桑雷 孫世坤 陳冬金 陳巖峰 謝喜平 （福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 350013）

母牛妊娠早期診斷技術(shù)簡介

桑雷 孫世坤 陳冬金 陳巖峰 謝喜平 （福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 350013）

妊娠早期診斷技術(shù)能縮短母?？諔褧r間，是提高繁殖效率的手段，關(guān)系到養(yǎng)殖場 （戶）的切身利益。本文從診斷時間、診斷技術(shù)難度、診斷真確率、成本等方面比較分析直腸檢測、B超妊娠診斷、早孕因子、孕酮和妊娠相關(guān)蛋白免疫學(xué)診斷技術(shù)。

母牛；妊娠診斷；早期診斷；綜述

母牛的繁殖效率影響到奶業(yè)生產(chǎn)，決定了一個奶牛場是否盈利。母牛繁殖率是由產(chǎn)犢間隔時間決定的，其影響因素包括繁殖疾病造成的屢配不妊和空懷時間太長，目前常規(guī)方法對奶牛進行診斷一般要等到配種后的2～3月，而新技術(shù)的出現(xiàn)能有效的縮短時間[1]，提高生產(chǎn)效益，本文就目前的一些妊娠早期診斷技術(shù)進行介紹。

1 直腸檢查法

該種方法一般是在配種后兩月進行，技術(shù)員徒手或戴手套將手通過母牛肛門伸進直腸內(nèi)，隔著直腸觸摸子宮角、子宮中動脈和卵巢，依據(jù)手的觸覺判斷母牛是否懷胎及懷胎時間，該種技術(shù)優(yōu)點不需要任何設(shè)備，快捷簡便，準(zhǔn)確率高，目前廣大養(yǎng)殖戶和養(yǎng)殖小區(qū)大部分采用該種技術(shù)，然而直腸檢查也存在缺點：①操作技術(shù)不易掌握，配種員實際操作經(jīng)驗影響摸胎的準(zhǔn)確率；②母牛的懷胎時間長短影響判斷空懷與否的準(zhǔn)確率；③操作不當(dāng)易引起母牛間的交叉感染及母牛流產(chǎn)[2]。

2 B超妊娠法

應(yīng)用B超掃描可對母牛早期胚胎進行觀察，并根據(jù)其不同時期的圖像特征做出準(zhǔn)確妊娠診斷。B超的原理：通過向母牛機體發(fā)射2萬赫茲以上的超聲波，由于母牛各組織有聲學(xué)的特異差異，超聲波在兩種不同組織界面處發(fā)生反射、折射、散射、繞射、衰減以及聲源與接收器相對運動產(chǎn)生多普勒頻移等物理特性，應(yīng)用不同類型的B超儀接受這些反射、散射信號，顯示各種組織形態(tài)。

利用B超監(jiān)測胚胎及胎兒發(fā)育情況：配種后12～14d子宮出現(xiàn)不連續(xù)無反射小區(qū)，判斷子宮中出現(xiàn)胎水，為聚有液體的胚泡，不斷擴張；至20d，胚胎在子宮中啟動發(fā)育，胚泡中出現(xiàn)短直線狀配體；并于22d能監(jiān)測到胎心搏動等生命跡象；22～30d，B超檢測到子宮區(qū)域內(nèi)胎測出現(xiàn)明顯的囊胚和胚斑，此作為懷孕與否的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3,4]。賈國慧等對126頭奶牛配種后20～60d進行B超妊娠檢查發(fā)現(xiàn)，20～25d妊娠診斷準(zhǔn)確率較低，26～28d準(zhǔn)確率相對較高，29～31d妊娠準(zhǔn)確率能達到100%，同時還發(fā)現(xiàn)青年牛20～28dB超妊娠診斷準(zhǔn)確率好于經(jīng)產(chǎn)牛[5]。B超診斷的優(yōu)點在于能在活體實時影像觀察早孕的子宮及其中的發(fā)育胚胎，感覺直觀；對母牛機體無損傷性不會引起母牛間的交叉感染；判定母牛懷胎時間上早，能減少母牛的空懷時間，降低養(yǎng)殖成本。然而該種對操作人員的直腸檢查水平要求很高，母牛產(chǎn)科疾病對超聲妊娠診斷的陽性符合率有一定的影響，如胚胎死亡、胚胎吸收和流產(chǎn)、子宮肌瘤和積水等疾病[6]。

3 早孕因子檢測法

早孕因子檢測法 （Early pregnancy factor，EPF）是一種具有免疫抑制和生長因子特性的胚胎生長及存活所必需的分泌性蛋白，在胚胎著床前后數(shù)小時至數(shù)天內(nèi)可檢測到，是哺乳動物受精后最早在血清中檢測到的妊娠相關(guān)蛋白，是目前最早確認妊娠的生化標(biāo)志之一[7]。玫瑰花環(huán)抑制試驗檢測法（Rosette inhibition titre，RIT）是檢測EPT的經(jīng)典方法，但是存在實驗操作復(fù)雜、重復(fù)性差、判斷客觀性差等問題，因此該方法難以推廣。由于對早孕因子的化學(xué)本質(zhì)及免疫學(xué)效果研究未有突破性進展，一直未形成的快速、高效檢測早孕手段。

4 孕酮檢測法

孕酮 （Progesterone，P4）主要由黃體及胎盤產(chǎn)生。母牛性周期中孕酮水平呈規(guī)律性變化，發(fā)情期孕酮水平較低，黃體期孕酮水平較高，妊娠期孕酮水平一直維持在較高。1971年，Laing等采用放射性免疫技術(shù) （Radioimmunoassay，RIA）檢測發(fā)現(xiàn)發(fā)情期乳汁中孕酮濃度變化與直腸檢查卵巢的評估結(jié)果基本一致 （Milk Progesterone，MP4）[8]。 史遠剛等在母牛配后18～24d通過RIA技術(shù)檢測母牛乳汁中的孕酮濃度判斷配種效果，懷孕確診率達到90%以上，未孕確診率為100%[9]。鑒于孕酮-放免檢測法需要實驗設(shè)備昂貴，且具有放射性污染，在生產(chǎn)推廣具有一定的難度，孕酮-酶免法（EIA）則被應(yīng)用于配種效果檢測能通過顏色反應(yīng)判定孕酮濃度。楊國林等報道運用目視ELISA孕酮檢測法檢測乳樣只需30～45min判斷配種效果，19～23d早期妊娠診斷正確率為81.25%[10]。萬積成等報道采用膠體金技術(shù)研制了孕酮早孕診斷試紙，能在5min內(nèi)完成妊娠檢測，此種方法操作要求低，反應(yīng)迅速、易保存，成本低，但是這種方法無法準(zhǔn)確確定母牛是否妊娠，適用于妊娠初篩[11]。

5 妊娠相關(guān)糖蛋白測定

妊娠相關(guān)糖蛋白 （Pregnancy associated glycoproteins，PAG）又稱妊娠特異蛋白 B（Pregnancy specific protein B，PSPB），是妊娠母牛胎盤滋養(yǎng)層雙核細胞表達。研究表明，母牛妊娠后，外周血液中PAG濃度開始緩慢上升，妊娠22d達到2ng/mL以上，與空懷母牛體內(nèi)的PAG濃度差異顯著[12]?；谀概Ｈ焉锲赑AG的特點，目前檢測PAG主要采用放免法 （RIA）、酶免法 （ELISA）方法。放免法 （RIA）由于存在核污染等問題，在生產(chǎn)上不適合推廣應(yīng)用，目前只是作為實驗室的檢測手段。而基于此原理檢測母牛配種28d后PAG濃度的ELISA已被商業(yè)化開發(fā)，準(zhǔn)確率達到93%以上[13]。王建勇等2013年1～3月份對上海地區(qū)9個牧場3400個血樣進行檢測發(fā)現(xiàn)奶牛配后28～33d空懷檢出準(zhǔn)確率達到98%，對懷孕牛檢出準(zhǔn)確率達到94%[14]。

6 小結(jié)

妊娠早期診斷對母牛繁殖管理有著極其重要的意義，快速、準(zhǔn)確、簡便、低價是理想妊娠早期診斷方法必須具備的條件。目前大多數(shù)妊娠早期診斷方法只能具備其中一種或幾種條件，需要進一步的科研創(chuàng)新以研制出更優(yōu)化的診斷技術(shù)滿足生產(chǎn)。

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桑雷 （1981-），男，漢族，博士，助理研究員，從事草食動物遺傳育種與繁殖工作。