430000　武漢市中醫(yī)醫(yī)院

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缺血性腦損傷模型的研究

李梅芳李智杰

430000武漢市中醫(yī)醫(yī)院

【DOI】10.3969/j.issn.1007-0478.2015.06.021

缺血性腦損傷容易造成海馬損傷，海馬與人類記憶缺失上關(guān)系密切，損傷能夠引起學(xué)習(xí)和記憶功能衰退，而海馬解剖位置和纖維聯(lián)系的特點(diǎn)，提示它在腦功能中起著關(guān)鍵作用。因此，在研究腦的學(xué)習(xí)和記憶的功能上海馬是一個重點(diǎn)，加上它具有片層結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)相對較簡單，是一個很適用的研究重點(diǎn)[1]，進(jìn)行其研究的關(guān)鍵是制作其相關(guān)研究的動物模型。目前關(guān)于學(xué)習(xí)記憶研究的海馬缺血性損傷的模型建立方式主要有以下幾種：

1全腦缺血再灌注損傷動物模型

1.1雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎法

一種慢性腦缺血動物模型，可參照de la Torre[2]的方法對大鼠的雙側(cè)頸總動脈進(jìn)行永久性結(jié)扎(bilateral carotid artery ligation，BCAL)[3]。亦可參照Ohta等制作慢性腦灌注不足的動物模型[4]。將大鼠麻醉后仰臥固定，頸前部去毛消毒后沿頸正中切開，分離出雙側(cè)頸總動脈，雙重絲線結(jié)扎。缺血組大鼠缺血半球皮質(zhì)、內(nèi)囊區(qū)、海馬區(qū)白質(zhì)均出現(xiàn)較大軟化灶，伴膠質(zhì)細(xì)胞和小血管增生[5]。Tsuchiya等報道大鼠雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎后有15個腦區(qū)的局部腦血流量降低25%～87%[6]。雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎后反映大鼠學(xué)習(xí)能力的跳臺試驗(yàn)和反映空間記憶能力的水迷宮試驗(yàn)的各項(xiàng)指標(biāo)均有顯著下降，并隨時間的推移大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力有進(jìn)一步的降低[7]。

1.2雙側(cè)頸總動脈阻斷并循環(huán)降壓法

采用夾閉家兔雙側(cè)頸總動脈合并股動脈(兔子、貓、狗等體型較大的實(shí)驗(yàn)動物)或眼眶后靜脈叢[8](小鼠)快速放血，造成急性腦缺血模型。腦電圖、生化指標(biāo)和形態(tài)學(xué)檢測顯示，這種模型腦缺血效果明顯。但是，該模型不易進(jìn)行再灌注觀察。有作者采用雙側(cè)頸總動脈阻斷合并控制性藥物(硝普鈉等)降壓法[9]，制各急性腦缺血模型。缺血一定時間后恢復(fù)血液灌流，用于腦缺血再灌注損傷觀察。但由于全身低血壓造成心、腎和其他重要器官的損害，導(dǎo)致模型復(fù)雜化。

1.3體循環(huán)控制性降壓復(fù)合顱內(nèi)注液增壓法

李成輝等通過給狗快速滴注0.02%硝普鈉溶液，使其平均動脈壓(MAP)于2～3 min內(nèi)降至6. 65 kPa，之后向小腦延髓池快速注入腦脊液近似溶液，使顱內(nèi)壓(ICP)于5 s內(nèi)升高至13. 3 kPa[10]。這樣由于降低MAP而使腦灌注壓下降，同時升高顱內(nèi)壓使腦灌流阻力增大，導(dǎo)致腦血流阻斷，造成腦缺血。維持MAP及ICP于上述水平一定時間后顱內(nèi)減壓使ICP降至正常水平，即可恢復(fù)血液灌流。經(jīng)組織學(xué)、生理學(xué)、生物化學(xué)及放射性同位素等多項(xiàng)技術(shù)檢測，證明應(yīng)用體循環(huán)降壓結(jié)合顱內(nèi)增壓技術(shù)制造的腦缺血再灌注損傷模型，具有缺血效果可靠、并發(fā)癥少等優(yōu)點(diǎn)，用作腦復(fù)蘇的實(shí)驗(yàn)研究。但該模型不適用于大鼠等小動物，并且也具有因全身性低血壓導(dǎo)致其它臟器損傷，而使模型復(fù)雜化的缺點(diǎn)。

1.4四動脈結(jié)扎法

Pulsinelli[11]和De Ryck[12]等1979年首先報道了采用電凝固Wistar大鼠雙側(cè)椎動脈合并結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈，一定時間后再解除兩側(cè)頸總動脈結(jié)扎進(jìn)行再灌注，從而造成嚴(yán)重大腦缺血再灌注損傷這種具有高度重復(fù)性的全腦缺血造模方法。Furlow[13]又用SD大鼠復(fù)制此模型并加以改進(jìn)。優(yōu)點(diǎn)：簡便易行，可控制夾閉CCA時間，進(jìn)行再灌注實(shí)驗(yàn)是研究腦缺血再灌注損傷比較常用的動物模型；缺點(diǎn)：操作困難，尤其是動物的椎動脈與脊髓動脈間交通支差異很大，并且動物不同種屬和不同個體之間差異較大，模型的成功率較低，穩(wěn)定性亦較差。

1.5三血管阻斷法

Kamegama等通過電灼斷基底動脈、同時夾閉兩側(cè)頸總動脈的方法復(fù)制全腦缺血模型，由于該方法不僅阻斷了腦供血主血管，而且也阻斷了從脊前動脈來的側(cè)支血管，與前述四血管阻斷模型比較，腦缺血成功率高且無需再篩選是其主要優(yōu)點(diǎn)。田鶴邨等在此基礎(chǔ)上又加以改進(jìn)，不用顯微鏡而在自視下進(jìn)行手術(shù)，用特制的動脈夾夾閉基底動脈而不用電灼斷的方法；缺血一定時間后去除夾閉進(jìn)行徹底再灌注，也避免了灼斷基底動脈導(dǎo)致的動脈損傷、出血之弊，造成的缺血和再灌流效果迅速、穩(wěn)定性好；使用過程中全身動脈血壓一自穩(wěn)定在生理范圍內(nèi)，從而避免了由全身動脈壓降低引起再灌流時腦血流灌注壓不足，是其又一個比較突出的優(yōu)點(diǎn)[14]。

1.6六動脈阻斷法

在四血管阻斷法造模的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)，將傳統(tǒng)的雙側(cè)頸總動脈阻斷改為雙側(cè)頸內(nèi)動脈和頸外動脈阻斷再加雙側(cè)椎動脈阻斷。該方法由于頸動脈阻斷的部位是在頸動脈竇的遠(yuǎn)心端，使頸動脈竇區(qū)能維持一定的壓力。這就避免了傳統(tǒng)的四血管法阻斷雙側(cè)頸總動脈，因雙側(cè)頸動脈竇區(qū)壓力同時驟降，導(dǎo)致全身血壓反射性升高，引起腦側(cè)支循環(huán)開放增加和腦血流增加，進(jìn)而使腦缺血程度減輕等弊端。但該方法手術(shù)過程比較復(fù)雜、難度較大。

1.7頸動脈分流法

采用結(jié)扎左側(cè)頸總動脈、同時從右側(cè)頸總動脈遠(yuǎn)心端放血，使大腦兩側(cè)頸總動脈來的血供停止，制造全腦缺血模型。此時雖然兩側(cè)椎動脈的血流仍能通過基底動脈流向大腦Willis環(huán)，但由于從右側(cè)頸總動脈遠(yuǎn)心端進(jìn)行放血，引起該側(cè)頸總動脈、頸內(nèi)動脈和后交通動脈壓力顯著降低。因而，當(dāng)基底動脈的血流進(jìn)入后交通動脈后，并不向前灌注大腦，而是逆行經(jīng)頸內(nèi)動脈的頸總動脈流出，導(dǎo)致大腦缺血。從頸總動脈放出的血液又經(jīng)同側(cè)股靜脈輸入體內(nèi)。整個過程中可有效地控制血液流量和速度。該模型的優(yōu)點(diǎn)在于不影響基底動脈和椎動脈的血流量，腦干缺血不明顯，對呼吸、循環(huán)等基本生命活動的影響較小。再灌流時停止右頸總動脈放血，使右頸總動脈、頸內(nèi)動脈和后交通動脈的低壓消失，由基底動脈來的血流能夠進(jìn)入Willis環(huán)；同時解除左側(cè)頸總動脈結(jié)扎，恢復(fù)其血液灌流。這樣大腦便有了足夠的血液灌注，即再灌流充分是其又一特點(diǎn)。但對于這種造模方法所導(dǎo)致的腦缺血范圍尚有爭議。有研究顯示，這種缺血主要是右側(cè)大腦中動脈供應(yīng)的腦區(qū)缺血。造成這一差異的原因可能與放血速度、頸內(nèi)動脈壓力降低程度不同等有關(guān)。

1.8頸動脈負(fù)壓分流法

實(shí)驗(yàn)大鼠以戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔麻醉。從左股靜脈注入肝素(180 U)后緩慢注入生理鹽水，夾閉兩側(cè)頸總動脈，從右頸外動脈持續(xù)抽吸頸總動脈內(nèi)血液(0.3 ml/min)，此為腦缺血開始；同時自左股靜脈持續(xù)回輸血液，全腦缺血20 min后停止抽血，向頸動脈內(nèi)注入1 mL生理鹽水，結(jié)扎頸外動脈，松開兩側(cè)頸總動脈，此為再灌注開始[15]。

2局灶性腦缺血再灌注損傷造模方法

建立大腦局灶性缺血與再灌注損傷動物模型，是研究缺血性腦卒中的病理生理機(jī)制及其防治的重要手段之一。大腦中動脈(MCA)是人類腦梗塞的血管病變多發(fā)部位。由于大鼠腦血管解剖接近人類，血管性損傷恒定，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。因而，大鼠大腦中動脈閉塞(MCAO)模型是比較公認(rèn)的研究腦缺血損傷的標(biāo)準(zhǔn)動物模型。對于局灶性腦缺血模型的制備，目前比較常用的有開顱法、插線法、光化學(xué)誘導(dǎo)法和栓塞法等造成大鼠MCA血流阻斷與再通，從而導(dǎo)致其相應(yīng)灌流區(qū)域局灶性腦缺血再灌注損傷。

2.1開顱法

多數(shù)研究選擇顳下部開顱，通過電凝或絲線結(jié)扎橫過嗅束外緣或內(nèi)緣處的MCA，造成腦梗塞。Kader等對電凝閉塞MCA方法加以改進(jìn)，閉塞MCA所有可見分支，梗塞效果更好。開顱法MCAO模型缺血效果可靠，是迄今應(yīng)用最廣泛的經(jīng)典局灶性腦缺血模型。但開顱創(chuàng)傷大，腦脊液外漏，易感染，改變了腦微環(huán)境，手術(shù)難度較大和MCA閉塞后無法觀察再灌注損傷效應(yīng)。雖然有作者通過用微型動脈夾夾閉或通過穿線抬起MCA造成短暫腦缺血，然后使血流再通制作再灌注模型，但也只限于短時間MCAO后再灌注損傷的研究，技術(shù)上尚待進(jìn)一步改進(jìn)。

2.2微栓子栓塞阻斷法

自頸外動脈(ECA)向頸總動脈(CCA)逆行插管并注入大鼠自體血凝塊碎片與生理鹽水配制的混懸液，可造成頸內(nèi)動脈(ICA)系統(tǒng)，主要是MCA供血區(qū)的缺血性損害，梗死灶位于同側(cè)大腦皮質(zhì)、基底節(jié)及海馬等部位。有人報道，也可利用硅酮微球、碳粒微球或CCA自發(fā)性脫落的血栓栓子栓塞一側(cè)MCA。這種栓塞性腦梗死模型很接近人類自然栓塞現(xiàn)象，成功率高，手術(shù)創(chuàng)傷較小[16]。但也存在諸如不能預(yù)見缺血部位和范圍、不能控制再通、對側(cè)亦可能受累以及可能導(dǎo)致外源物質(zhì)引起的炎癥反應(yīng)等缺點(diǎn)[17-18]。故此法僅限于一些特殊研究的應(yīng)用，如溶栓治療及血小板微血栓形成后的腦病理改變及功能變化研究等[19]。

2.3插線法

Kuizumi于1986年首次報道了尼龍線插線法制作的可逆性MCAO模型，解決了局灶性腦缺血再灌注損傷研究的難題。若手術(shù)選擇頸部旁側(cè)手術(shù)入路，可使手術(shù)視野暴露更好，便于血管分離，并且較頸部正中切口對氣管刺激小，無需再行氣管造疹，使手術(shù)相對較簡單。病理檢查結(jié)果顯示，造模動物均存在缺血側(cè)尾殼核及背外側(cè)皮層梗塞，病變一致、穩(wěn)定性好，缺血效果可靠。尤其適用于基底節(jié)缺血再灌注的病理生理機(jī)制的研究和藥物治療效果與機(jī)制的觀察。此外，無需開顱、創(chuàng)傷小，栓線閉塞MCA后不引起血壓、血?dú)夂腕w溫的異常變化，不影響缺血后腦水腫和顱內(nèi)壓病理變化的自然過程等優(yōu)點(diǎn)，均優(yōu)于開顱閉塞MCA法建立的局灶性腦缺血模型[20]。

Zea Longa線栓法[21]：該模型的制備方法是將動物麻醉后頸后正中切開，電燒雙側(cè)椎動脈局阻斷后循環(huán)；前正中切開，暴露左側(cè)CCA、ICA和ECA，以微血管夾將CCA夾閉，將單股尼龍線(4-0)插入ICA遠(yuǎn)端，大腦中動脈起始部阻斷血流/平均進(jìn)線長度為(2±0.2)cm。

2.4栓塞法

這種造模方法是將栓塞劑(如碎血凝塊、碳素顆粒、花生四烯酸鹽等)注入血管，制成腦栓塞模型。將無菌干燥的血凝塊研碎，制成栓子混懸液。從頸外動脈注入栓子后，結(jié)扎頸外動脈并放開總動脈，栓子沖入頸內(nèi)動脈并進(jìn)入MCA。該模型不需開顱，制作簡單，缺血效果可靠。且與臨床栓塞性腦卒中病理過程最為相似，比較適用于溶栓治療的觀察研究，尤其選用人血凝塊作為栓塞劑更具有實(shí)用意義。其缺點(diǎn)是由于栓子的隨機(jī)性較大，無法精確預(yù)測梗塞的部位和范圍大小。也有研究人員應(yīng)用氣囊栓塞法，但僅能用于大動物如狒狒、家兔等。

2.5Endothelin-1誘導(dǎo)的大鼠局灶性腦缺血再灌注模型Sharkey等建立了ET-1誘導(dǎo)的大鼠局灶性腦缺血再灌注模型[22]，國內(nèi)外己有人采用該法進(jìn)行了缺血性腦損傷的研究[23]。大鼠腹腔注射10%水合氯醛(3.5 m1/kg)麻醉，俯臥位固定于腦立體定位儀上，以熱墊維持肛溫37.0～38.0℃，沿正中線切開頭皮暴露顱骨，參照大鼠腦立體定位圖譜以前囪為標(biāo)志，頭端0.9 mm，右側(cè)開5.2 mm，顱骨下8.7 mm處植入一導(dǎo)管，5 min后將稀釋的不同濃度ET-1(4.0 μL)以1.0μL/ min速度注入到MCA附近：同時行尾動脈插管術(shù)監(jiān)測給ET-1前、后大鼠尾動脈血壓變化。與普遍應(yīng)用的插線法相比，本模型僅涉及簡單的立體定位和開顱術(shù)，不會造成腦內(nèi)較大動脈的損傷，減少了顱內(nèi)出血的危險；再灌注的發(fā)生是一個漸進(jìn)過程，避免了人為再灌注引起的CBF急劇增加，較符合人類腦卒中溶栓后CBF逐漸恢復(fù)的情況；開顱范圍小(直徑0. 65mm)，不會造成腦內(nèi)環(huán)境的較大變化；產(chǎn)生與插線法類似的較穩(wěn)定的梗死范圍且具有良好的重現(xiàn)性。此外，本模型的最大優(yōu)點(diǎn)是可以對清醒動物進(jìn)行缺血性腦損傷的研究，因此本模型對腦缺血再灌注機(jī)制的研究及腦保護(hù)新藥療效的評估而言是一種較理想的局灶性腦缺血再灌注模型。

3離體組織培養(yǎng)腦缺血再灌注損傷造模方法

海馬腦片抽氧缺糖模型：腦片的制作方法為取出生6～9 d SD大鼠，剝離出海馬，切成400 μm厚制成腦片培養(yǎng)液，放入插入微孔濾膜，再置入培養(yǎng)箱中，2周后加入碘化丙啶(Propidiumiodide,PI)，再孵育1 h，選取完好無PI特異熒光著色的腦片。海馬腦片缺氧缺糖模型的制作方法有多種，目前運(yùn)用較多的有浸沒法、充N2法和三氣缺氧培養(yǎng)箱法。浸沒法：將腦片換入內(nèi)、外各含有1.2 mL無糖平衡鹽溶液的微孔濾膜上，再放入培養(yǎng)箱中分別培養(yǎng)30、45 min、1、1.5 h。充N2法：先將腦片用HEPES液沖洗，再放入含有1.2 mL HEPES緩沖液的微孔濾膜內(nèi)，然后放入密閉容器中，分別持續(xù)充入5% CO2、95% N2的混合氣體30、45 min、1、1.5 h。三氣缺氧培養(yǎng)箱法：將腦片放入只有外側(cè)含有1.2 mL無糖平衡鹽溶液的微孔濾膜上，再放入5% CO2、1% O2、94% N2的三氣缺氧培養(yǎng)箱內(nèi)分別缺血缺氧培養(yǎng)30、45 min、1、1.5 h。目前普遍認(rèn)為三氣缺氧培養(yǎng)箱法來的缺氧缺糖模型最穩(wěn)定，但有實(shí)驗(yàn)證實(shí)將浸沒法結(jié)合充N2法制作的模型與三氣缺氧培養(yǎng)箱法在缺氧1 h的結(jié)果相似[24]，且更方便實(shí)用。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)離體海馬腦片缺氧缺糖培養(yǎng)模擬“腦缺血”，可以重現(xiàn)在體動物實(shí)驗(yàn)時海馬各區(qū)對缺血敏感性不同的特點(diǎn)[25]，這種方法正在逐步取代動物體內(nèi)缺血模型。朱潔等在此基礎(chǔ)上發(fā)明了改良的新生大鼠海馬腦片缺氧缺糖巧匠制備方法，使得該方法應(yīng)用更加經(jīng)濟(jì)廣泛[26]。還有人認(rèn)為從成年小鼠海馬腦片培養(yǎng)細(xì)胞損傷的評價將會成為研究神經(jīng)保護(hù)作用的一個潛在模型系統(tǒng)[27]。

參考文獻(xiàn)

1韓太真，吳馥梅主編.學(xué)習(xí)與記憶的神經(jīng)生物學(xué). 北京:中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社, 1998. 61, 162-163,169-170, 230, 279, 287.

2De la Torre JC, Fortin T, Park GA, et al. Chronic cerebrovascular insufficiency induces dementia-like deficits in aged rats. Brain Res, 1992, 582(2):186-195.

3謝元云, 袁群芳, 姚志彬.慢性腦缺血對青年和老年大鼠海馬NOS陽性神經(jīng)元的影響.神經(jīng)解剖學(xué)雜志, 1999, 15(2):161-164.

4Ni J, Ohta H, Matsumoto K, et al. Progressive cognitive impairment following chronic cerebral hypoperfusion induced by permanent occlusion of bilateral carotid arteries in rats. Brain Res, 1994, 653(1-2): 231-236.

5李露斯, 劉之榮, 肖桃元.大鼠慢性腦血流灌注不足腦的病理組織學(xué)和超微結(jié)構(gòu)變化.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 1999, 21(11):805-508.

6Tsuchiya M, Sako K, Yura S, et al. Local cerebral glucose utilisation following acute and chronic bilateral carotid artery ligation in Wistar rats: relation to changes in local cerebral blood flow. Exp Brain Res, 1993, 95(1):1-7.

7林瑯, 陳文軍, 梅元武.慢性低灌注狀態(tài)對大鼠腦部能量代謝及學(xué)習(xí)記憶功能的影響.卒中與神經(jīng)疾病, 2004,11(1): 22-25.

8呂青, 曲玲, 王芳, 等. 蝙蝠葛酚性堿對小鼠腦缺血-再灌注腦組織Bax和Bcl-2蛋白表達(dá)的影響. 中草藥, 2004, 35(2): 185-187.

9郝憲恩, 王鑫國, 李楠, 等.姜黃素對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用. 中藥藥理與臨床, 2004, 20(1): 7-9.

10朱謙, 李成輝, 賈乃光. 硝普鈉在冠狀動脈搭橋手術(shù)中對腦血流速度的影響. 臨床麻醉學(xué)雜志, 2004, 20(4): 212-215.

11Pulsinelli WA, Brierley JB. A new model of bilateral hemispheric ischemia in the unanesthetized rat. Stroke,1979, 10(3): 267-272.

12De Ryck M, Van Reempts J, Borgers M, et al. Photochemical stroke model: flunarizine prevents sensorimotor deficits after neocortical infarcts in rats. Stroke, 1989, 20(10):1383-1390.

13Furlow TW Jr. Cerebral ischemia produced by four-vessel occlusion in the rat: a quantitative evaluation of cerebral blood flow. Stroke, 1982, 13(6):852-855.

14田鶴邨, 陳前芬, 張成英, 等. 氯胺酮對大鼠全腦缺血再灌注損傷的影響及其機(jī)理探討. 蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 1994, 19(2): 83-86.

15邢雪松, 曹德壽, 劉曉湘. CGRP和NGF對全腦缺血再灌注大鼠腦組織PKC表達(dá)的調(diào)節(jié)作用. 解剖科學(xué)進(jìn)展, 2004, 10(1): 50-53.

16李勝, 雷征霖. 大鼠大腦中動脈區(qū)局灶性腦缺血模型.國外醫(yī)學(xué)·腦血管疾病分冊, 1998,6(1): 3-6.

17Burggraf D, Martens HK, Liebetrau M, et al. A new approach to reduce the number of animals used in experimental focal cerebral ischemia models. Neurosci Lett, 2005, 386(2):88-93.

18Wang LC, Futrell N, Wang DZ, et al. A reproducible model of middle cerebral infarcts, compatible with long-term survival, in aged rats. Stroke, 1995, 26(11): 2087-2090.

19Nagakura A, Miyake-Takagi K, et al. Impairment of adenylyl cyclase and of spatial memory function after microsphere embolism in rats. J Neurosci Res, 2002, 68(3):363-372.

20Laing RJ, Jakubowski J, Laing RW. Middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Which method works best? Stroke, 1993, 24(2):294-297.

21Pereira BM, Weinstein PR, Zea-Longa E, et al. Effect of blood flow rate and donor vessel diameter on the patency of carotid venous bypass grafts in dogs. Surg Neurol, 1989, 31(3):195-199.

22Sharkey J, Ritchie IM, Kelly PA. Perivascular microapplication of endothelin-1: a new model of focal cerebral ischaemia in the rat. J Cereb Blood Flow Metab. 1993,13(5):865-871.

23梅和珊, 蘇素文, 王永利, 等. Endothelin-1誘導(dǎo)的大鼠局灶性腦缺血再灌注模型.中國藥理學(xué)通報, 2004, 20(1): 114-117.

24王玉蘭，徐鐵軍，張鳳真，等.Endothelin-1誘導(dǎo)的大鼠局灶性腦缺血再灌注模型.中國藥理學(xué)通報，2004，20(1)：114-117.

25Strasser U,Fisher G.Quantitative measurement of neuronal degeneration in oranotypic hippocampal cultures after combined oxygen/glucose deprivation.J Neurosci Methods,1995,57(2):177-186.

26朱潔，李光勤.改良的新生大鼠海馬腦片缺氧缺糖模型的制備方法.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008，11(33)：1281-1283.

27Tao Su,Beatrice Paradiso,Yue-sheng Long,et al.Evaluation of cell damage in organotypic hippocampal slice culture from adult moust:A potential model system to study neuroprotection.Brain Research,2011,138:68-76.

(2015-03-02收稿2015-03-20修回)

【中圖分類號】R743

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【文章編號】1007-0478(2015)06-0385-04