LC-MS/MS同時測定降壓類中成藥中3種非法添加化學物質(zhì)

★張勛1池文杰2金鳴2林羽1*(1.福建中醫(yī)藥大學藥學院福州 350122；2.福建省藥品檢驗所福州 350001)

摘要：目的:建立LC-MS/MS方法測定降壓類中成藥中非法添加氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平3種化學物質(zhì)。方法:采用液相色譜-三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜法，多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)對降壓類中成藥中非法添加的3種化學物質(zhì)進行定量、定性分析。結(jié)果:建立了同時測定降壓類中成藥非法添加3種化學物質(zhì)的方法，檢測限均小于0.05 ng。結(jié)論:所建立的方法簡便、快速、準確，可作為降壓類中成藥中非法添加尼莫地平、尼群地平和氫氯噻嗪的快速篩查并定量的方法。

關(guān)鍵詞：LC-MS/MS；氫氯噻嗪;尼群地平;尼莫地平；降壓藥

高血壓是常見的心血管疾病，患病率高。使用毒副作用小的中藥復(fù)方制劑簡化治療方案，備受廣大患者的歡迎。但目前國家食品藥品監(jiān)督管理局尚未頒布降壓類中成藥非法添加化學物質(zhì)有效甄別方法的標準，一些違法廠家避開檢驗標準，針對性地在中成藥中添加功效相似的抗高血壓物質(zhì)，危害患者的身心健康，因此對該類非法添加現(xiàn)象的檢測技術(shù)進行研究十分必要。

本文以降壓類中成藥為研究對象，選取療效明顯、應(yīng)用廣泛、價格便宜的氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平作為檢測物質(zhì)，建立了同時測定這3種物質(zhì)的方法，以保證臨床用藥安全。

1材料與儀器

1.1材料甲醇、乙腈(德國默克公司，色譜純)； 尼莫地平對照品(供含測用，中國藥品生物制品檢定所，批號：100270-200002)；尼群地平對照品(供含測用，中國藥品生物制品檢定所，批號：100585-200602)；氫氯噻嗪對照品(供含測用，中國藥品生物制品檢定所，批號：100309-200702)；實驗用降壓類中成藥樣品來源于2009年福建省藥品檢驗所全國評價性抽樣品種，共735批，涉及26個品種，其中3個品種處方中明確含有氫氯噻嗪。品種信息如表1所示。

表1　26個品種信息

注：*表示處方中含有氫氯噻嗪。

1.2儀器Aglient 1200 Series-6410 Triple Quad高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(安捷倫公司)；電子天平XS205DU(上海梅特勒公司)；電子天平AL204-IC(上海梅特勒公司)；Millipore 超純水機(法國Milllipore 公司)；KQ-300型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；離心機(上海安亭科學儀器廠)。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件色譜柱：Welch XB-C18分析柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫：30℃；流動相：乙腈-水(70∶30)；流速：0.5 mL/min；進樣量：5μL。

2.2質(zhì)譜條件電離方式：ESI負離子檢測模式；掃描模式:多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)；毛細管電壓：4000 V；氣體流速:6 L/min；霧化器壓力:30 psi;其他質(zhì)譜條件參數(shù)詳見表2。

2.3對照品溶液的配制精密稱取氫氯噻嗪對照品5.0mg、尼莫地平對照品10.0mg和尼群地平對照品12.0mg,置于25 mL 棕色容量瓶中，加乙腈溶解，稀釋至刻度，搖勻，配制成混合溶液，使用時用乙腈稀釋成不同濃度的標準工作溶液。

2.4供試品溶液的配制片劑、丸劑，取一次服用劑量，研細，精密稱定；膠囊劑，取一次服用劑量，傾出內(nèi)容物，研細，并剪碎囊殼，精密稱定；將樣品粉末置于50 mL棕色量瓶中，加入45 mL乙腈超聲10min，放冷至室溫，乙腈定容至刻度，搖勻；離心機離心15 min(4000 r/min)；精密吸取上清液100 μL至250 mL棕色容量瓶中，乙腈稀釋至刻度，0.2 μm 濾膜濾過，即得。

表2　質(zhì)譜MRM參數(shù)

注：＊為定量用離子。

2.5方法學考察

2.5.1線性關(guān)系考察精密吸取對照品混合液置棕色容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，搖勻。按 2.1項和2.2項下條件進行檢測，繪制各物質(zhì)定量離子的峰面積Y對其質(zhì)量濃度的標準曲線,結(jié)果如表3所示。

2.5.2精密度實驗配制對照品混合溶液按2.1和2.2項下條件重復(fù)連續(xù)進樣6次，測定三個成分峰面積，測得的氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平的RSD分別為1.6%，1.59%、2.26% 。

表3　3種物質(zhì)的線性方程、線性范圍及相關(guān)系數(shù)

2.5.3穩(wěn)定性實驗取對照品混合溶液放置0,4,10,12,18,24h，按2.1和2.2項下條件測定峰面積，氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平的RSD分別為1.87%、1.76%、1.77%，結(jié)果表明三種對照品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5.4加樣回收實驗在樣品(不含所測成分)中精密加入對照品混合溶液5 mL，平行6份，按2.4項下處理后，進樣分析，氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平平均回收率分別為99.05%、99.92%、98.95% ，RSD分別為1.07%、1.11%、1.89%。

2.5.5檢測限和定量限取對照品混合溶液，以不同比例稀釋，按2.1和2.2項下條件測定，氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平最低檢測限分別為0.0045,0.04,0.0168ng，最低定量限分別為0.009,0.068,0.0504ng。

2.6對照品溶液分析精密吸取混合對照品溶液和供試品溶液，按2.1和2.2項下條件進樣，記錄總離子流圖,三者在乙腈—水(70∶30)的流動相條件下得到良好的分離。對照品溶液的總離子流圖及提取離子流圖如下圖1所示。

2.7供試品溶液分析對樣品進行分析，發(fā)現(xiàn)25批次處方中含氫氯噻嗪樣品均檢出含氫氯噻嗪，并對其定量，其他樣品均未檢出含有氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平。

3討論

3.1質(zhì)譜條件的優(yōu)化分別制備單一對照品溶液，以0.5 mL/min流速直接注入離子源，在全掃描方式下選擇三個對照的電離模式。[M+Na]+不穩(wěn)定，不適合用于定量用離子，選擇負離子模式。優(yōu)化后質(zhì)譜條件如表2所示。各成分優(yōu)化質(zhì)譜條件后質(zhì)譜圖如圖2所示。

3.2色譜條件的優(yōu)化實驗中，曾嘗試使用甲醇-水作為流動相，三個組分均可得到分離，發(fā)現(xiàn)用乙腈—水作為流動相，三個組分的峰形好，而且響應(yīng)值高，故選擇乙腈—水。在樣品提取溶劑中，考察無水乙醇、甲醇和乙腈提取效率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)用甲醇和無水

圖1　對照品總離子及提取離子流圖

編號名稱標示量檢出量(mg/片)1珍菊降壓片-12珍菊降壓片-23珍菊降壓片-34珍菊降壓片-45珍菊降壓片-56珍菊降壓片-67珍菊降壓片-78珍菊降壓片-89珍菊降壓片-910珍菊降壓片-1011珍菊降壓片-1112珍菊降壓片-1213珍菊降壓片-1314珍菊降壓片-1415珍菊降壓片-1516脈君安片-117脈君安片-218脈君安片-319脈君安片-420脈君安片-521脈君安片-622脈君安片-723脈君安片-824降壓避風片-125降壓避風片-25mg/片1.5mg/片2.5mg/片5.975.845.204.494.183.833.713.673.623.583.543.212.942.902.831.671.581.391.370.940.820.810.702.672.30

當進樣量過大時，氫氯噻嗪色譜峰出現(xiàn)叉峰現(xiàn)象，故將進樣量定為5μL。

圖2　優(yōu)化質(zhì)譜條件后質(zhì)譜圖

4小結(jié)

在收集樣品中，珍菊降壓片和脈君安片處方明確含有氫氯噻嗪，標示量分別為5 mg/片和 1.25mg/片，由于2010版《中華人民共和國藥典》中沒有檢測氫氯噻嗪項目，有些廠家避開處方標準，少投料，有些批次的標示量達不到標準要求，產(chǎn)品質(zhì)量難以保證。本文建立了同時檢測氫氯噻嗪、尼群地平和尼莫地平的LC-MS/MS法，通過保留時間、母離子和子離子對目標成分進行定量和定性分析，該方法簡便、靈敏、穩(wěn)定，適用范圍廣。除處方標識中含有氫氯噻嗪樣品檢出含有化學物質(zhì)外，其余均未檢出含有非法添加的化學藥物，筆者認為抽樣過程中具有較大盲目性，在日后的抽檢過程中，可以采用本文建立的LC-MS/MS分析方法進行針對性抽樣，節(jié)省實驗資源消耗。

Simultaneous Determination of 3 Chemicals Illegally Added into Anti-hypertensive Chinese Medicines by LC-MS/MS

LIN Yu1,ZHANG Xun1, CHI Wen-jie2, JIN Ming2

1.PharmacyCollegeofFujianUniversityofTraditionalChineseMedicine,Fuzhou350122，China;

2.FujianProvincialInstituteforDrugControl,Fuzhou350001,China.

Abstract:To establish a liquid chromatography-tandem mass chromatography method for screening hydrochlorothiazide, nitrendipine and nimodipine in Traditional Chinese Patent Medicines. Methods: The target compounds were analyzed by LC-MS/MS-ESI-MRM. Results: Established a method for determination of 3 compounds illegally added into Traditional Chinese Patent Medicines simultaneously and the detection limits were less than 0.05 ng. Conclusion: The method is simple, rapid and accurate and it could be used for rapidly screening and quantitatively analyzing hydrochlorothiazide, nitrendipine and nimodipine in Traditional Chinese Patent Medicines.

Key words:LC-MS/MS; hydrochlorothiazide; nitrendipine; nimodipine；hypotensor

收稿日期：(2015-02-06)編輯：曾文雪

中圖分類號：R286.0

文獻標識碼：A

通信作者：*林羽(1966—)，主任藥師。研究方向：中藥質(zhì)量標準。E-mail:yulam@163.com。