單寶珍，王 強(qiáng)，徐 柳，李勝保

(湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院消化內(nèi)科，湖北 十堰 442000)

胃癌是最常見的消化系腫瘤之一，其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢，嚴(yán)重地威脅了公眾的健康。胃癌的發(fā)病屬于多步驟、多因素進(jìn)行性過程，目前認(rèn)為其主要經(jīng)歷了以下一系列模式:正常胃粘膜－慢性淺表性胃炎－慢性萎縮性胃炎(Chronic atrophic gastritis，CAG)－腸化－異型增生－胃癌，并由此產(chǎn)生了胃癌癌前病變的概念［1，2］。其中，慢性萎縮性胃竇炎(Chronic atrophic antral gastritis，CAAG)被視為胃癌癌前病變。生長抑素(somatostatin，SST)屬于一種由胃腸黏膜生成的具有抑制炎性反應(yīng)的胃腸多肽［3］。為進(jìn)一步探討CAAG與血、組織SST水平降低的關(guān)系，筆者檢測了CAAG患者血與胃黏膜內(nèi)SST的含量，觀察胃竇D細(xì)胞數(shù)量的改變以及胃腺上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料:本研究共納入胃竇幽門腺萎縮患者75例，均為我院2011年1月至2014年1月收住入院的CAAG病例。所有患者均通過病理檢測確診為胃竇幽門腺萎縮，同時(shí)伴或不伴有腸化生。其中，男性47例，女性 28 例，年齡 32～81 歲，平均年齡(51.9±10.5)歲。此外，研究還納入45例胃鏡下胃竇黏膜正常，不伴各類急慢性疾病者作為研究的對(duì)照。其中，男性23例，女性 22 例，年齡 36～78 歲，平均年齡(39.2±8.8)歲。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn):①年齡18～80歲;②無糖尿病;③肝腎功能無明顯異常者;④無應(yīng)激或全身炎性反應(yīng)者。

1.3 研究方法:①標(biāo)本制備:內(nèi)鏡下胃竇病變處多部位(胃大彎、小彎、前壁以及后壁)活檢6塊，4塊進(jìn)行組織學(xué)(HE染色)以及免疫組化觀察，1塊進(jìn)行電鏡觀察，1塊進(jìn)行SST水平的檢測。SST水平檢測采用放射免疫法(Radioimmunoassay，RIA)，取材的部位主要為上皮+隱窩。免疫組化法檢測胃黏膜組織SST水平時(shí)，主要的觀察部位為隱窩。另外，采集患者肘靜脈血2mL，采用RIA法對(duì)其血SST水平進(jìn)行檢測;②內(nèi)鏡與病理結(jié)果評(píng)定:正常情況下，內(nèi)鏡下胃竇黏膜為均勻的桔紅色，組織學(xué)能夠見固有腺體的形態(tài)較為規(guī)則，排列緊密。CAAG內(nèi)鏡下能夠見到胃黏膜變薄，紅白相間，以白色較為多見，并出現(xiàn)花斑樣的改變，可伴有散在灶性糜爛，組織學(xué)能夠見到不同程度的炎性細(xì)胞浸潤，固有腺體減少或萎縮，腸上皮化生，不典型增生;③SST水平檢測:嚴(yán)格根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行相關(guān)操作，分別檢測組織以及血中的SST水平。采用考馬斯亮藍(lán)法檢測組織勻漿的蛋白濃度，組織SST水平以pg/pg蛋白表示;④SST定位與半定量檢測:嚴(yán)格根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行相關(guān)操作，SST陽性細(xì)胞可見有棕黃色。于400倍的光鏡下選擇3～5個(gè)視野，計(jì)算積分吸光度的平均值;⑤胃竇黏膜上皮超微結(jié)構(gòu)觀察:組織經(jīng)過固定、脫水、包埋、切片、染色等步驟，于電鏡下觀察胃竇黏膜上皮以及上皮細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用±s表示，組間比較采用兩樣本t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異說明具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃竇黏膜SST分布定位:正常情況下，SST主要分布于黏膜幽門腺隱窩處的D細(xì)胞中，見圖1。SST陽性染色區(qū)域主要集中在D細(xì)胞中。正常胃竇黏膜隱窩處的黏液上皮細(xì)胞核上能夠見到比較淡的SST陽性染色，但在萎縮的胃竇黏膜隱窩處，黏液上皮細(xì)胞核上則沒有看到SST的染色，見圖2。

2.2 CAAG腺上皮超微結(jié)構(gòu)改變:正常情況下，胃竇黏膜上皮黏液細(xì)胞中存在著很多電子密度較高的黏原顆粒。細(xì)胞表面的微絨毛較短較少，根部沒有進(jìn)入胞質(zhì)內(nèi)，線粒體的結(jié)構(gòu)能夠清楚的見到，嵴完整，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)排列較為整齊，細(xì)胞核膜較為完整，染色質(zhì)分布較為均勻，見圖3A、3B。CAAG時(shí)，黏液上皮細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)線粒體出現(xiàn)一定的腫脹，線粒體嵴發(fā)生明顯的斷裂，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生擴(kuò)張，造成黏液分泌的顆粒明顯降低，細(xì)胞內(nèi)核膜消失，最終導(dǎo)致染色質(zhì)的聚集，見圖3C、3D。腸化生細(xì)胞內(nèi)，能夠見到電子密度較低的黏液顆粒，表面微絨毛較多較長，絨毛根部進(jìn)入胞質(zhì)內(nèi)，見圖3E、3F。

注:A、B:正常胃竇黏膜上皮黏液細(xì)胞;C、D:CAAG黏液上皮細(xì)胞;E、F:腸化生細(xì)胞

圖1 生長抑素在正常胃黏膜(A、B)及萎縮黏膜(C、D)中的表達(dá)定位［SP，×l00(A、c)，×400(B、D)］

圖2 SST在正常幽門腺及萎縮性胃竇炎幽門腺中的表達(dá)(免疫組化染色，×4000)

圖3 電鏡下慢性萎縮性胃竇炎腺上皮超微結(jié)構(gòu)改變(A:×10000;B、D:×8000;C、F:×12000;E:×6000)

2.3 SST水平降低與胃竇黏膜萎縮:胃竇發(fā)生萎縮后，血SST、上皮+隱窩部以及隱窩部SST的水平均較正常人組有了較為明顯的降低，差異有顯著性(P＜0.05);非腸化生性萎縮、腸化生性萎縮胃竇的上皮+隱窩部以及血SST水平差異無顯著性(P＞0.05);腸化生性隱窩部SST水平明顯低于非腸化生隱窩部SST水平，差異有顯著性(P＜0.05)，見表 1。

表1血上皮+隱窩生長抑素水平比較(n，±s)

表1血上皮+隱窩生長抑素水平比較(n，±s)

注:與正常人組比較，*P＜0.05;與腸化生性組比較，#P＜0.05

組別 血(pg/100μL)上皮+隱窩(pg/μg蛋白)隱窩(×103)正常人 21.17±12.81 4.78±9.53 36.5±15.24 CAAG 10.51±7.60* 1.29±1.58* 6.79±3.15*非腸化生性 9.26±7.17* 1.15±1.41* 10.54±2.28*#腸化生性 13.66±10.49* 1.31±1.41* 5.36±1.40*

3 討論

目前研究發(fā)現(xiàn)，D細(xì)胞廣泛存在于機(jī)體的胃腸道內(nèi)。其中，分布在胃內(nèi)的D細(xì)胞多見于胃竇幽門腺的隱窩部位［4］。D細(xì)胞能夠分泌SST，并通過旁分泌對(duì)其周圍的細(xì)胞功能進(jìn)行干預(yù)［5］。當(dāng)SST進(jìn)行循環(huán)后，能夠以體液的形式分布在幽門腺的腔側(cè)黏液上皮附近。目前研究發(fā)現(xiàn)，采用RIA法檢測循環(huán)以及胃黏膜勻漿SST的水平并不準(zhǔn)確。因其受到多種因素的干擾，所得到的數(shù)據(jù)離散度較大。本研究通過免疫組化法進(jìn)行了SST水平的檢測，發(fā)現(xiàn)CAAG患者幽門腺隱窩部位的D細(xì)胞顯著減少，這可能引發(fā)患者血、胃黏膜SST水平明顯降低的一個(gè)重要原因。本研究共檢測了75份胃竇幽門腺萎縮樣本，發(fā)現(xiàn)幽門腺隱窩部位D細(xì)胞顯著降低均伴有幽門腺不同程度的萎縮。

CAAG的主要病理改變是胃固有腺體的減少。目前，CAAG從組織學(xué)上來說存在兩種類型:即腸化生性萎縮以及非腸化生性萎縮。本研究發(fā)現(xiàn)，兩種類型的萎縮都與幽門腺隱窩部SST水平的下降有關(guān)。其中，腸化生性萎縮對(duì)幽門腺隱窩部位D細(xì)胞的影響明顯大于非化生性萎縮。

幽門腺約占胃黏膜總面積的20%，里面含有大量的黏液細(xì)胞、少量的D細(xì)胞以及少量的G細(xì)胞等。胃黏膜經(jīng)常面對(duì)物理性質(zhì)以及化學(xué)性質(zhì)差異懸殊的食物，由于有黏液上以及及分泌物黏液的保護(hù)作用，使得胃黏膜能夠得以維持正常的生理功能。本研究發(fā)現(xiàn)，CAAG發(fā)生時(shí)，除了固有腺體的減少外，還存在的黏液上皮胞漿內(nèi)線粒體發(fā)生一定的腫脹，峭出現(xiàn)斷裂，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生擴(kuò)張，導(dǎo)致黏原顆粒數(shù)量的下降，最終造成細(xì)胞內(nèi)核膜的消失，染色質(zhì)發(fā)生聚集，說明來自胃竇的黏液生成量將有顯著的下降。目前，關(guān)于黏液細(xì)胞分泌黏液的生理機(jī)制，研究尚不完全進(jìn)行明確。以往的研究認(rèn)為，食物與黏膜的直接接觸，本身就能夠刺激黏液的分泌，黏液細(xì)胞的分泌活動(dòng)并不受到神經(jīng)體液的調(diào)節(jié)。本研究發(fā)現(xiàn)，幽門腺黏液上皮細(xì)胞附近SST的水平出現(xiàn)了明顯降低，同時(shí)還伴有細(xì)胞內(nèi)黏原顆粒數(shù)量的顯著下降，D細(xì)胞周圍黏液上皮細(xì)胞核上的SST發(fā)生消失，均說明黏液上皮細(xì)胞對(duì)于食物刺激，仍然受到體液因素的調(diào)控。

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