000 1、 0.000 2、 0.000 6、 0.001 2、 0.001 8和0.002 8 mg，置于10 mL容量瓶，用甲醇定容，不同濃度的(+)-兒茶素甲醇溶液，過(guò)濾后進(jìn)行高效液相色譜分析，以(+)-兒茶素質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并擬合回歸方程。

1.4.3.2 (- )-表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立 分別稱(chēng)取(- )-表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品0.000 1、 0.000 2、 0.000 6、 0.000 8、 0.001 2和0.001 8 mg，置于10 mL容量瓶，用甲醇定容，不同濃度的(- )-表兒茶素甲醇溶液，過(guò)濾后進(jìn)行高效液相色譜分析，以(- )-表兒茶素質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并擬合回歸方程。

1.4.3.3 硫解目標(biāo)產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立

A)硫解反應(yīng):樣品溶液配制：精確稱(chēng)取提取獲得的肉桂原花青素樣品10 mg置于10 mL容量瓶，用 60%乙醇定容，得到質(zhì)量濃度為1 g/L的溶液。2-巰基乙醇反應(yīng)液的配置：分別精確量取2.5 mL 2-巰基乙醇、 27.5 mL乙醇、 16 mL蒸餾水、 4 mL 4%鹽酸水溶液，充分混勻。硫解反應(yīng)：分別取0.1 mL樣品溶液、 0.4 mL 2-巰基乙醇反應(yīng)液于試管內(nèi)，充分混勻，以0.1 mL 60%乙醇、 0.4 mL 2-巰基乙醇反應(yīng)液為對(duì)照。于70 ℃恒溫水浴條件下反應(yīng)4 h，放置室溫冷卻。

B)硫解目標(biāo)產(chǎn)物的HPLC分析及制備:利用硫解反應(yīng)液,2-巰基乙醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液、(+)-兒茶素、(- )-表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行HPLC分析，得到反應(yīng)產(chǎn)生的硫解目標(biāo)產(chǎn)物的波峰。將硫解反應(yīng)擴(kuò)大，反應(yīng)后溶液經(jīng)大孔樹(shù)脂HP-20吸附，用蒸餾水洗脫，除去剩余的2-巰基乙醇、鹽酸等，用甲醇洗脫后溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸干后既得到硫解目標(biāo)產(chǎn)物。將樣品用少量蒸餾水溶解，上Sephadax柱，依次用400 mL 20%、 40%、 60%、 80%甲醇洗脫，以薄層層析為指導(dǎo)合并洗脫液，再以HPLC分析為指導(dǎo)，找到硫解目標(biāo)產(chǎn)物，將硫解目標(biāo)產(chǎn)物干燥。然后將硫解目標(biāo)產(chǎn)物用少量蒸餾水溶解上CG161M柱進(jìn)行純化，依次用200 mL 10%、 30%、 50%、 70%、 80%甲醇洗脫，以薄層層析為指導(dǎo)合并洗脫液，再以高效液相色譜分析為指導(dǎo)，找到硫解目標(biāo)產(chǎn)物，將硫解目標(biāo)產(chǎn)物命名為2-ME-ec[12]。

C)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn):以制備的硫解目標(biāo)產(chǎn)物為標(biāo)準(zhǔn)品，分別稱(chēng)取硫解目標(biāo)產(chǎn)物0.000 5、 0.001、 0.002、 0.004、 0.006和0.008 mg，置于10 mL容量瓶，用甲醇定容，不同濃度的硫解目標(biāo)產(chǎn)物溶液，過(guò)濾后進(jìn)行高效液相色譜分析，以硫解目標(biāo)產(chǎn)物質(zhì)量為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)并擬合回歸方程。

1.4.3.4 平均聚合度的計(jì)算 待測(cè)樣品按照1.4.3.3節(jié)硫解反應(yīng)的方法處理以后，經(jīng)HPLC分析檢測(cè)得到其相對(duì)應(yīng)的(+)-兒茶素、(- )-表兒茶素、硫解目標(biāo)產(chǎn)物的峰面積，再根據(jù)相對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算得到相對(duì)應(yīng)的物質(zhì)的量，由公式(6)計(jì)算出其平均聚合度。

(5)

1.5 抗氧化性的測(cè)定

本實(shí)驗(yàn)采用測(cè)定DPPH ·自由基清除率來(lái)評(píng)價(jià)樣品抗氧化性，DPPH ·自由基清除率越高則說(shuō)明該樣品抗氧化性越強(qiáng)。將F10、 F50、 F70、 F100以及Vc(Vc作為對(duì)照品)用60%乙醇配制成不同濃度的溶液，濃度分別為0.5、 1.0、 1.5、 2.0、 2.5、 3.0、 3.5 和4.0 g/L，用60%乙醇配制100 mL 0.000 2 mol/L 的DPPH·自由基溶液，向2 mL DPPH ·自由基溶液中加入2 mL樣品溶液，使總體積為4 mL，搖勻，避光，于40 ℃水浴中放置30 min后，測(cè)定其在517 nm處的吸光值(A樣品)；向2 mL 60%乙醇中加2 mL樣品，記錄吸光值(A對(duì)照)，向2 mL 60%乙醇中加2 mL DPPH ·自由基溶液，記錄吸光值(A空白)，即空白對(duì)照。

η=1-(A樣品-A對(duì)照)/A空白×100%

(6)

式中：η—DPPH ·自由基清除率，%；A樣品—DPPH ·自由基溶液與樣品溶液反應(yīng)后吸光光度值；A對(duì)照—60%乙醇中加入樣品后吸光光度值；A空白—DPPH ·自由基溶液中加入60%乙醇后吸光光度值。

1.6 紅外光譜試

分級(jí)后的樣品采用溴化鉀壓片法(溴化鉀與樣品質(zhì)量比100 ∶1)進(jìn)行紅外光譜測(cè)定，與原花青素標(biāo)準(zhǔn)品的紅外光譜進(jìn)行對(duì)照。

2 結(jié)果與討論

2.1 原花青素提取試驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 初提物原花青素含量

2.1.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立 以(+)-兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品所作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，擬合回歸線(xiàn)性方程：y= 353.516 2x-14.230 8，相關(guān)系數(shù)R2= 0.999 6，式中:x為(+)-兒茶素質(zhì)量濃度，g/L；y為吸光度。

2.1.1.2 初提物原花青素含量 無(wú)水乙醇、60%乙醇、無(wú)水丙酮、蒸餾水4種溶劑對(duì)肉桂原花青素進(jìn)行提取，但是由于用蒸餾水提取原花青素，提取液很難在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器下濃縮干燥，因此無(wú)法完成后續(xù)測(cè)定。從表1中可以得到利用無(wú)水乙醇、60%乙醇、無(wú)水丙酮3種溶劑提取肉桂原花青素，初提物提取率分別為11.39%、 12.72%、 11.95%，初提物中原花青素質(zhì)量分?jǐn)?shù)為75.38%、 85.25%、 71.32%，原花青素提取率分別8.58%、 10.84%、 8.52%。因此從提取物原花青素的含量來(lái)看，可以確定肉桂原花青素的提取溶劑為60%乙醇。

2.1.2 初提物提取率以及原花青素提取率 表1為初提物提取率、原花青素含量以及原花青素提取率，從表1可以看出，利用無(wú)水乙醇、60%乙醇、無(wú)水丙酮3種溶劑提取肉桂原花青素，利用公式(1)計(jì)算初提物提取率分別為11.39%、 12.72%、 11.95%，利用公式(3)計(jì)算原花青素提取率分別為8.58%、 10.84%、 8.52%，3種溶劑提取效果的明顯不同，是由于無(wú)水乙醇以及丙酮的極性與60%乙醇相比較小，與肉桂原花青素的極性相比存在較大差異，而60%乙醇與肉桂原花青素的極性差異較小，根據(jù)相似相溶原理，60%乙醇對(duì)肉桂原花青素的提取率最高，因此可以確定肉桂原花青素的提取溶劑為60%乙醇。

表1 肉桂原花青素初提試驗(yàn)結(jié)果

表2分級(jí)處理試驗(yàn)結(jié)果

2.2 分級(jí)處理試驗(yàn)結(jié)果

表2為分級(jí)處理實(shí)驗(yàn)結(jié)果，大孔吸附樹(shù)脂AB- 8 吸附肉桂原花青素，經(jīng)10%、 50%、 70%、 100%乙醇梯度洗脫后得到4部分樣品，樣品分別標(biāo)記為：F10、F50、F70、F100，4部分中質(zhì)量最大的是F70為410 mg、純度為87.21%；樣品純度最高的是F10為90.03%；F100純度較低為42%，整個(gè)過(guò)程的回收率為93%。AB- 8大孔吸附樹(shù)脂為弱極性樹(shù)脂，在吸附過(guò)程中樹(shù)脂與極性較小部分作用力較強(qiáng)，而對(duì)于解吸過(guò)程中，不斷增加乙醇濃度，洗脫液極性逐漸減小，依據(jù)相似相溶原理極性較大的部分被最先洗脫下來(lái)，極性較小的部分被最后被洗脫下來(lái)，因此F10部分極性大于其他3個(gè)部分，F(xiàn)100部分的極性最小。

2.3 平均聚合度測(cè)定

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立

2.3.1.1 (+)-兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立 按1.4.3.1節(jié)配制不同濃度的(+)-兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品甲醇溶液，過(guò)濾后進(jìn)行HPLC分析。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)經(jīng)擬合回歸后得到線(xiàn)性方程：y=513.2x+11.462,R2=0.999 2，式中：x為(+)-兒茶素質(zhì)量，mg；y為吸收峰面積。

2.3.1.2 (- )-表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立 按1.4.3.2節(jié)配制不同濃度的(- )-表兒茶素標(biāo)準(zhǔn)品甲醇溶液，過(guò)濾后進(jìn)行HPLC分析。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)經(jīng)擬合回歸后得到線(xiàn)性方程：y=618.43x+6.791 3,R2= 0.999 9，式中：x為(- )-表兒茶素質(zhì)量，mg；y為吸收峰面積。

2.3.1.3 硫解目標(biāo)產(chǎn)物標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立 按1.4.3.3節(jié)制備的硫解目標(biāo)產(chǎn)物2-ME-ec為標(biāo)準(zhǔn)品，配制不同濃度的硫解目標(biāo)產(chǎn)物溶液，過(guò)濾后進(jìn)行HPLC分析。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)經(jīng)擬合回歸后得到線(xiàn)性方程：y=309.76x-15.298,R2= 0.999 9，式中：x為2-ME-ec質(zhì)量，mg；y為吸收峰面積。

2.3.2 平均聚合度計(jì)算 樣品與巰基乙醇反應(yīng)產(chǎn)物經(jīng)HPLC分析，得到相對(duì)應(yīng)的(+)-兒茶素、(- )-表兒茶素、2-ME-ec的峰面積，由公式(6)計(jì)算出其平均聚合度，各部分物質(zhì)的量及聚合度結(jié)果如表3所示，利用60%乙醇提取肉桂原花青素得到原料聚合度為6.2，對(duì)吸附在大孔吸附樹(shù)脂上的原料進(jìn)行洗脫，10%乙醇溶液洗脫下來(lái)的部分聚合度為2.7,50%乙醇溶液洗脫下來(lái)的部分聚合度為4.5，70%乙醇溶液洗脫下來(lái)的部分聚合度為7.1，100%乙醇溶液洗脫下來(lái)的部分聚合度為6.9。因此當(dāng)乙醇在10%～50%時(shí)洗脫下來(lái)的原花青素平均聚合度為2～5，可以認(rèn)為主要為低聚體；當(dāng)乙醇在70%～100%時(shí)洗脫下來(lái)的原花青素平均聚合度大于5，可以認(rèn)為主要為高聚體。

表3 AB- 8大孔吸附樹(shù)脂分離原花青素結(jié)果

2.4 抗氧化試驗(yàn)結(jié)果

表4 不同組分及聚合度對(duì)DPPH ·自由基清除的IC50值

抗氧化性與聚合度的關(guān)系如表4所示，可以得出聚合度越低抗氧化性越高，原花青素的抗氧化性取決于其分子結(jié)構(gòu)及分子中大量酚羥基的存在[13]，隨著聚合度的增加，分子中越來(lái)越多的酚羥基形成了分子內(nèi)氫鍵，使其自由基清除能力呈下降趨勢(shì)[14]。圖1為分級(jí)處理后每部分樣品濃度與抗氧化性之間的關(guān)系，通過(guò)擬合方程，F(xiàn)10、 F50、 F70、 F100樣品及Vc 的IC50值分別為0.91、 1.28、 1.37、 1.71和3.21 g/L,在同一濃度時(shí)，F(xiàn)10部分的自由基清除率都明顯高于其他4個(gè)部分，當(dāng)質(zhì)量濃度為4 g/L時(shí)F10、 F50、 F70、 F1004部分以及Vc清除率分別為:93.54%、 81.34%、 79.83%、 77.54%、 52.33%，說(shuō)明F10的抗氧化性大于其他4個(gè)部分，同時(shí)可以得到Vc的IC50值是肉桂原花青素低聚體IC50的3.5倍，也就是肉桂原花青素低聚體的抗氧化性是Vc的3.5倍。

圖1 不同組分對(duì)DPPH ·自由基的清除率 圖2 紅外光譜圖

Fig.1 The scavenging rate curves of different

Fig.2 IR spectrafractions for DPPH·

2.5 分級(jí)產(chǎn)物的紅外光譜分析

比較原料、F10、F50、F70以及F1005個(gè)紅外光譜圖，特征碳骨架振動(dòng)產(chǎn)生特征峰的波形、頻率和強(qiáng)度相近,同時(shí)與標(biāo)準(zhǔn)品原花青素的光譜特征極為相似，如圖2中可以看到肉桂原花青素的特征骨架振動(dòng)主要集中在3600～3000、1700～1000和850～650 cm-1區(qū)域。其中3450.60 cm-1峰為原花青素分子中羥基的伸縮振動(dòng)；1624.05、 1533.40和1460.11 cm-1是苯環(huán)的骨架振動(dòng)特征吸收峰；1 265.30、1 055.06 cm-1吸收峰為C環(huán)中的C—O—C伸縮振動(dòng)；1112.94 cm-1吸收峰為C環(huán)中的C—H伸縮振動(dòng)；當(dāng)苯環(huán)上有3個(gè)相鄰的H存在時(shí)，指紋區(qū)域850～750 cm-1出現(xiàn)較強(qiáng)的吸收峰，在圖中807.61、 787 cm-1的吸收峰，可能是原花青素C2、 C3、 C4結(jié)構(gòu)中3個(gè)相鄰H產(chǎn)生的。

3 結(jié) 論

3.1 采用無(wú)水乙醇、60%乙醇、無(wú)水丙酮3種溶劑對(duì)肉桂原花青素進(jìn)行提取，初提物提取率分別為11.39%、 12.72%、 11.95%，初提物中原花青素為75.38%、 85.25%、 71.32%，原花青素提取率分別8.58%、 10.84%、 8.52%，確定肉桂原花青素的提取溶劑為60%乙醇。

3.2 大孔吸附樹(shù)脂AB- 8吸附肉桂原花青素初提物，經(jīng)10%、 50%、 70%、 100%乙醇梯度洗脫后得到4部分樣品，樣品分別標(biāo)記為：F10、F50、F70、F100，4部分中質(zhì)量最大的是F70為410 mg、純度為87.21%；樣品純度最高的是F10為90.03%；F100純度較低為42%，整個(gè)過(guò)程的回收率為93%。

3.3 洗脫液中原花青素的平均聚合度隨乙醇濃度的提高而升高，當(dāng)乙醇在10%～50%時(shí)洗脫液中原花青素的平均聚合度為2～5，可以認(rèn)為主要為低聚體。當(dāng)乙醇在70%～100%時(shí)洗脫液中原花青素的平均聚合度為大于5，可以認(rèn)為主要為原花青素高聚體。

3.4 原花青素抗氧化活性受聚合度影響，F(xiàn)10、F50、F70、F100各部分樣品及Vc 的IC50值分別為0.91、 1.28、 1.37、 1.71和3.21 g/L，當(dāng)質(zhì)量濃度為4 g/L時(shí)F10、F50、F70、F1004部分以及Vc清除率分別為:93.54%、 81.34%、 79.83%、 77.54%、 52.33%，低聚體的抗氧化性高于高聚體的抗氧化性。

3.5 紅外光譜分析經(jīng)分級(jí)得到的各部分結(jié)構(gòu)和原花青素標(biāo)準(zhǔn)品的結(jié)構(gòu)基本一致。

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計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)器具 竭誠(chéng)歡迎使用檢定

松香色度標(biāo)準(zhǔn)塊

本產(chǎn)品具有國(guó)內(nèi)行業(yè)中質(zhì)量檢驗(yàn)的權(quán)威性 長(zhǎng)期、周到的售后服務(wù)讓客戶(hù)無(wú)后顧之憂(yōu)

松香色度標(biāo)準(zhǔn)裝置(又名《松香顏色分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)》玻璃比色塊)，是符合我國(guó)松香光學(xué)特性具有完整體系的松香顏色分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。1982年榮獲林業(yè)部科技成果二等獎(jiǎng)。1987年至今，被《脂松香》、《松香試驗(yàn)方法》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)所采用，并多次經(jīng)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局復(fù)查考核合格。

Isolation of Cinnamon Proanthocyanidins by AB- 8 Macroporous Adsorption Resin

JIANG Qian1,ZHANG Jia-yan1,LEI Fu-hou2,LIU Zu-guang2

(1.Faculty of Material Engineering,Southwest Forestry College, Kunming 650224, China; 2.Guangxi Key Laboratory of Chemistry and Engineering of Forest Products,Guangxi University for Nationalities, Nanning 530006, China)

Isolation of cinnamon proanthocyanidins was performed on AB- 8 resin.1000 mg procyanidins raw materials were dissolved in small amount of 60% ethanol,then the concentrated solution was added to adsorption column in a constant rate.Ethanol solutions with volume fraction of 10%,50%,70%,100% were selected in gradient eluting by AB- 8 resin.The mass of F10that could be obtained from the ethanol 10% eluent was 290 mg;that of F50obtained from the ethanol 50% eluent was 150 mg; that of F70was 410 mg; that of F100was 80 mg.The sample with the highest purity in the four parts was F10, and its purity was 90.03%.The F100had the lowest purity in the four parts,and its purity was 42.11%.The eluting recovery achieved 93%.According to the analysis of polymerization degree and antioxidant activity,10%～50% ethanol eluent contained mainly oligomeric proanthocyanidins (OPC),70%～100% ethanol eluent contained polymeric proanthocyanidins (PPC).The antioxidative activity of 10% ethanol eluent was the highest.

proanthocyanidins;fractionation;antioxidative activity

聯(lián)系地址:210042 南京市鎖金五村16號(hào)中國(guó)林科院林產(chǎn)化學(xué)工業(yè)研究所電 話(huà):(025)85482449,85482533聯(lián)系人:譚衛(wèi)紅傳 真:(025)85482450

10.3969/j.issn.1673-5854.2015.01.005

2014- 08- 07

廣西林產(chǎn)化學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放基金(GXFC12-04) 作者簡(jiǎn)介：姜 倩(1987— )，女，內(nèi)蒙古牙克石人，碩士，研究方向?yàn)樘崛∥锘瘜W(xué)與生物質(zhì)化學(xué)品

TQ35

A

1673-5854(2015)01- 0026- 07

*通訊作者：張加研(1964—)，男，四川樂(lè)山人，教授，博士，從事天然產(chǎn)物提取及加工方面的研究及教學(xué)；E-mail:245385416@qq.com。