潘偉東，杜義龍，王肖，潘海峰

(承德醫(yī)學(xué)院河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德 067000)

燈盞花半枝蓮韓信草中野黃芩苷含量比較

潘偉東，杜義龍，王肖，潘海峰

(承德醫(yī)學(xué)院河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德 067000)

目的 采用高效液相色譜法測定燈盞花、半枝蓮、韓信草3種藥材中野黃芩苷的含量并進(jìn)行比較。方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱溫30 ℃，流動(dòng)相為0.1%磷酸水-甲醇(65：35)，流速1.0 mL·min-1，檢測波長335 nm，進(jìn)樣量10 μL。結(jié)果 燈盞花、半枝蓮、韓信草中野黃芩苷含量的線性范圍為0.017 5～0.28 mg·mL-1(r=0.999 7，n=5)，平均加樣回收率(n=6)分別為100.25%(RSD=2.49%)、99.25%(RSD=2.65%)、100.64%(RSD=3.23%)。燈盞花、半枝蓮、韓信草中野黃芩苷的含量范圍分別為0.20%～5.26%，0.37%～1.59%，0.01%～0.41%。結(jié)論 燈盞花、半枝蓮、韓信草中野黃芩苷的含量存在差異，野黃芩苷的總體含量燈盞花中最高，半枝蓮次之，韓信草中最低。

燈盞花；半枝蓮；韓信草；野黃芩苷；色譜法，高效液相

燈盞花為菊科植物短葶飛蓬[Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.]的干燥全草，主要分布于云南、湖南、廣西、貴州、四川及西藏等地，其中云南產(chǎn)燈盞花占全國總產(chǎn)量的95%[1]。燈盞花素(breviscapine)為燈盞花中提取分離得到的黃酮類有效成分，其主成分為燈盞花乙素(野黃芩苷 scutellarin)，另外含有少量的燈盞花甲素[2]。2010年版《中華人民共和國藥典》規(guī)定，燈盞花素制劑中含野黃芩苷含量不得低于90.0%(供口服用)或98.0%(供注射用)[3]。燈盞花素具有擴(kuò)張腦血管、降低腦血管阻力、增加腦血流量、改善微循環(huán)以及抗血小板聚集等作用，臨床主要用于治療缺血性心腦血管疾病[4-5]。目前市售的燈盞花素制劑分為口服和靜脈滴注兩類，如燈盞花素片、燈盞花素滴丸、燈盞花素顆粒、燈盞花素注射液等[6]。隨著燈盞花素制劑廣泛應(yīng)用于臨床，燈盞花素的需求量日漸增加。作為燈盞花素制備的原藥材，燈盞花的需求量也日漸增加。目前燈盞花藥材年采集量約為1×106kg，由于過度采集，燈盞花野生資源以及栽培藥材均有供不應(yīng)求之勢，而且價(jià)格昂貴。因此，尋找燈盞花的藥源成為現(xiàn)在急需解決的一個(gè)問題。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，半枝蓮(ScutellariabarbataD.Don.)、韓信草(ScutellariaindicaLinn.)中也含有野黃芩苷，筆者從化學(xué)的角度探討能否用半枝蓮或韓信草作為制備燈盞花素的原料。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1200 Series高效液相色譜儀(G1322A 在線脫氣機(jī)、G1311A 四元泵、G1316A 柱溫箱、G1315D二極管陣列檢測器、G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器)；Agilent Chemstation色譜工作站(美國安捷倫公司)；HC-2062高速離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司)；KQ-700型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；AG-245型十萬分之一電子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2 試藥 野黃芩苷(批號(hào)：PCS0329)購于北京中科儀友化工技術(shù)研究院，含量98%。甲醇、乙腈為色譜純(Fisher Scientific，USA)，四氫呋喃為色譜純(Mreda Technology Inc，USA)；水為娃哈哈純凈水(河北省高碑店市經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū))；其他試劑為分析純。燈盞花、半枝蓮、韓信草由承德民族師范學(xué)院董建新教授分別鑒定為菊科植物短葶飛蓬[Erigeronbreviscapus(Vant.)Hand.-Mazz.]、唇形科植物半枝蓮(ScutellariabarbataD.Don)、唇形科植物韓信草(ScutellariaindicaLinn.)的干燥全草。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：0.1%磷酸水-甲醇(65：35)；檢測波長：335 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。對照品及樣品色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取野黃芩苷對照品2.8 mg至10 mL量瓶，加甲醇溶解并定容，制成0.28 mg·mL-1對照品溶液，作為對照品儲(chǔ)備液。

2.3 供試品溶液的制備 ①稱取燈盞花粉末(過60目篩)約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲(700 W，40 kHz)處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%乙醇補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻，提取液于12 000 r·min-1(r=5 cm)下離心10 min，內(nèi)徑0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得(D14、D16中野黃芩苷含量超限，分別稀釋后進(jìn)樣)。②精密稱取半枝蓮粉末(過60目篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，密塞，稱定質(zhì)量，超聲(700 W，40 kHz)處理30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用50%乙醇補(bǔ)足質(zhì)量，搖勻，提取液于12 000 r·min-1下離心10 min，內(nèi)徑0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得(B10、B13中野黃芩苷含量超限，分別稀釋后進(jìn)樣)。③精密稱取韓信草粉末(過60目篩)約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，超聲(700 W，40 kHz)處理30 min，提取液回收溶劑至干，用50%乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加50%乙醇至刻度，搖勻，溶液于12 000 r·min-1離心10 min，內(nèi)徑0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察 以對照品儲(chǔ)備液為1號(hào)溶液，采用倍比稀釋法將對照品儲(chǔ)備液制成系列濃度溶液，得2～5號(hào)對照品溶液，野黃芩苷的濃度分別為0.14，0.07，0.035，0.0175 mg·mL-1。在“2.1”項(xiàng)色譜條件下，分別取上述系列對照品溶液各10 μL進(jìn)樣，記錄峰面積。以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，對照品濃度(C)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為A=32 603C+62.138(r=0.999 7)，線性范圍為0.017 5～0.28 mg·mL-1。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取3號(hào)對照品溶液10 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，峰面積的RSD(n=6)值為0.09%(<3%)，表明方法精密度良好。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批燈盞花粉末(D10)6份，每份約0.25 g，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)樣10 μL，平行測定，記錄峰面積，峰面積RSD(n=6)值為2.1%。同法，得到半枝蓮(B01)、韓信草(S02)的RSD值分別為1.3%，2.2%，均<3%，表明重復(fù)方法性良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一燈盞花(D10)供試品溶液，分別在制備后0，4，8，12，16，24 h，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10 μL，記錄峰面積，峰面積RSD(n=6)1.3%。同法，得到半枝蓮(B01)、韓信草(S02)的RSD值分別為1.8%，1.5%，均<3%，表明方法穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 稱取已知野黃芩苷含量的燈盞花粉末(D10)6份，每份約0.125 g，精密稱定，加入野黃芩苷對照品適量，按“2.3”項(xiàng)下條件制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10 μL，進(jìn)行分析測定，計(jì)算回收率。同法，測定半枝蓮(B01，取約0.25 g)、韓信草(S02，取約0.25 g)的加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.9 樣品含量測定 取燈盞花、韓信草、半枝蓮樣品，按“2.3”項(xiàng)方法分別制備供試品溶液各3份，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10 μL，進(jìn)行分析測定，通過回歸方程分別計(jì)算燈盞花、半枝蓮、韓信草中野黃芩苷的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 色譜條件的優(yōu)化 野黃芩苷在280和335 nm波長處有最大吸收，本研究采用2010年版《中華人民共和國藥典》的335 nm為檢測波長。另外，對甲醇-水、乙腈-水、水-甲醇-四氫呋喃、不同濃度的甲酸-甲醇、乙酸-甲醇、磷酸-甲醇系統(tǒng)，以及Agilent不同系列色譜柱進(jìn)行篩選，結(jié)果使用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以0.1%磷酸溶液-甲醇(65：35)為流動(dòng)相時(shí)3種藥材的野黃芩苷色譜峰峰形良好、分離度高，符合定量要求。

3.2 提取方法的考察 本研究分別采用甲醇、50%乙醇[7]、三氯甲烷作為提取溶劑，同時(shí)對索氏提取、回流提取、超聲提取等方法進(jìn)行了優(yōu)化，并對提取次數(shù)、提取時(shí)間分別進(jìn)行單因素考察，結(jié)果以50%乙醇為提取溶劑，超聲提取30 min，提取1次時(shí)，野黃芩苷基本提取完全。

3.3 燈盞花、半枝蓮、韓信草中野黃芩苷的含量比較與分析 由表2可得到，燈盞花中野黃芩苷的含量范圍為0.20%～5.26%，半枝蓮中野黃芩苷含量為0.37%～1.59%，韓信草中野黃芩苷的含量為0.01%～0.41%，總體上看燈盞花中野黃芩苷含量最高，半枝蓮次之，韓信草最低；燈盞花同種藥材中野黃芩苷含量差異較大，如燈盞花D16中野黃芩苷含量最高，達(dá)5.26%，與D11的0.20%相差25倍，半枝蓮、韓信草也存在同樣問題，這可能與各藥材的生長環(huán)境、采集時(shí)間、加工過程等不同有關(guān)。

3.4 燈盞花素的市場分析與展望 燈盞花素是從燈盞花提取制備而得，主要成分為野黃芩苷，2010年版《中華人民共和國藥典》規(guī)定含量不得低于90%，臨床上主要用于心腦血管疾病的治療。本研究通過對3種藥材野黃芩苷含量的比較，結(jié)果顯示半枝蓮與燈盞花中的野黃芩苷含量基本相當(dāng)，且野生資源豐富，在我國各省均有分布，蘊(yùn)藏量每年為450萬～500萬千克[8]，價(jià)格低廉。根據(jù)以上分析，認(rèn)為利用半枝蓮替代燈盞花制備燈盞花素具有很大的可能性，有待進(jìn)一步研究。

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DOI 10.3870/yydb.2015.06.032

2014-02-24

2014-05-16

潘偉東(1989-)，男，河北滄州人，碩士，從事中藥分析工作。電話：0314-2291186，E-mail：panweidong1223@163.com。

潘海峰(1967-)，女，河北承德人，教授，碩士，從事中藥分析研究。電話：0314-2291186，E-mail：phf2301@163.com。

R284；R927.2

B

1004-0781(2015)06-0816-04