張美華 徐清芳 楊敏

實時熒光定量PCR 檢測對HCV抗體弱陽性標本的確認價值

張美華 徐清芳 楊敏

目的 探討和分析實時熒光定量聚合酶鏈式反應(PCR) 檢測對丙型肝炎病毒(HCV)抗體弱陽性標本的確認價值。方法 50例谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)指標正常, 無惡心、嘔吐、乏力、發(fā)熱等臨床癥狀, 但行胃腸組織檢查的患者。使用熒光劑定量PCR對其HCV抗體弱陽性進行檢測分析。結果 對于ALT指標正常且抗陽性在1～20 S/CO的患者行熒光劑定量PCR檢測的過程中, 發(fā)現(xiàn)2例(4%)患者檢測結果高于最低檢測值。對患者使用熒光定量PCR的方法對于HCV陽性血清進行檢測, 并且對于ALT指標正常的患者, 行HCV抗體檢測, 發(fā)現(xiàn)3例(6%)丙肝陰性抗體。結論 對于HCV抗體弱陽性的檢測,雖然在一定程度上存在局限性, 對于HCV-RNA含量較低的情況下存在一定的失誤性, 但能夠較為準確的對患者HCV抗體弱陽性進行檢測。具有較高的臨床醫(yī)學價值, 值得在HCV抗體檢測領域得到進一步的完善、推廣和應用。

熒光定量聚合酶鏈式反應；檢測；丙型肝炎病毒抗體；谷丙轉(zhuǎn)氨酶

在當今社會生活中, 雖然人們的生活水平得到了一定的提升, 但由于人們對于生活質(zhì)量的忽視, 丙型肝炎在生活中出現(xiàn)的頻率也越來越高。丙型肝炎作為一種傳染性極強的疾病, 在人體內(nèi)部變異性也極強, 現(xiàn)在醫(yī)學中還未見對其特效藥, 這就在很大程度上要求人們加強對于HCV的預防, 為了很好的對其預防, 應該提高HCV的檢測準確度［1］。在現(xiàn)代醫(yī)學研究中, 對于HCV的診斷多為綜合診斷, 在臨床醫(yī)學中, HCV抗體弱陽性的檢測多采用熒光定量的方法, 在傳統(tǒng)醫(yī)學中對于HCV的檢測上, 熒光定量PCR的使用作出了卓越的貢獻, 大大提高了HCV抗體弱陽性的檢測精準度, 具有較為深遠的意義?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 研究對象選取本院2009年4～11月收治50例ALT指標正常, 無惡心、嘔吐、乏力、發(fā)熱等臨床癥狀,但行胃腸組織檢查的患者。患者年齡45～63歲, 平均年齡(51.65±4.69)歲。

1.2 方法 由于患者胃腸功能較差, 在檢查前需要對HCV進行檢測, 使用熒光定量PCR的方式對于HCV-RNA陽性血清進行必要的檢測, 進而實行對于HCV抗體的檢測。定量熒光PCR檢測使用的儀器是由美國應用生物公司制造的PCR Prism7500型儀器, 使用由上海捷瑞生物工程有限公司生產(chǎn)的熒光定量檢測試劑盒。經(jīng)患者及其家屬知情同意后進行 HCV抗體檢測。

2 結果

對于ALT指標正常且抗陽性在1～20 S/CO的患者行熒光定量PCR檢測的過程中, 發(fā)現(xiàn)2例(4%)患者檢測結果高于最低檢測值。對患者使用熒光定量PCR的方法對于HCV陽性血清進行檢測, 并且對于ALT 指標正常的患者, 行HCV抗體檢測, 發(fā)現(xiàn)3例(6%)丙肝陰性抗體。雖檢測結果個別存在失誤性, 但對于絕大多數(shù)HCV抗體的檢測都較為準確。

3 討論

隨著時代的進步和發(fā)展, HCV抗體的檢測技術由常規(guī)PCR檢測發(fā)展為現(xiàn)今熒光定量PCR檢測［2］。新興的PCR檢測技術相較于常規(guī)PCR檢測而言, 存在極大的檢測優(yōu)勢, 使其檢測精準度得到了大幅度的提升。具有特異性強、操作簡便、靈敏度極高等各方面優(yōu)點, 已然成為了國內(nèi)外對于HCV抗體檢測的生物研究活動中的主流技術［3］。實時熒光定量PCR檢測系統(tǒng), 主要是充分的利用了熒光信號隨著PCR產(chǎn)物增加而增加的技術原理。在PCR產(chǎn)物不斷增加和擴大的過程中, 對于反應系統(tǒng)中有關熒光信號的變化進行有效和精準的檢測, 是實時熒光定量PCR檢測的核心內(nèi)容。根據(jù)在反應系統(tǒng)中的熒光信號在不斷的變化過程中得出的平均值以及其平均標準差, 并且在99.7%的置信度的具體情況下所計算出來的熒光值數(shù)據(jù)在定量熒光PCR進行HCV檢測過程中顯得十分重要。在HCV抗體檢測過程中選取實時定量熒光PCR技術與傳統(tǒng)常規(guī)的PCR技術而言, 能夠在很大程度上增加抗體定量檢測的精準度［4］。

在試驗過程中, 選取的50例ALT指標正常, 并無惡心、嘔吐、乏力、發(fā)熱反應的患者使用實時熒光定量PCR對其HCV-RNA陽性血清進行精確的檢測和分析。存在2例(4%)患者檢測出HCV-RNA的含量高于最低檢出限, 48例(96%)患者見檢測低于最低檢出限, 為陰性。造成這種現(xiàn)象的原因可能是既往感染帶來的免疫反應, 由于患者自身機能抵抗力強, 體內(nèi)病毒少量存在, 未出現(xiàn)任何臨床反應, 病毒逐步消失, 但抗體仍然存在于體內(nèi)。由國內(nèi)外學者研究和查閱相關文獻得知, 熒光定量PCR檢測的敏感度極強, 降低了檢測過程中RNA的耗費。在一定意義上, 熒光定量PCR檢測方法作為只用于被確診為攜帶HCV的患者的好辦法, 在醫(yī)學研究上也做出了卓越貢獻。另外在檢測結果中, 存在3例(6%)患者檢測結果表明HCV抗體呈陰性, 其余47例(94%)患者在檢測后得出的HCV抗體具體數(shù)值均在80～150 S/CO的正常范圍之內(nèi)。由于試驗選取的患者具體情況存在一定的差異,并且選取患者例數(shù)有限, 不排除部分患者HCV-RNA血清呈陽性但并未產(chǎn)生HCV抗體的情況。

綜上所述, 實時熒光定量PCR檢測技術在國內(nèi)外HCV抗體弱陽性的檢測領域發(fā)展尤為迅速, 也在不斷的完善。但在HCV抗體弱陽性的檢測過程中, 還需對HCV-RNA進行一定的檢測, 并根據(jù)患者的臨床表現(xiàn)對丙肝抗體病毒進行綜合評定。而實時熒光定量PCR檢測方法不失為一種好辦法,值得得到廣泛應用。

［1］ 范文勇.實時熒光定量-PCR和酶聯(lián)免疫吸附法檢測巨細胞病毒-IgM抗體的比較.中國醫(yī)藥導報, 2011, 8(2):83-84.

［2］ 劉義慶, 鄒建文, 田文君, 等.化學發(fā)光免疫分析檢測抗-HCV抗體與HCV-RNA的關聯(lián)研究.國際檢驗醫(yī)學雜志, 2014, 35(13): 1749-1750.

［3］ 邵芳.HCV抗原、HCV抗體及HCV-RNA聯(lián)合檢測與ALT的相關性及其臨床意義.中國中西醫(yī)結合消化雜志, 2014, 22(2): 80-82.

［4］ 姚仁南, 陳復興, 陳玲, 等.化學發(fā)光免疫分析法檢測獻血者HCV抗體的應用評價.中華全科醫(yī)學, 2011, 9(3):450-453.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.24.019

2015-01-20］

463000 駐馬店市第一人民醫(yī)院檢驗科(張美華徐清芳)；駐馬店市第四人民醫(yī)院檢驗科(楊敏)