方 菲 柯方妮

（中山醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院東山院區(qū)檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510080）

梅毒檢測(cè)中TRUST和TPPA應(yīng)用價(jià)值的分析

方 菲 柯方妮

（中山醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院東山院區(qū)檢驗(yàn)科，廣東 廣州 510080）

目的 對(duì)梅毒甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)（TPPA）檢測(cè)的臨床價(jià)值進(jìn)行分析。方法 用TRUST和TPPA檢測(cè)1221份血清標(biāo)本，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果 658份血清標(biāo)本中，TRUST檢出陽性45份（6.84%）。563份血清標(biāo)本中TPPA檢出陽性69份（12.26%）。二組之間陽性檢出率有顯著性差異（P＜0.005）。69份TPPA陽性血清標(biāo)本中，用TRUST法檢測(cè)，其中陽性的有21份（30.44%），經(jīng)治療后第一次復(fù)查TRUST仍為陽性者9份（13.04%），二次復(fù)查TRUST仍為陽性者2份（2.89%），失訪10份（14.49%）。結(jié)論 TRUST法檢測(cè)適用于梅毒篩查，隨訪療效，判斷復(fù)發(fā)或再次感染。TPPA法檢測(cè)準(zhǔn)確可靠，適用于確診梅毒。二法聯(lián)合應(yīng)用是一種理想組合，對(duì)梅毒的診斷可以減少漏診誤診，提高確診率。對(duì)于梅毒的有效防治，監(jiān)測(cè)隨訪有重大意義。

梅毒；梅毒螺旋體；TRUST；TPPA

梅毒是由梅毒螺旋體（treponema pallidum）引起的一種全身性損害的性病。其臨床表現(xiàn)復(fù)雜呈多樣性，病程長(zhǎng)，危害大。近年來我國(guó)梅毒發(fā)患者數(shù)呈急劇性上升趨勢(shì)。有報(bào)道指出［1］，在梅毒陽性檢出者中，隱性梅毒數(shù)量最多，分布較廣，增幅明顯。梅毒陽性檢出者幾乎覆蓋了所有的科室和所有的年齡段。梅毒檢測(cè)是防治監(jiān)測(cè)該病重要而有效手段之一。因此，有必要對(duì)門診可疑患者和住院患者進(jìn)行梅毒篩查。目前梅毒檢測(cè)有多種方法。一類是檢測(cè)非特異性抗體方法。如快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)RPR（rapid plasma regain），不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)USR（unheated serum regain），甲苯胺紅不加熱血清實(shí)驗(yàn)TRUST（toluidine red unheated serum test），性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)VDRL（renereal disease research laboratory test）等。另一類是檢測(cè)特異性抗體方法。如梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)TPHA（treponema pallidum hemagglutination assay），梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)TPPA（treponema pallidum particle agglutination assay），酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)ELISA（engyme linked immunosorbent assay）等。本文試以TRUST和TPPA組合聯(lián)用，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，探討其特異性、敏感性和互補(bǔ)性在臨床合理應(yīng)用中的價(jià)值。

1　材料與方法

1.1一般資料：收集2013年1至11月門診住院患者血清標(biāo)本5007份。其中男性1771份，女性3236份，年齡1～97歲。用化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)3786份，檢出梅毒陽性76份，陽性檢出率2.0%。用TRUST法檢測(cè)658份，檢出陽性45份，陽性檢出率6.84%。用TPPA法檢測(cè)563份，檢出梅毒陽性69份，陽性檢出率12.26%。

1.2試劑和儀器：TRUST檢測(cè)采用上海榮盛生物技術(shù)有限公司試劑盒。TPPA檢測(cè)采用日本富士瑞比歐株式會(huì)社試劑盒。

1.3檢測(cè)方法。TRUST：將50 μL患者血清與1滴TRUST試劑混合，按每分鐘100轉(zhuǎn)搖動(dòng)8 min，肉眼觀察結(jié)果，可見紅色凝聚物為陽性；TPPA：試劑中的致敏顆粒與患者血清中的梅毒螺旋體抗體（TP）進(jìn)行反應(yīng)發(fā)生凝集，由此可檢測(cè)出TP抗體。

1.4統(tǒng)計(jì)方法：TRUST和TPPA陽性檢出率用χ2檢驗(yàn)分析。

2　結(jié) 果

TRUST和TPPA陽性檢出率有顯著性差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。χ20.005（1）=7.88，χ2=10.51，P＜0.005。梅毒陽性檢出者的性別、年齡段和科室分布無特殊可比性。69份TPPA陽性檢出者，用TRUST作療效隨訪檢測(cè)，其中TRUST轉(zhuǎn)陰者48份（69.56%），隨訪一次TRUST仍為陽性者9份（13.04%），隨訪二次TRUST均為陽性者2份（2.89%），失訪10份（14.49%）。

3　討 論

人體感染梅毒螺旋體后，發(fā)生一系列血清免疫學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生并釋放出兩種抗體。一種是磷脂類物質(zhì)，黏附在螺旋體上，形成新的復(fù)合抗原。此種抗原可刺激機(jī)體6周后產(chǎn)的抗磷脂類的自身免疫性抗體，即非特異性抗體，也稱反應(yīng)素。另一種是直接針對(duì)梅毒螺旋體特異抗原的梅毒特異性抗體，主要成分是IgM和IgG，大約在感染4周后形成。

TRUST試驗(yàn)用于檢測(cè)反應(yīng)素，是VDRL試驗(yàn)的一種改良方法。用炭顆料作為指示物，用特制的白紙卡替代玻璃反應(yīng)板。所用的抗原是標(biāo)準(zhǔn)牛心肌脂抗原。血清不需要加熱滅活，節(jié)省了操作時(shí)間。肉眼可觀察試驗(yàn)結(jié)果，并可以保存。TRUST試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單快捷。經(jīng)治療后患者的TRUST滴度隨著病情好轉(zhuǎn)而下降或因療效不佳而反復(fù)?？诡愔|(zhì)抗體效價(jià)的消長(zhǎng)曲線與臨床病情癥狀的變化相關(guān)性較好［2］。因此，用TRUST檢測(cè)梅毒，不但可作為梅毒的篩查，還可以用于療效的隨訪觀察，判斷復(fù)發(fā)或再次感染。TRUST試驗(yàn)比ELISA和TPPA有更長(zhǎng)的檢測(cè)觀察窗口期。缺點(diǎn)是某些自身免疫性疾病也有磷脂類物質(zhì)產(chǎn)生和消失，導(dǎo)致假陽性發(fā)生［3］。當(dāng)一至三期梅毒患者治療后，抗體隨之變化。有時(shí)TRUST陽性檢出率下降，又可以出現(xiàn)假陰性［4］。所以TRUST檢測(cè)要用TPPA檢測(cè)進(jìn)行復(fù)核確診。

TPPA試驗(yàn)用于檢測(cè)梅毒特異性抗體。該試驗(yàn)是TPHA試驗(yàn)的改良方法，可取代TPHA。在梅毒血細(xì)胞凝集試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以明膠顆粒為載體，吸附TP-Nichols株菌體抗原，克服了血細(xì)胞易自溶而造成的漏檢出弊端。TPPA檢測(cè)結(jié)果的穩(wěn)定性好，不易出現(xiàn)假陽性［5］。檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可作為臨床標(biāo)準(zhǔn)化的確診方法之一。已在國(guó)際上廣泛使用。患者抗梅毒治療后，梅毒抗原消失后很長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)IgG仍可通過記憶細(xì)胞作用繼續(xù)產(chǎn)生，甚至終身可在血清中檢出TPPA持續(xù)陽性。TPPA滴度變化與病情變化不一致表明TPPA試驗(yàn)不能作為評(píng)價(jià)療效或判斷復(fù)發(fā)或次感染的指標(biāo)。

ELISA是一種基于基因工程的特異性檢測(cè)技術(shù)［6］。采用雙抗原夾心法，同時(shí)檢測(cè)梅毒IgM和IgG混合特異抗體。用基因重組工程技術(shù)，在體外表達(dá)得到了梅毒相應(yīng)特異抗原，提高了ELISA檢測(cè)的靈敏度和特異度。在梅毒潛伏期產(chǎn)生的特異性抗體可被檢出。雖然對(duì)梅毒的早期診斷較好，但只能說明正在感染或曾經(jīng)感染。ELISA成本低，效率高，操作簡(jiǎn)單，但陽性時(shí)不能判斷梅毒的活動(dòng)性程度，也有假陽性發(fā)生［7］。因而不能作為現(xiàn)癥梅毒確診指標(biāo)，還須用TPPA檢測(cè)作確診。許多報(bào)告指出ELISA和TPPA二者相比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。二者均為高特異性，高敏感性的梅毒血清學(xué)診斷方法。

TPPA相對(duì)成本高，操作較復(fù)雜，耗時(shí)較長(zhǎng)。但準(zhǔn)確可靠，對(duì)早期梅毒檢出率也高，優(yōu)于ELISA，有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。本文認(rèn)為TRUST和TPPA是理想的檢測(cè)組合，二者的顯著性差異由此得到取長(zhǎng)補(bǔ)短。二者聯(lián)用對(duì)梅毒的篩查，診斷準(zhǔn)確可靠，同時(shí)達(dá)到跟蹤療效，判斷復(fù)發(fā)或再次感染的多項(xiàng)目的。上述臨床應(yīng)用范圍的復(fù)蓋，對(duì)梅毒的有效防治，隨訪監(jiān)測(cè)有很大的實(shí)用價(jià)值。

［1］王華，張洪為，李代渝，等.綜合醫(yī)院住院患者梅毒感染檢出情況分析［J］.中華皮膚性病學(xué)雜志，2011，25（8）：618.

［2］王光超.皮膚性病學(xué)［M］.3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：128.

［3］尹躍平.快速梅毒螺旋體抗體檢測(cè)試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室初步評(píng)價(jià)［J］.嶺南皮膚性病雜志，2009，16（1）：11-14.

［4］林耀堂.3種梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法臨床應(yīng)用結(jié)果的比較［J］.中國(guó)傷殘醫(yī)學(xué)，2013，21（9）：301-302.

［5］程艷杰.梅毒螺旋體血清學(xué)檢測(cè)方法的實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2005，19（8）：503-504.

［6］吳先玉.ELISA和TRUST兩種方法檢測(cè)梅毒結(jié)果分析［J］.中外醫(yī)學(xué)研究，2009，7（9）：176-179.

［7］張建平.三種梅毒血清試驗(yàn)方法學(xué)評(píng)價(jià)［J］.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，25（6）：14-15.

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1671-8194（2015）012-0096-02