于俊杰(綜述),詹曉蓉(審校)

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，哈爾濱 150001)

微RNA在非酒精性脂肪性肝病中的作用

于俊杰△(綜述),詹曉蓉※(審校)

(哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，哈爾濱 150001)

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是以脂肪在肝臟異位沉積為特征的一組臨床病理綜合征，由于遺傳、環(huán)境、不良的生活方式等因素的影響，NAFLD的發(fā)病率呈逐年增加，現(xiàn)已成為危害人類健康的三大肝臟疾病之一，NAFLD與代謝綜合征及糖脂代謝異常、糖尿病伴隨發(fā)生，正因?yàn)榕c多種疾病的關(guān)聯(lián)、對(duì)心血管發(fā)生事件的影響等特點(diǎn)，其臨床重要性越來(lái)越受到關(guān)注。隨著分子生物學(xué)及功能性研究的不斷進(jìn)展，微RNA(microRNA，miRNA)在肝臟疾病及其發(fā)病機(jī)制中作用的報(bào)道屢見不鮮，并取得一系列重要進(jìn)展，因此深入研究miRNA致NAFLD糖脂代謝紊亂的發(fā)病機(jī)制對(duì)NAFLD早期防治有重大意義，現(xiàn)對(duì)miRNA的生物學(xué)特性及其與NAFLD的關(guān)系進(jìn)行了綜述，以便人們?cè)诖嘶A(chǔ)上進(jìn)一步發(fā)掘miRNA在NAFLD預(yù)防、診斷、治療中的潛在價(jià)值。

1NAFLD概述

NAFLD是由于肝臟脂代謝失調(diào)，脂質(zhì)沉積、浸潤(rùn)，脂肪水平升高，導(dǎo)致脂質(zhì)在肝細(xì)胞內(nèi)大量沉積引起的肝細(xì)胞損傷[1]。NAFLD發(fā)病率高，在肥胖患者中極為常見，并可進(jìn)一步發(fā)展為非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)、肝硬化和肝功能衰竭,是代謝綜合征的主要臨床表現(xiàn)之一。另外有研究證明，NAFLD與血管內(nèi)皮功能障礙、頸動(dòng)脈斑塊形成有關(guān)，可引起一些患者心電圖缺血性改變[2-5]。NAFLD的發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，目前較權(quán)威的學(xué)說(shuō)(假說(shuō))為二次打擊學(xué)說(shuō)[6]，即“第1次打擊”主要是胰島素抵抗；“第2次打擊”是氧化應(yīng)激和異常的細(xì)胞因子導(dǎo)致的肝臟壞死性炎癥和纖維化。然而“二次打擊”學(xué)說(shuō)并不能完全解釋NAFLD的發(fā)病機(jī)制，近年來(lái)，關(guān)于miRNA在肝臟疾病及其發(fā)病機(jī)制中作用的報(bào)道屢見不鮮，并取得一系列重要進(jìn)展，在一些動(dòng)物研究中，miRNA在脂代謝中的重要作用已被明確報(bào)道[7-8]。并且最近研究顯示，miRNA在人類NASH確實(shí)存在一些差異表達(dá)[9]。這些差異表達(dá)的miRNA調(diào)控多種生物學(xué)行為，如發(fā)育的進(jìn)程、干細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、疾病以及腫瘤發(fā)生等[9]，miRNA在NASH和肝硬化的病程及NAFLD潛在的診療作用逐漸受到重視，成為肝臟疾病研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。

2miRNA的生物學(xué)特征和一般機(jī)制的概述

基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控是基因表達(dá)調(diào)控的重要環(huán)節(jié)之一，主要包括信使RNA(mRNA)前體的加工修飾、3′末端對(duì)其利用效率的控制、翻譯作用控制等，同時(shí)也是目前公認(rèn)的多種疾病發(fā)病機(jī)制之一。在這個(gè)調(diào)控過(guò)程中miRNA主要通過(guò)調(diào)節(jié)靶基因mRNA和編碼蛋白的表達(dá)起作用。miRNA是一類多種生物體內(nèi)源性轉(zhuǎn)錄編碼的小分子單鏈RNA，長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸，其通過(guò)直接剪切或者通過(guò)完全/不完全與靶mRNA 3′非翻譯區(qū)(3′UTR)互補(bǔ)配對(duì)來(lái)抑制靶mRNA的翻譯[10-11]，從而發(fā)揮對(duì)基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用。miRNA的表達(dá)依賴于發(fā)展階段，具有器官特異性[12-13]，其在細(xì)胞的增殖、分化和凋亡、免疫、腫瘤形成、組織的分化和發(fā)育等病理生理活動(dòng)中發(fā)揮至關(guān)重要的作用[7，14]。目前已發(fā)現(xiàn)的人類miRNA有上千種。在病理?xiàng)l件下，一部分miRNA的過(guò)表達(dá)或下調(diào)可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞代謝紊亂，或?qū)е律磉^(guò)程發(fā)生障礙引起其他疾病。

3miRNA在NASH和NAFLD發(fā)病機(jī)制的作用

最近幾年，由于miRNA在脂代謝調(diào)節(jié)方面的重要作用，其在NAFLD中的研究已成為一個(gè)新興的研究熱點(diǎn)。這些小RNA分子可以調(diào)節(jié)許多重要的生物學(xué)行為，有些可能與NASH起源有密切的關(guān)系。不過(guò)，目前已知的肝臟miRNA表達(dá)模式的數(shù)據(jù)及其在人類NASH中的作用還是有限的。

3.1miRNA在人類NASH的差異表達(dá)最近的一項(xiàng)研究表明，人類NASH與特定的差異表達(dá)的miRNA相關(guān)[9]。在這項(xiàng)研究中，共有474人的miRNA被研究。其中46個(gè)miRNA被發(fā)現(xiàn)在NASH中有差異表達(dá)。高表達(dá)的有23個(gè)miRNA，低表達(dá)的有23個(gè) miRNA。目前已知的是一個(gè)miRNA可以有多個(gè)目標(biāo)基因(多樣性)和多個(gè)miRNA有一個(gè)單一的目標(biāo)基因(協(xié)同效應(yīng))。據(jù)報(bào)道，其中的2個(gè)高表達(dá)基因和1個(gè)低表達(dá)基因的miRNA可能有超過(guò)40個(gè)候選的靶基因[9]。然而大多數(shù)高表達(dá)和低表達(dá)的miRNA少于10個(gè)候選靶基因。在NASH的發(fā)展進(jìn)程的關(guān)鍵環(huán)節(jié)中，這些差異表達(dá)的miRNA的潛在靶點(diǎn)發(fā)揮重要作用，包括一些重要的轉(zhuǎn)錄因子，如同源異型基因和性基因，這些靶基因直接參與脂質(zhì)代謝，細(xì)胞生長(zhǎng)和分化，細(xì)胞凋亡和炎癥。這些變化會(huì)潛在影響胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、脂質(zhì)代謝、細(xì)胞應(yīng)激和凋亡反應(yīng)、炎癥和組織損傷反應(yīng)。

3.2特定miRNA在NASH中的作用盡管NAFLD的發(fā)病機(jī)制尚不完全清楚，但miRNA在其間所起的作用不容忽視。肝細(xì)胞內(nèi)脂滴蓄積是包括NAFLD在內(nèi)的多種肝臟疾病相關(guān)的脂肪變性的主要標(biāo)志。目前，高通量篩選結(jié)果顯示，有11種 miRNA能改變脂滴的形成和儲(chǔ)存，特別是miR-181d可減少細(xì)胞內(nèi)60%的脂滴蓄積，進(jìn)而降低細(xì)胞內(nèi)三酰甘油和膽固醇水平；與NAFLD發(fā)病密切相關(guān)的氧化物酶體增殖因子活化受體α目前被認(rèn)為是miR-10b的靶基因，可調(diào)節(jié)脂肪變性干細(xì)胞模型L02細(xì)胞的脂肪變性水平[7，9，15-17]。肝臟中有含量非常豐富的miRNA——miR-122。近幾年，miR-122在調(diào)節(jié)膽固醇和血脂代謝發(fā)揮的作用已引起了相當(dāng)大的關(guān)注。在肝臟所有miRNA中，它占了近70%[18]。miR-122也是在人類NASH中被發(fā)現(xiàn)的差異表達(dá)的miRNA之一[9]。據(jù)報(bào)道，miR-122 除了在脂質(zhì)和膽固醇代謝中的作用之外，還可以促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化[7-8，16]。研究表明，在飲食誘導(dǎo)的肥胖小鼠模型抑制miR-122，將會(huì)導(dǎo)致乙酰輔酶A羧化酶B脂肪酸合成酶、硬酯酰輔酶A脫氫酶和3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶的mRNA的表達(dá)下降，并顯著降低這些動(dòng)物血漿膽固醇[7]。更重要的是，在沉默miR-122治療2周后，這些小鼠肝臟組織學(xué)結(jié)果顯示肝脂肪變性有大幅度的改善。另外，在Krützfeldt等[8]的另一項(xiàng)研究中，也發(fā)現(xiàn)在沉默miR-122后3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A小鼠血漿膽固醇水平明顯下降。這些研究結(jié)果充分表明，miRNA在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝及在肝臟脂肪變性的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用。最近， Gatfield等[19]研究表明，miR-122可能與生物鐘的輸出系統(tǒng)緊密相連，并優(yōu)先調(diào)節(jié)晝夜節(jié)奏的表達(dá)基因。事實(shí)上肝臟中多達(dá)10%的蛋白質(zhì)編碼基因可能受晝夜節(jié)律的調(diào)節(jié)，而它們中的許多均與生物鐘有聯(lián)系，參與了各種代謝途徑，特別是眾所周知的膽固醇和脂質(zhì)代謝。除了miR-122，其他幾個(gè)miRNA被報(bào)道與肥胖和脂肪形態(tài)的改變有緊密聯(lián)系。例如，在肝臟和白色脂肪的miR-335 的表達(dá)已被證明是在ob/ob小鼠的表達(dá)上調(diào)；增加miR-335的表達(dá)也與機(jī)體白色脂肪組織和肝臟的質(zhì)量增加以及三酰甘油和膽固醇水平升高[20]相關(guān)。此外，miR-335水平與脂肪細(xì)胞的表達(dá)分化標(biāo)記如過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體、Fas分子密切相關(guān)。研究表明，miR-134在脂肪細(xì)胞分化中也起著相似的作用，通過(guò)靶基因細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶5來(lái)實(shí)現(xiàn)[16]。miRNA在胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用被進(jìn)化上保守的胰島細(xì)胞特異的miR-375所證實(shí)[21]。過(guò)表達(dá)miR-375抑制葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素分泌，而抑制內(nèi)源性miR-375增強(qiáng)胰島素的分泌。研究顯示，胰島素分泌受到miR-375變化的影響，這一機(jī)制在葡萄糖代謝或細(xì)胞內(nèi)鈣信號(hào)是獨(dú)立相關(guān)的[21]。miR-375似乎在胰島素分泌的調(diào)節(jié)中扮演重要角色，將來(lái)可能會(huì)成為治療胰島素抵抗和糖尿病的一個(gè)新的藥物靶點(diǎn)。

4miRNA潛在的診斷價(jià)值

近年來(lái)，隨著研究技術(shù)的成熟和認(rèn)識(shí)的不斷深入，人們對(duì)肝臟miRNA的研究已取得了很大進(jìn)展，已發(fā)現(xiàn)許多與肝臟疾病的病理過(guò)程密切相關(guān)的 miRNA。NAELD起病隱匿，缺乏特異性的臨床表現(xiàn)。對(duì)NAFLD的診斷主要包括血液生化檢測(cè)和影像學(xué)檢測(cè)，前者特異性較差，后者簡(jiǎn)單、無(wú)創(chuàng)，適合疾病的篩選。不過(guò)目前診斷NAFLD的金標(biāo)準(zhǔn)仍然是肝活組織檢查。研究表明，在疾病狀態(tài)下外周血miRNA會(huì)發(fā)生異常表達(dá)，這預(yù)示著循環(huán)miRNA可作為疾病早期診斷和鑒別診斷的潛在無(wú)創(chuàng)性指標(biāo)[9]。

5結(jié)語(yǔ)

miRNA是基因表達(dá)強(qiáng)大的調(diào)控者和參與者。它參與調(diào)節(jié)生物體的生長(zhǎng)、發(fā)育等多個(gè)環(huán)節(jié)，與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。多種miRNA的表型改變和表達(dá)異常可正向或負(fù)向調(diào)控靶基因的表達(dá)，參與肝臟疾病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。這些小分子水平的調(diào)控在未來(lái)可能會(huì)對(duì)肝臟疾病的治療起重要作用。然而miRNA的功能調(diào)節(jié)及其對(duì)靶mRNA表達(dá)翻譯水平調(diào)控的具體途徑有待于進(jìn)一步研究。隨著對(duì)miRNA的網(wǎng)絡(luò)調(diào)控功能研究的深入，人們必然會(huì)認(rèn)識(shí)到miRNA在NAFLD的預(yù)防、診斷、治療中所起的重要作用。

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摘要：微RNA(miRNA) 是一類長(zhǎng)約22個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非蛋白質(zhì)編碼的小分子RNA，它通過(guò)對(duì)目標(biāo)mRNA的剪切和翻譯抑制，發(fā)揮對(duì)基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用。miRNA具有多靶點(diǎn)的特性，至少參與約1/3人類蛋白質(zhì)的表達(dá)調(diào)控，并且參與調(diào)控細(xì)胞分化、凋亡，腫瘤形成、免疫反應(yīng)等多種生物學(xué)行為。近些年研究表明，miRNA對(duì)于調(diào)控非酒精性脂肪性肝病的基因表達(dá)、調(diào)節(jié)脂質(zhì)形成和儲(chǔ)存至關(guān)重要。

關(guān)鍵詞：微RNA；非酒精性脂肪性肝炎；非酒精性脂肪性肝?。淮x綜合征

The Role of MicroRNA in Nonalcoholic Fatty Liver DiseasesYUJun-jie，ZHANXiao-rong.(DepartmentofEndocrinology,theFirstAffiliatedHospitalofHarbinMedicalUniversity,Harbin150001,China)

Abstract:MicroRNA(miRNA) is a class of 22 nucleotides endogenous non-protein-coding small molecule RNA,which regulates gene expression after transcription through splicing and translation of the target mRNA inhibition.miRNA has multiple targets,and is involved in the expression regulation of at least about 1/3 human protein,and participates in biological behaviors including the regulation of cell differentiation,apoptosis,tumor formation,and immune response.In recent years,research shows that miRNA is essential to the regulation of gene expression of nonalcoholic fatty liver disease,lipid formation and storage.

Key words:MicroRNA; Nonalcoholic fatty hepatitis; Nonalcoholic fatty liver disease; Metabolic syndrome

收稿日期：2014-11-03修回日期：2015-01-28編輯：相丹峰

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.16.008

中圖分類號(hào)：R58

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1006-2084(2015)16-2901-03