陳旅翼，解錦勃，蘭 洲，林淑華，胡 超，鄧旭坤，林親雄

(1中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢430074；2 湖北中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，武漢430065)

大麻藥總皂苷滴丸制備工藝及溶出度研究

陳旅翼1，解錦勃1，蘭 洲2，林淑華1，胡 超1，鄧旭坤1，林親雄1

(1中南民族大學(xué) 藥學(xué)院，武漢430074；2 湖北中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，武漢430065)

為確立大麻藥總皂苷滴丸的最佳成型工藝并考察其溶出度，以滴丸的成型率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)大麻藥滴丸基質(zhì)與冷卻劑的選擇、大麻藥與基質(zhì)的配比、滴制的溫度、滴距、滴速進(jìn)行了單因素分析，并在此基礎(chǔ)上以正交試驗(yàn)通過(guò)丸重差異、溶散時(shí)限和外觀質(zhì)量3個(gè)指標(biāo)對(duì)上述主要影響因素進(jìn)行了優(yōu)選，采用轉(zhuǎn)籃法和HPLC測(cè)定了其溶出度和含量.結(jié)果表明：大麻藥總皂苷滴丸的最佳工藝條件為B3A1C1D2，即藥物基質(zhì)質(zhì)量比為1∶4，PEG4000-PEG6000基質(zhì)質(zhì)量比為2∶1，滴制溫度為70℃，滴距為5 cm，此條件下滴丸各項(xiàng)指標(biāo)最好.說(shuō)明該工藝簡(jiǎn)便可行，評(píng)價(jià)指標(biāo)可靠合理，滴丸溶出度良好，符合2010年版中國(guó)藥典對(duì)滴丸制劑的要求.

大麻藥總皂苷；滴丸；制備工藝；正交試驗(yàn)；溶出度

大麻藥(DolichosfalcateKlein)為豆科鐮萹豆屬植物，藥用根莖，別名麻里麻、麻三段、豆葉百步還陽(yáng)等[1]，分布于我國(guó)云南、四川、甘肅等地，尤以云南為多.本品性辛、麻、溫，有毒，具有祛風(fēng)活血、止血止痛等功效.在云南民間主要用于骨折、跌打損傷、風(fēng)濕疼痛，治療外傷出血，能抗癌、利尿[2-4].

大麻藥總皂苷為其主要活性成分[5,6].皂苷類成分一般口服吸收較差，生物利用度低[7]，對(duì)胃腸道刺激性較大[8,9]，不適宜做成普通的散劑或片劑等.而滴丸具有制備設(shè)備簡(jiǎn)單、操作方便、工藝周期短、生產(chǎn)效率高、質(zhì)量穩(wěn)定、劑量準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，其服用量小、起效快、生物利用度高[10,11].本文采用固體分散技術(shù)將大麻藥制成滴丸，縮短了藥物的溶散時(shí)限，改善了口感，提高了生物利用度，并降低了胃腸道的刺激性.

1 材料與儀器

1.1 材料

PEG4000、PEG6000(天津市博迪化工有限公司)，二甲基硅油、液體石蠟、甘油(天津博迪化工股份有限公司)，菜籽油(多琦, 食用型, 湖北華飴木本油脂有限公司)，大麻總皂苷(自制, 批號(hào)20131025, 純度>60%)，大麻藥苷B(自制, 批號(hào)20120705,純度>98%).

1.2 儀器

分析天平(PL403, METTLER TOLEDO, 梅特勒托利多儀器)，智能藥物溶出試驗(yàn)儀(RCZ-6B3型, 上海楚柏實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司)，高效液相色譜儀(戴安Ultimate 3000分析型液相色譜儀)，Phecda C18色譜柱(漢邦科技，2.1 mm×150 mm, 3 μm)，高功率數(shù)控超聲波清洗器(KQ-400KDE型, 昆山市超聲儀器有限公司)，螺旋測(cè)微器(北京第二量具廠).

2 方法與結(jié)果

2.1 滴丸制備單因素分析

2.1.1 基質(zhì)的選擇

大麻藥總皂苷水溶性常溫下較小，熱水中較大.故選用水溶性較好的PEG類基質(zhì)來(lái)研制滴丸，以基質(zhì)種類和配比設(shè)計(jì)空白實(shí)驗(yàn)方案，以滴丸成型效果作為判定指標(biāo)，其他條件相同，結(jié)果見(jiàn)表1.由表1可知，當(dāng)PEG6000與PEG4000按質(zhì)量比為2∶1, 1∶1, 1∶2時(shí)滴丸成型效果較好，故選擇上述配比作為正交實(shí)驗(yàn)中因素A水平.

2.1.2 冷卻劑的選擇

以多琦菜籽油、液體石蠟和二甲基硅油為冷卻劑，其他條件相同，進(jìn)行滴丸劑的滴制.以滴丸沉降速度、外觀形狀為指標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)表2，由表2可見(jiàn)，多琦菜籽油為冷卻劑時(shí)滴丸外觀最圓整，故選用多琦菜籽油作為大麻總皂苷滴丸劑制備的冷卻劑.

2.1.3 藥物與基質(zhì)比例的篩選

稱取一定量的PEG6000和PEG4000于蒸發(fā)皿中，其中PEG6000和PEG4000質(zhì)量比分別為1∶1，1.5∶1.5，1∶2，1∶3 .再向蒸發(fā)皿中分別加入大麻藥總皂苷藥粉2, 1.5, 1, 1 g，使得藥物與基質(zhì)的質(zhì)量比分別為1∶1，1∶2，1∶3和1∶4，其他條件相同，考察各種配比藥液的融合情況、粘稠度和滴制難易程度，結(jié)果見(jiàn)表3.由表3可知，當(dāng)基質(zhì)與藥物質(zhì)量比小于2∶1時(shí)藥液很粘稠，難以融合，無(wú)法滴制，故確定基質(zhì)與藥物的最小質(zhì)量為2∶1，同時(shí)為了控制滴丸中基質(zhì)的含量，最大比例控制為4∶1，最終確定基質(zhì)與藥物的比例為2∶1, 3∶1, 4∶1作為B因素的3個(gè)水平.

2.1.4 藥液溫度、滴距、滴速的選擇

主藥與PEG6000、PEG4000 質(zhì)量比為1∶2∶1，冷凝液為多琦菜籽油，其他條件均一致，分別以滴制溫度(70, 80, 90 ℃)，滴距(3,5,7 cm)，滴速(20, 30, 40滴/min)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，以其成型率為考察指標(biāo).結(jié)果表明：滴制溫度、滴距對(duì)滴制效果影響較大，最佳溫度為80℃，最佳滴距為5 cm，而滴速對(duì)成型工藝研究影響不是很大.綜上最終確定滴速為30滴/min，以70, 80, 90 ℃的滴制溫度作為C因素的3個(gè)水平，以3, 5, 7 cm的滴距作為D因素的3個(gè)水平.

2.2 滴丸制備工藝研究

2.2.1 正交因素水平設(shè)計(jì)

選擇對(duì)滴丸成型工藝影響較大的4個(gè)因素，即PEG6000-PEG4000質(zhì)量比(A)、主藥與基質(zhì)質(zhì)量比(B)、滴制溫度(C)、滴距(D)，每個(gè)因素選擇3水平，采用L9(33)正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)滴丸成型工藝參數(shù)進(jìn)行研究.正交實(shí)驗(yàn)因素水平表設(shè)計(jì)見(jiàn)表4.

2.2.2 實(shí)驗(yàn)指標(biāo)計(jì)算

選取丸重差異、溶散時(shí)限和外觀評(píng)分3個(gè)指標(biāo)來(lái)考察滴丸制備工藝參數(shù).丸重差異：任取滴丸20粒，精密稱定每粒滴丸的重量，計(jì)算20粒滴丸的重量平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù). 溶散時(shí)限：任取滴丸6粒，按2010版《中國(guó)藥典》一部附錄XIIA崩解時(shí)限檢查方法中滴丸劑進(jìn)行檢查，記錄每粒滴丸的溶散時(shí)限，計(jì)算6粒滴丸溶散時(shí)限的平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù).外觀評(píng)分：以大小均一、色澤一致、圓整、成型率及相互不粘連為滿分10分，其中每項(xiàng)各占2分，逐項(xiàng)評(píng)分后再總分，計(jì)算3人評(píng)分的平均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù).

2.2.3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

正交9個(gè)實(shí)驗(yàn)所制的滴丸的外觀評(píng)分、溶散時(shí)限和丸重差異的結(jié)果見(jiàn)表5.

2.2.4 外觀評(píng)分結(jié)果分析

外觀評(píng)分的直觀分析結(jié)果見(jiàn)表6，4個(gè)因素的極差大小排序?yàn)锽>A>C>D.采用極差最小的D因素作為誤差項(xiàng)進(jìn)行方差分析，其他3個(gè)因素均不具備顯著性(p>0.05, 見(jiàn)表7),其中A1>A3>A2、B3>B2>B1、C1>C3>C2，滴距因素中以D1得分較高，故采用外觀評(píng)分作為指標(biāo)優(yōu)選的最佳工藝為B3A1C1D1，即藥物基質(zhì)質(zhì)量為1∶4，基質(zhì)質(zhì)量為2∶1，滴制溫度為70℃，滴距為3cm.

2.2.5 溶散時(shí)限結(jié)果分析

溶散時(shí)限的直觀分析結(jié)果見(jiàn)表 8，4個(gè)因素的極差大小排序?yàn)锳>D>B>C.采用極差最小的C因素作為誤差項(xiàng)進(jìn)行方差分析，B因素具有顯著性差異(p<0.05,見(jiàn)表9)，且B30.05)，其中A1

2.2.6 丸重差異結(jié)果分析

由丸重差異的直觀分析結(jié)果(表10)可見(jiàn)，4個(gè)因素的極差大小排序?yàn)锳>C>B>D.采用極差最小的D因素作為誤差項(xiàng)進(jìn)行方差分析，其他3個(gè)因素均不具有顯著性差異(p>0.05, 見(jiàn)表 11)，其中B3

2.2.7 滴丸制備工藝參數(shù)確定

以外觀評(píng)分、溶散時(shí)限、丸重差異為指標(biāo)優(yōu)選的最佳工藝分別為B3A1C1D1，B3A1C3D2，B3A1C2D3.藥物制劑過(guò)程須著重考慮藥效和成本兩個(gè)因素.考慮藥效，溶散時(shí)限對(duì)其影響較大，故滴距項(xiàng)選擇D2；節(jié)約成本，降低能耗考慮，滴制溫度選擇D1.故大麻藥總皂苷滴丸制備的最佳工藝確定為B3A1C1D2，即藥物基質(zhì)質(zhì)量比為1∶4，基質(zhì)質(zhì)量為2∶1，滴制溫度為70 ℃，滴制距離為5 cm.

2.2.8 滴丸制備工藝小試驗(yàn)證

按B3A1C1D2滴丸制備工藝參數(shù)制備了3批小試滴丸(批號(hào)1312181, 1312182, 1312183)，通過(guò)外觀評(píng)分、丸重差異和溶散時(shí)限指標(biāo)測(cè)試后證明該滴丸制備工藝穩(wěn)定可行.

2.3 滴丸溶出度考察

本品制備工藝研究表明，滴丸水溶性較好，丸重規(guī)格較小，考慮含量測(cè)定中進(jìn)樣濃度等因素，以每次服用量8粒為單位，選擇250 mL磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.4)為溶出介質(zhì)，每次取樣1 mL，進(jìn)行相關(guān)處理后測(cè)定溶出度，因大麻藥總皂苷主要藥效成分為大麻藥苷B，其純度為70%，故選擇測(cè)定大麻藥苷B含量來(lái)考察大麻藥總皂苷滴丸的溶出度.

2.3.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液制備

精密稱定100 mg大麻藥苷B，置于100 mL容量瓶中，加少量甲醇超聲溶解，再加甲醇定容，制備成濃度為1000 μg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液.

2.3.2 供試品配制

精密稱取12 mg磨碎的滴丸，溶于10 mL容量瓶中，配制成供試品溶液.

2.3.3 色譜條件

Phecda C18色譜柱(2.1 mm× 150 mm, 3 μm)，柱溫25℃，流動(dòng)相：A為0.1%乙酸乙腈溶液，B為0.1%乙酸溶液，梯度洗脫條件：0 ～16 min，A-B (30∶70→62∶38)；16～18 min，A-B (62∶38→30∶70)；18～20 min，A-B (30∶70)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為215 nm；流速0.3 mL·min-1.

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

將對(duì)照品儲(chǔ)備液，分別精密量取0.3, 0.5, 1, 1.2, 1.5, 2 mL定容至5 mL容量瓶中.吸取上述不同濃度的對(duì)照品溶液10 μL，進(jìn)HPLC得到對(duì)應(yīng)的峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制曲線.曲線方程為y=723.18x+2.3912，線性范圍60 ～ 400 μg/mL，相關(guān)系數(shù)r=0.9999，方程可用.

2.3.5 精密度試驗(yàn)

將濃度為200 μg/mL的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次， RSD為0.37 %，表明精密度良好.

2.3.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取供試品溶液連續(xù)進(jìn)樣6次， RSD為0.33 %，表明重復(fù)性良好.

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，過(guò)0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液上液相，進(jìn)樣量10 μL，分別在0, 1, 4, 8, 12, 24 h進(jìn)樣測(cè)定含量，供試品在24 h內(nèi)含量RSD為0.68 %，表明穩(wěn)定性良好.

2.3.8 加樣回收試驗(yàn)

精密稱取9份3 mg已磨碎滴丸，分別加入1.8, 2.2, 2.6 mL對(duì)照品各3份，溶于2.5 mL容量瓶中，平行操作9次，上液相檢測(cè)，每份溶液測(cè)定3次，結(jié)果顯示，3組平均回收率分別為103.2%,101.5%,101.3%，RSD為1.02%，符合試驗(yàn)要求.

2.3.9 含量測(cè)定

將3次重復(fù)工藝制備得到的滴丸磨碎，分別精密稱取約12 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解和定容，過(guò)0.45 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液上液相檢測(cè)大麻藥苷B的峰面積，每份溶液平行測(cè)定3次，算得平均值14.09%，RSD為0.45%，即滴丸中的大麻藥苷B含量為14.09%.

2.3.10 溶出度測(cè)定

按照中國(guó)藥典2010年版一部附錄溶出度測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定溶出度，平行檢測(cè)3批(1312181, 1312182, 1312183).以磷酸鹽緩沖溶液(pH=7.4)作為溶出介質(zhì)，維持溫度(37±0.5)℃，轉(zhuǎn)速(100±1) r/min，分別在5, 10,15,30,45,60 min取樣，同時(shí)立即補(bǔ)充等量新鮮介質(zhì)，試樣過(guò)0.45 μm微孔濾膜，續(xù)濾液上液相檢測(cè)大麻藥苷B峰面積，再按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算藥物的累積釋放量，結(jié)果見(jiàn)表12，表明滴丸體外溶出明顯加快，60 min內(nèi)滴丸累積釋放量達(dá)到95%，說(shuō)明該法制備的滴丸符合藥典的相關(guān)規(guī)定.

3 結(jié)論

(1) 大麻藥總皂苷滴丸的最佳工藝條件為：藥物基質(zhì)質(zhì)量為1∶4，基質(zhì)質(zhì)量為2∶1，滴制溫度為70℃，此條件下，滴丸各項(xiàng)指標(biāo)最好.該工藝簡(jiǎn)便可行，評(píng)價(jià)指標(biāo)可靠合理，滴丸成型性好，符合2010年版中國(guó)藥典對(duì)滴丸制劑的要求.

(2) 最佳工藝條件下所制備的滴丸平均重量為45 mg，其中大麻藥苷B含量達(dá)到14.09%，即每丸中含有6.3 mg大麻藥苷B.已建立的色譜方法能滿足對(duì)大麻藥總皂苷滴丸中大麻藥苷B的含量測(cè)定要求.

(3) 溶出度實(shí)驗(yàn)表明：在磷酸緩沖鹽(pH=7.4)的條件下，有較好的溶出速率，說(shuō)明大麻藥總皂苷滴丸在正常腸道內(nèi)的溶出良好.

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Study on the Preparation Process and Dissolution Rate of Dropping
Pills of Total Saponin inDolichosfalcateKlein

Chen Lüyi1, Xie Jingbo1, Lan Zhou2, Lin Shuhua1, Hu Chao1, Deng Xukun1, Lin Qinxiong1

(1 College of Pharmacy, South-Central University for Nationalities, Wuhan 430074, China；2 College of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 4300765, China)

To investigate the optimum preparation process and the dissolution rate of the dropping pills of total saponin inDolichosfalcateKlein, the briquetting rate of the dropping pills was used to evaluate the various processing factors, such as the choice of substrate and refrigerant, the proportion of substrate to drug, the processing temperature, the dropping distance and dropping speed. The preparation process was optimized according to the pill weight variation, the dissolution time limit, and the pill′s appearance via an orthogonal test. The dissolubility and the content of dropping pills was also determined by rotating basket and HPLC method. The results indicated that the optimum preparation process wasB3A1C1D2, viz., a proportion of substrate to drug of 1∶4, a proportion of PEG4000 to PEG6000 of 2∶1, a processing temperature of 70°C, and a dropping distance of 5 cm. The technique was simple and reproducible, and the evaluation indexes were reliable and reasonable. The dropping pill thus prepared fully met the requirements for dropping pill as described in the 2010 edition of China Pharmacopoeia with good dissolution.

total saponin inDolichosfalcateKlein; dropping pills; preparation process; orthogonal test; dissolution rate

2014-05-30

陳旅翼(1983-)，男，講師，博士，研究方向：有毒民族藥物，E-mail：clyhappy05@163.com

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81303284，81403157)；武漢市青年科技晨光計(jì)劃資助項(xiàng)目(2015070404010183)；湖北省自科基金創(chuàng)新群體資助項(xiàng)目(2013CFA013)

R283

A

1672-4321(2015)04-0053-05