朱潔 王辛 馬茜 王愛紅

急性腦缺血大鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化及其與腦梗死體積的相關(guān)性

朱潔 王辛 馬茜 王愛紅

腦缺血；T淋巴細(xì)胞亞群；腦梗死體積；外周免疫抑制

腦組織長期缺血缺氧會導(dǎo)致腦組織損傷。腦卒中不僅影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)，亦會對外周免疫系統(tǒng)產(chǎn)生影響。腦卒中誘導(dǎo)的外周免疫抑制綜合征(stroke-induced immunodeficiency syndrome，SIDS)主要表現(xiàn)為外周血T淋巴細(xì)胞免疫功能下降[1]。腦缺血后外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平與腦組織損傷程度是否具有相關(guān)性目前研究尚少。本研究擬測定腦缺血大鼠腦梗死面積百分比、神經(jīng)功能評分、外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平，并對其相關(guān)性進(jìn)行初步探討。

1 材料和方法

1.1 材料 雄性SD大鼠23只，體質(zhì)量280～320 g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供〔合格證編號：SCXK(浙)2008-0033〕，自由飲水和進(jìn)食。 2，3，5-三苯基氯化四氮唑(2, 3,5-triphenyltetrazolium chloride，TTC；美國Sigma公司)；Anti-rat CD3(APC；美國eBioscience)，Anti-rat CD4/CD8(FITC/PE；美國Biolegend)；流式細(xì)胞儀(FC500MPL，美國Beckman)。

1.2 方法 大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組和模型組，每組10只。模型組參照Longa等[2]線栓法制作右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞模型，假手術(shù)組只分離血管，不插線栓，其余步驟同模型組。模型組術(shù)后清醒時(shí)評分為0分和4分的大鼠為造模不成功，予以剔除，剔除后用相同方法造模補(bǔ)足，確保造模成功大鼠10只入組。分別于術(shù)后清醒時(shí)、術(shù)后24 h、72 h采用Bederson等[3]的5級4分法評定大鼠神經(jīng)功能缺損情況；分別于術(shù)后24 h、72 h， 經(jīng)大鼠眼眶采血，采用流式細(xì)胞儀檢測外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平變化情況；于術(shù)后72 h，將大鼠斷頭取腦，采用TTC染色觀察腦梗死灶大小，并用腦梗死面積百分比表示，腦梗死面積百分比=(梗死面積/對側(cè)半腦面積)×100%。對模型組腦梗死面積百分比與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性，神經(jīng)功能評分與腦梗死面積百分比以及神經(jīng)功能評分與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析。腦梗死面積百分比、外周血CD3+、CD4+、CD8+水平及CD4+/CD8+比值采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用兩組獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)；神經(jīng)功能評分以中位數(shù)(上、下四分位數(shù))表示，組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。神經(jīng)功能評分與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性及神經(jīng)功能評分與腦梗死面積百分比的相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析；腦梗死面積百分比與T淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腦梗死面積百分比、神經(jīng)功能評分及外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化 假手術(shù)組無梗死灶和神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)。模型組術(shù)后出現(xiàn)了梗死灶和神經(jīng)功能缺損表現(xiàn)，術(shù)后72 h，模型組腦梗死面積百分比為(18.19±8.10)%；模型組神經(jīng)功能評分術(shù)后24 h為2(2，2)，術(shù)后72 h為2(1，2)。

術(shù)后24 h模型組外周血CD4+水平和CD4+/CD8+比值較假手術(shù)組明顯下降(分別P<0.05，P<0.01)；CD3+水平減低，CD8+水平升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)；術(shù)后72 h模型組外周血CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+比值較假手術(shù)組明顯下降，CD8+水平明顯上升(均P<0.01)(表1)。

2.2 模型組外周血T淋巴細(xì)胞亞群、神經(jīng)功能評分及腦梗死面積百分比的相關(guān)性 術(shù)后72 h，神經(jīng)功能評分與CD8+水平呈明顯正相關(guān)(r=0.646，P=0.044)，與CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+比值無明顯相關(guān)性(r=0.114，P=0.754；r=-0.610，P=0.061；r=-0.553，P=0.112)；神經(jīng)功能評分與腦梗死面積百分比呈明顯正相關(guān)(r=0.646，P=0.044)； 腦梗死面積百分比與CD8+水平呈明顯正相關(guān)(r=0.934，P=0.000)，與CD4+水平及CD4+/CD8+比值呈明顯負(fù)相關(guān)(分別r=-0.974、r=-0.959，均P=0.000)，與CD3+水平無明顯相關(guān)性(r=0.216，P=0.549)。

3 討論

既往研究顯示，SIDS可能是機(jī)體保護(hù)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的策略[4]，但SIDS卻增加了感染的發(fā)生率，而感染是導(dǎo)致腦卒中患者死亡的主要并發(fā)癥[5]。SIDS主要表現(xiàn)為外周血T淋巴細(xì)胞免疫功能下降[1]。CD4+和CD8+T細(xì)胞是T淋巴細(xì)胞中功能相異的兩個(gè)亞群，CD4+T細(xì)胞具有誘導(dǎo)和輔助細(xì)胞免疫和體液免疫的作用；CD8+T細(xì)胞則抑制細(xì)胞免疫和體液免疫。CD4+/CD8+比值能初步評估機(jī)體免疫狀態(tài)，比值降低提示免疫功能受損，是機(jī)體病變程度和預(yù)后不良的重要標(biāo)志之一。本研究顯示腦缺血后24 h、72 h外周血CD3+、CD4+水平及CD4+/CD8+比值下降，CD8+水平上升，這與既往研究一致[1]，提示腦缺血后T細(xì)胞免疫功能下降，外周免疫抑制明顯。

目前，腦缺血后腦損傷程度與外周血T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系尚不明確，本研究旨在通過分析腦缺血大鼠神經(jīng)功能評分、腦梗死面積百分比與外周血CD3+、CD4+、CD8+水平、CD4+/CD8+比值的相關(guān)性來探索腦缺血后腦損傷程度與外周血T淋巴細(xì)胞亞群的關(guān)系。結(jié)果顯示，模型組大鼠神經(jīng)功能評分與CD8+水平及腦梗死面積百分比均呈正相關(guān)，腦梗死面積百分比與CD8+水平呈正相關(guān)，與CD4+水平及CD4+/CD8+比值呈負(fù)相關(guān)；這與Hug 等[6]的研究一致。這提示外周血T淋巴細(xì)胞亞群、神經(jīng)功能缺損程度及腦梗死灶大小之間存在一定相關(guān)性，可能為臨床協(xié)助評估缺血性腦卒中病情、預(yù)測患者預(yù)后提供一定幫助。

[1]Gu LJ, Xiong XX, Wei D, et al. T cells contribute to stroke-induced lymphopenia in rats[J]. PLoS One, 2013, 8(3): e59602.

[2]Longa EZ, Weinstein PR, Carlson S, et al. Reversible middle cerebral artery occlusionwithout craniotomy in rats[J].Stroke,1989,20(1):84-91.

[3]Bederson JB, Pitts LH, Tsuji M, et al. Rat middle cerebral artery occlusion: evaluation of the model and development of a neurologic examination[J].Stroke, 1986, 17(3):472-476.

[4]張雷,陸正齊.腦梗死的免疫學(xué)研究進(jìn)展[J].中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志，2013，20(5)：356-359.

[5]Joseph K, Ruth MP,Dorit K, et al. Impact of stroke-associated infection on long-termsurvival: a cohort study[J]. J Neurol Neurosurg Psychiatry，2013， 84:297-304.

[6]Hug A, Dalpke A, Wieczorek N, et al. Infarct volume is a major determiner of post-stroke susceptibility to infection[J]. Stroke, 2009, 40(10): 3226-3232.

(本文編輯：鄒晨雙)

10.3969/j.issn.1006-2963.2015.04.017

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