血管內(nèi)皮生長因子含量表達與喉癌侵襲轉移相關性

蘇凱劉敩蔡郁孫立群

(吉林大學第二醫(yī)院，吉林長春130041)

摘要〔〕目的探討血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)含量變化與喉癌侵襲轉移的關系。方法應用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測68例喉癌患者血清VEGF含量與病理分級、臨床分期及區(qū)域淋巴結轉移等因素關系。結果喉癌轉移組和喉癌非轉移組病人血清中VEGF含量表達與正常對照組相比差異顯著(P<0.01)。結論VEGF含量檢測可以作為喉癌的復發(fā)和區(qū)域淋巴結轉移的客觀指標，動態(tài)監(jiān)測對于指導臨床治療有重要意義。

關鍵詞〔〕喉腫瘤；VEGF；ELISA

中圖分類號〔〕R735.34〔文獻標識碼〕A〔

通訊作者：蔡郁(1976- )，女，主管護師，主要從事頭頸腫瘤治療研究。

第一作者：蘇凱(1973-)，男，主管技師，主要從事頭頸腫瘤研究。

喉癌是頭頸部常見的惡性腫瘤，喉癌的局部復發(fā)、區(qū)域淋巴結轉移及遠端轉移是影響患者預后的主要因素〔1〕。因此，尋找與喉癌復發(fā)、轉移相關的腫瘤標志物對預測腫瘤的生物學行為以及指導治療有重要的臨床意義。本研究應用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測不同時期喉癌患者血清中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)含量變化，觀察其與喉癌侵襲轉移的相關性，旨在為喉癌的復發(fā)、轉移及預后判斷提供客觀指標。

1材料與方法

1.1對象68例喉癌病人血清由我院住院病人提供。均經(jīng)病理診斷喉鱗狀細胞癌，手術前后均進行采血，分離血清凍存。其中男45例，女23例，平均年齡56歲；隨機分為喉癌非轉移組40例，喉癌轉移組28例。根據(jù)美國抗癌協(xié)會第七版TNM分期，T116例，T224例，T318例，T410例；病理分級，Ⅰ級18例，Ⅱ級26例，Ⅲ級24例?？谷薞EGF試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司。取40例健康體檢人員為對照組。各組年齡性別無明顯差別。

1.2方法取-70℃冰箱凍存的人喉癌血清做1∶10倍稀釋。分別加入含有VEGF抗體的酶標板內(nèi)100μl，4復孔，置37℃5%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)反應60min，取出后磷酸鹽緩沖液(PBS)洗3次，5min/次。每孔內(nèi)加入酶標抗體工作液100μl，置37℃ 5%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)反應60min，取出后甩干，PBS洗3次，加入鄰苯二胺工作液100μl，避光保溫10min，每孔加入終止液50μl,立即于酶標儀492nm處測OD值，根據(jù)標準品OD值在半對數(shù)坐標紙上作圖。結果乘以稀釋倍數(shù)即為VEGF含量。

1.3統(tǒng)計學方法應用SPSS11.0軟件進行t檢驗。

2結果

2.1手術前后血清中VEGF含量比較與術前比較，術后VEGF含量水平明顯下降〔(489.7±16.2)ng/mlvs(261.4±9.6)ng/ml〕(P<0.01)。

2.2各組VEGF含量比較喉癌病人血清中VEGF總體水平高于正常對照組〔(236.8±6.9)ng/ml〕。但是喉癌轉移組VEGF含量〔(567.5±19.1)ng/ml〕明顯高于非轉移組〔(438.4±13.3)ng/ml〕(P<0.01)。

2.3喉癌病人血清VEGF含量表達與病理分級相關性分析呈正相關關系，即病理分級越高，VEGF含量隨之升高，Ⅰ級與Ⅱ級Ⅲ級相比〔(451.2±15.3)ng/ml，(495.5±13.8)ng/ml，(51.54±17.4)ng/ml〕差別顯著(P<0.05)，但Ⅱ級Ⅲ級相比無顯著差異。

2.4喉癌病人血清VEGF含量表達與臨床分期相關性T1T2兩組間VEGF含量水平〔(447.2±13.4)ng/ml，(468.2±16.2)ng/ml〕無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，而T1、T2兩組分別與T3、T4〔(521.6±16.8)ng/ml，(563.3±19.3)ng/ml〕相比差異顯著(P<0.05)。

3討論

近年來，喉癌治療技術有了很大的發(fā)展，但是單純手術治療效果仍難讓人滿意，局部復發(fā)及遠處轉移率較高〔2〕。因此，目前許多學者從腫瘤分子生物學角度對喉癌細胞因子進行了研究，發(fā)現(xiàn)喉癌組織中VEGF含量異常表達，與腫瘤侵襲復發(fā)轉移密切相關，腫瘤如果沒有新生血管的支持，當腫瘤體積達到1mm3時就會停止生長并發(fā)生退化〔3〕，所以抑制VEGF表達就可以阻止腫瘤生長。因為臨床分期是制定臨床決策的主要因素，臨床分期越高證明疾病的侵襲范圍就越廣〔4〕。所以VEGF含量檢測可以作為臨床分期的參考指標，為正確的臨床分期提供理論依據(jù)。本研究結果表明隨著病理分級的升高血清中VEGF含量亦升高。文獻報道〔5〕，喉癌組織類型和組織分化程度是決定腫瘤行為及預后關鍵因素,掌握組織病理學的特征，將有助于選擇早期篩查腫瘤標志物和有針對性的治療方案尤其重要。VEGF是血管內(nèi)皮細胞特異性生長因子，具有促進內(nèi)皮細胞增殖，提高血管通透性等生物學作用，是目前發(fā)現(xiàn)最重要的促進腫瘤血管生成因子，因此，通過血清VEGF水平表達監(jiān)測喉癌術后復發(fā)轉移的發(fā)展規(guī)律，為腫瘤抗血管生成治療帶來了新的思路，由于血清腫瘤標志物的檢測方法簡便、經(jīng)濟、快速無創(chuàng)、尤其對晚期腫瘤的診斷及療效的評估，預后判斷有較高的臨床實用價值。

4參考文獻

1李曉明，宋琦.喉癌治療后復發(fā)的外科手術治療〔J〕.中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2014；49(8)：701-3.

2黎學佳，葉進，莊士民,等.慢病毒介入的類表皮生長因子域基因沉默抑制喉癌Hep-2細胞增殖和細胞侵襲的研究〔J〕.中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2014;49(8)：643-8.

3ChenHH,ChairL,WangSQ,et al.Angiopoietin-2inhibitsthegrowthoftonguecarcinomawithoutaffectingexpressionofvascularendothelialgrowthfactor〔J〕.IntJOralMaxillofacSurq,2011;40(6):628-32.

4PerignyM,BairatiI,HarveyI,et al.Roleofimmunohistochemicaloverex-pressionofmatrixmetalloproteinasesMMP-2andMMP-11intheprogno-sisofdeathbyovariancancer〔J〕.AmJClinPathol,2008;129(2):226-31.

5E1-KenawyAel-M,LotfyM,E1-KottA,et al.Significanceofmatrixmetal-loproeinase9andCD34expressionsinesophagealcarcinoma;correlationwithDNAcontent〔J〕.JClinGastroenterol,2005;39(9):791-4.

〔2015-03-22修回〕

(編輯李相軍/滕欣航)