湯新躍

(廣東省第二人民醫(yī)院,廣東 廣州 510317)

幽門螺桿菌感染性胃癌組織中Legumain、MMP-9的表達(dá)及其臨床意義

湯新躍

(廣東省第二人民醫(yī)院,廣東 廣州 510317)

目的 探討幽門螺桿菌(H.pylori)感染性胃癌組織中半胱氨酸蛋白酶(Legumain)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達(dá)情況及其臨床意義。方法 選取手術(shù)切除胃癌組織標(biāo)本109例，采用Warthin-Starry銀染色法檢測H.pylori感染情況，根據(jù)其H.pylori感染情況分為H.pylori陽性組59例和H.pylori陰性組50例，同時(shí)選取癌旁正常胃組織標(biāo)本55例作為對照組，采用免疫組化方法檢測各組Legumain、MMP-9表達(dá)情況。結(jié)果 胃癌組織Legumain陽性率、MMP9陽性率均明顯高于對照組(P均<0.05)。H.pylori陽性組Legumain、MMP-9表達(dá)均與患者性別、組織分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)；其中男性、組織學(xué)分化程度越低、臨床分期越高及合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者Legumain陽性表達(dá)率、MMP-9陽性表達(dá)率均明顯高于H.pylori陰性組(P均<0.05)；Legumain、MMP-9陽性表達(dá)率越高；經(jīng)Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)：胃癌組織Legumain與MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.46，P<0.05)。結(jié)論 胃癌組織Legumain、MMP-9呈過度表達(dá)，其中H.pylori感染性胃癌組織Legumain、MMP-9陽性表達(dá)更顯著，且兩者表達(dá)與胃癌病情發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)，H.pylori感染可作為胃癌發(fā)生和發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。

胃癌；幽門螺菌感染；Legumain；MMP-9

幽門螺桿菌感染(H.pylori)在慢性胃炎、胃潰瘍、不典型增生、癌前病變和胃癌的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。半胱氨酸蛋白酶(Legumain)在結(jié)腸癌、乳腺癌等多數(shù)惡性腫瘤組織中呈過表達(dá)，Legumain的表達(dá)在癌癥患者的臨床預(yù)后中具有重要的意義，在惡性腫瘤發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用[1]?；|(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)可促進(jìn)腫瘤血管形成和細(xì)胞外基質(zhì)降解，而二者在惡性腫瘤轉(zhuǎn)移浸潤中具有重要的臨床意義[2]。但關(guān)于MMP-9、Legumain在H.pylori感染性胃癌組織中的表達(dá)及其意義的研究較少。故本研究探討了Legumain、MMP-9在H.pylori感染性胃癌組織中的表達(dá)情況及其意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 收集我院2011年1月—2012年6月手術(shù)切除胃癌組織標(biāo)本109例和距胃癌組織邊緣>5 cm的癌旁正常胃組織55例(對照組)，全部患者的臨床資料均來自院內(nèi)病歷檔案記錄，術(shù)前未經(jīng)放療、化療和免疫治療等輔助治療，術(shù)后經(jīng)病理組織檢查符合胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。109例胃癌患者男75例，女34例；年齡35～88(63.87±12.02)歲；組織高分化22例，中分化45例，低分化42例，TNM臨床分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期36例，Ⅲ期42例，Ⅳ期19例；根據(jù)H.pylori感染情況(Warthin-Starry銀染色法測定)分為2組:H.pylori陽性組59例，男42例，女17例;年齡(64.07±13.01)歲；組織高分化12例，中分化25例，低分化22例；TNM臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期28例，Ⅲ+Ⅳ期31例。H.pylori陰性組50例，男33例，女17例；年齡(62.99±12.87)歲；組織高分化10例，中分化20例，低分化20例；TNM臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期20例，Ⅲ+Ⅳ期30例。對照組55例，男35例，女20例；年齡(61.54±10.34)歲；3組在性別、年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，具有可比性。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)和研究對象的知情同意。

1.2 方法 全部組織標(biāo)本經(jīng)4%甲醛固定，石蠟常規(guī)包埋，連續(xù)行4 μm厚度的組織切片，組織切片脫蠟脫水后給予pH6.0，0.01 mmol/L枸櫞酸鈉微波2 min，以達(dá)到抗原修復(fù)之目的。采用3%雙氧水常溫下孵育10 min，降低過氧化物酶活性，5%牛血清白蛋白常溫封閉1 h，滴加小鼠抗人Legumain單克隆抗體(1∶50,購自Santa Cruz公司)或兔抗人MMP-9多克隆抗體(1∶50,,購自Santa Cruz公司)，滴加PBS緩沖液作為陰性對照，低溫環(huán)境下孵育過夜，再滴加HRP(Horseradish Peroxidase)標(biāo)記羊抗小鼠二抗(購自Santa Cruz公司)，室溫環(huán)境孵育1 h，DAB(3，3-diaminobenzidine)顯色劑(顯色劑盒購自北京康威生物公司)顯色，HE復(fù)染后脫水透明，樹膠封片。

1.3 陽性結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) Legumain、MMP-9陽性表達(dá)以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒為標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)選取3個(gè)高倍鏡視野下細(xì)胞數(shù)目和陽性細(xì)胞數(shù)目，計(jì)算陽性細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞數(shù)目的比值。比值≥50%為Legumain陽性，<50%為Legumain陰性；比值≥30%為MMP-9陽性，<30%為MMP-9陰性。

2 結(jié) 果

2.1 各組Legumain、MMP-9表達(dá)情況 H.pylori陽性組Legumain和MMP-9陽性表達(dá)率明顯高于H.pylori陰性組和對照組(P均<0.05)，H.pylori陰性組明顯高于對照組(P均<0.05)，見表1。Legumain、MMP-9在胃癌組織中免疫組化檢測表達(dá)情況見圖1和圖2。

表1 3組Legumain、MMP-9表達(dá)情況 例(%)

注：①與對照組比較，P<0.05;②與H.pylori陰性組比較，P<0.05。

圖1 胃癌組織Legumain表達(dá)的情況(×400)

圖2 胃癌組織MMP-9表達(dá)情況(×400)

2.2 Legumain、MMP-9的表達(dá)與臨床相關(guān)因素分析 胃癌組織Legumain陽性率為64.22%(70/109)，胃癌組織MMP-9陽性率為86.24%(94/109)。Legumain、MMP-9的表達(dá)與患者的性別、組織分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，表現(xiàn)為男性、組織分化程度越低、臨床分期越高及合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者胃癌組織Legumain、MMP9陽性表達(dá)率越高，見表2。

2.3 胃癌組織Legumain與MMP-9表達(dá)的關(guān)系 胃癌組織Legumain與MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.46，P<0.05)，見表3。

3 討 論

胃癌是常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其中我國胃癌發(fā)生呈明顯年輕化傾向。胃癌病死率高，臨床預(yù)后差，主要與胃癌的轉(zhuǎn)移、侵襲相關(guān)。進(jìn)展期胃癌的生長較快，臨床發(fā)現(xiàn)的胃癌患者多處于中晚期，此類患者的遠(yuǎn)期生存率極低。隨著對H.pylori的深入研究發(fā)現(xiàn)，H.pylori在不利于自身生長的胃液中引起細(xì)胞壁缺陷，增加對宿主細(xì)胞的黏附能力，避免對機(jī)體免疫攻擊，在人體內(nèi)長期存在并導(dǎo)致胃黏膜的慢性損傷，甚至形成持續(xù)性炎癥性反應(yīng)，增加胃部惡性腫瘤的發(fā)生[4]。Wang等[5]報(bào)道，H.pylori感染性胃癌的檢出率明顯高于H.pylori 感染性胃部良性病變，提示H.pylori在機(jī)體內(nèi)長期生長可能與胃癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。于金林等[6]研究亦表明，H.pylori通過長期對胃黏膜細(xì)胞DNA破壞加重了胃癌的病情程度，且長期存在的H.pylori相關(guān)性感染加重了胃黏膜炎癥，使上皮細(xì)胞增生能力明顯增強(qiáng)，甚至出現(xiàn)不典型增生等癌前病變預(yù)兆[6]。因此，H.pylori在胃癌的發(fā)生和發(fā)展中具有重要意義。

表2 Legumain、MMP-9的表達(dá)與臨床病理因素關(guān)系

表3 胃癌組織Legumain與MMP-9表達(dá)的關(guān)系 例

MMP-9是MMP家族中分子質(zhì)量較大的細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶，活性MMP-9具有產(chǎn)生膠原酶的功能，可破壞腫瘤及其腫瘤附近的膠原蛋白，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向缺乏基底膜的周圍組織轉(zhuǎn)移、浸潤，促進(jìn)了腫瘤的進(jìn)展[7-8]。同時(shí)其可促進(jìn)腫瘤新生血管形成，加重腫瘤細(xì)胞的生長繁殖，加重疾病的病情程度[9]。Legumain是由腫瘤細(xì)胞及其巨噬細(xì)胞表達(dá)，在多數(shù)腫瘤中呈陽性表達(dá)，但在正常組織中呈低表達(dá)，提示Legumain在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中具有重要的臨床意義[10-11]。Legumain本質(zhì)是蛋白酶，其中通過直接或間接作用于MMP-9，將MMP-9無活性蛋白酶形式逐漸向具有降低細(xì)胞外基質(zhì)活性的MMP-9形式轉(zhuǎn)變，從而發(fā)揮增加腫瘤轉(zhuǎn)移程度的生物作用[12]。因此，在Legumain因子的靶向抗腫瘤細(xì)胞治療中，通過去除腫瘤細(xì)胞中的Legumain可有效降低腫瘤細(xì)胞生長繁殖及其侵襲轉(zhuǎn)移能力[18]。

本研究結(jié)果顯示，胃癌組織Legumain和MMP-9陽性率均明顯高于癌旁正常胃黏膜組織，其中H.pylori陽性胃癌組織二者陽性表達(dá)率明顯高于H.pylori陰性胃癌組織，提示Legumain、MMP-9在H.pylori感染性胃癌組織中呈高表達(dá)，且明顯高于H.pylori陰性胃癌組織和癌旁正常胃黏膜組織。Legumain、MMP-9表達(dá)均與患者性別、組織分化程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，表現(xiàn)為男性患者、組織分化程度越低、臨床分期越高及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌組織Legumain、MMP-9陽性表達(dá)率越高，提示胃癌越嚴(yán)重，兩者表達(dá)程度越高，與文獻(xiàn)[14-15]報(bào)道結(jié)果相一致；經(jīng)進(jìn)一步Pearson相關(guān)性分析還發(fā)現(xiàn)，胃癌組織Legumain與MMP-9表達(dá)呈正相關(guān)，證實(shí)兩者均可促進(jìn)胃癌組織的生長，促進(jìn)胃癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和浸潤。因此，H.pylori感染性胃癌組織的Legumain、MMP-9的陽性表達(dá)率更高，在預(yù)測胃癌病情的嚴(yán)重程度中具有重要的意義。

綜上所述，胃癌組織Legumain、MMP-9呈過度表達(dá)，其中H.pylori感染性胃癌組織Legumain、MMP-9陽性表達(dá)更顯著，且兩者表達(dá)與胃癌病情發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)，H.pylroi感染可作為胃癌發(fā)生和發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素之一。

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The express of Legumain, MMP9 in Helicobacter pylori infective gastric carcinoma tissue and its clinical significance

TANG Xinyue

(Guangdong NO.2 Provincial People’s Hospital, Guangzhou 510317, Guangdong, China)

Objective It is to observe the express of Legumain, MMP9 of Helicobacter pylori infective gastric cancer, and analyze the clinical significance. Methods 109 cases of gastric cancer tissue were collected to detect Helicobacter pylori (H.pylori) infection by Warthin-Starry silver staining method, and were divided into H.pylori positive group (n=59) and H.pylori positive group (n=50) according to H.pylori infection. 55 cases of normal gastric tissue were selected as control group at the same time. The expressions of Legumain, MMP9 were detected by immunohistochemistry for all cases. Results The positive expression rate of Legumain and MMP-9 in gastric cancer tissue were significantly higher than that of control group (allP<0.05), while the positive expression rate of Legumain and MMP-9 in H.pylori positive group were significantly higher than those in H.pylori negative group (allP<0.05). The expression of Legumain and MMP-9 were associated with gender, histological differentiation, clinical stage and lymph node metastasis, which of Male, histological differentiation degree of lower, clinical stage of higher and lymph node metastasis with higher positive expression rate of Legumain and MMP-9. Pearson correlation analysis showed that the Legumain express in gastric cancer was positively correlated with MMP-9 express in gastric cancer (r=0.46,P<0.05). Conclusion Legumain, MMP-9 are highly express in gastric cancer, and both positive express are higher in H.pylori infective gastric cancer, and are closely related to the occurrence and development of gastric cancer. H.pylori infection can be used as one of the independent risk factors for the occurrence and development of gastric cancer.

gastric cancer; helicobacter pylori; Legumain; MMP-9

湯新躍，男，主治醫(yī)師，主要從事臨床常見、多發(fā)腫瘤的綜合診治。

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.12.006

R735.2

A

1008-8849(2015)12-1270-04

2014-12-25