陳巖

ASCA P-ANCA及TB-DNA檢測在UC CD及腸結(jié)核疾病鑒別診斷中的應(yīng)用

陳巖

目的 探討血清抗釀酒酵母抗體（ASCA），抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（核周型）（P-ANCA）及組織結(jié)核分枝桿菌DNA（TBDNA）檢測在潰瘍性結(jié)腸炎（UC）、克羅恩?。–D）及腸結(jié)核疾病鑒別診斷中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 選擇UC、CD和腸結(jié)核患者128例，另設(shè)健康對照組31例，采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)和間接免疫熒光薄片法分別檢測組織結(jié)核分枝桿菌DNA（TB-DNA）、血清ASCA和P-ANCA，比較分析以上指標(biāo)的變化。結(jié)果 UC組的P-ANCA+ASCA-/P-ANCA+表達(dá)率與對照組比較明顯增高，差異有顯著性（P＜0.01）；而CD血清組與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。UC組的ASCA+、ASCA+/P-ANCA-表達(dá)率與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而CD血清組與對照組比較差異有顯著性（P＜0.01）。腸結(jié)核組的組織TB-DNA+表達(dá)率與CD組織組比較差異有顯著性（P＜0.01），前者的TB-DNA+表達(dá)率顯著高于后者。結(jié)論 血清ASCA 和P-ANCA 可用于UC與CD的鑒別診斷，聯(lián)合檢測兩項(xiàng)標(biāo)志物可作為鑒別UC與CD較好的輔助檢查。組織TB-DNA檢測可用于腸結(jié)核和CD的鑒別診斷。

潰瘍性結(jié)腸炎 克羅恩病 炎癥性腸病

炎癥性腸病（inflammatory bowel disease，IBD）是一類病因和發(fā)病機(jī)制尚不明確的腸道慢性炎癥性疾病，包括潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）和克羅恩?。╟rohn’s disease，CD）。急性暴發(fā)型，有并發(fā)癥及年齡＞60歲者預(yù)后不良，病程漫長者癌變風(fēng)險(xiǎn)增加［1］。確診IBD通?？績?nèi)鏡檢查及病理活檢［2，3］。但相當(dāng)部分的IBD疑似病例仍然不能通過內(nèi)鏡檢查確診［4］。CD的臨床表現(xiàn)，X線及內(nèi)鏡所見與腸結(jié)核相似，臨床鑒別比較困難［1］。本文通過檢測UC、CD和腸結(jié)核患者血清抗釀酒酵母抗體（ASCA），抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（核周型）（P-ANCA）及組織結(jié)核分枝桿菌DNA（TB-DNA）的陽性表達(dá)率，探討其變化特點(diǎn)。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2011年10月至2014年10月在本院就診或住院的UC、CD及腸結(jié)核患者128例。依據(jù)內(nèi)鏡及病理活檢分為UC組、CD血清組和對照組3組，UC組31例，男20例，女11例；平均年齡（39.3±7.9）歲?；颊卟∽儾课辉谥蹦c、左半結(jié)腸、全結(jié)腸及未知部位的病例分別為9例、5例、14例和3例。CD血清組33例，男23例，女10例，平均年齡（38.2±7.6）歲。病變部位在回腸、結(jié)腸、回結(jié)腸及未知部位的病例分別為6例、16例、9例和2例。對照組31例為本院同期體檢中心健康體檢者，男19例，女l2例；平均年齡（36.7±6.9）歲。腸結(jié)核及CD組織標(biāo)本來源于本院病理科2007年9月至2014年9月檔案保存病例，所有標(biāo)本通過HE染色，由病理學(xué)家重新讀片確定病理診斷。其中腸結(jié)核組34例，男21例，女13例；平均年齡（37.3±5.7）歲。CD組織組30例，男21例，女9例，平均年齡（36.3±6.3）歲。活動(dòng)性結(jié)核患者的診斷標(biāo)準(zhǔn)符合我國1998年制定的中國結(jié)核病分類標(biāo)準(zhǔn)。IBD診斷采用 “2001年全國慢性非感染性腸道疾病學(xué)術(shù)研討會(huì)”擬訂的診斷標(biāo)準(zhǔn)。各組性別和年齡比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有受試對象均排除自身免疫疾病、遺傳性疾病家族史及現(xiàn)癥腹瀉者，無抗結(jié)核治療。本項(xiàng)目經(jīng)本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有對象簽署知情同意書。

1.2 檢測方法 ASCA、P-ANCA采用間接免疫熒光薄片法檢測，試劑購自德國歐蒙公司。腸結(jié)核和CD患者腸道組織DNA提取自石蠟包埋組織，采用QIAampR DNA Mini Kit 試劑盒。

1.3 PCR 引物測序 擴(kuò)增出目的條帶的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物，由華大基因測序，采用雙向測序。PCR 產(chǎn)物測序所得基因序列在GenBankR 數(shù)據(jù)庫中比對。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料采用（x±s）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病例組與對照組血清ASCA、 P-ANCA及組織TBDNA陽性表達(dá)率比較 UC組的P-ANCA +及ASCA-/ P-ANCA+表達(dá)率與對照組比較明顯增高，差異有顯著性（P＜0.01）；而CD血清組與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。UC組的ASCA+、ASCA+/P-ANCA-表達(dá)率與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而CD血清組與對照組比較差異有顯著性（P＜0.01）。

2.2 病例組間的血清ASCA、 P-ANCA及組織TBDNA陽性表達(dá)率比較 UC組的ASCA+、 P-ANCA+、

ASCA-/P-ANCA+和ASCA+/P-ANCA-表達(dá)率分別與CD血清組比較，差異有顯著性（P＜0.01）。UC組P-ANCA+、 ASCA-/P-ANCA+表達(dá)率明顯增高；CD血清組ASCA+、ASCA+/P-ANCA-表達(dá)率明顯增高。腸結(jié)核組的組織TB-DNA+表達(dá)率與CD組織組比較差異有顯著性（P＜0.01），腸結(jié)核組TB-DNA+表達(dá)率高于CD組織組。

2.3 ASCA+、P-ANCA+、ASCA+/P-ANCA-、ASCA-/ P-ANCA+及TB-DNA+的靈敏性、特異性比較 與聯(lián)合檢測ASCA+/P-ANCA-、ASCA-/P-ANCA+比較，單獨(dú)檢測ASCA、P-ANCA在診斷UC和CD中的靈敏性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而特異性比較明顯增高（P＜0.01）。TB-DNA+在診斷腸結(jié)核和CD中的靈敏性和特異性分別為44.1%和100%。

3 討論

目前對于IBD及腸結(jié)核的診斷依據(jù)臨床表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)室及放射學(xué)檢查、內(nèi)鏡和病理學(xué)檢查等。當(dāng)結(jié)腸鏡檢查無法確診或患者存在結(jié)腸鏡檢查禁忌證時(shí)，血清學(xué)抗體標(biāo)志物P-ANCA、ASCA 及組織TB-DNA等檢測有助于它們的鑒別。血清ASCA、 P-ANCA陽性表達(dá)率在UC和CD的鑒別診斷中有重要價(jià)值，ASCA檢測對CD特異性較高，P-ANCA檢測對UC特異性高。有20%～85%的UC患者體內(nèi)可檢測到P-ANCA［5］。國內(nèi)有報(bào)道認(rèn)為CD患者中有39%～76%的血清中存在ASCA，而15%的UC患者及5%的健康人群血清中亦有ASCA［6］。值得注意的是在一些自身免疫性肝炎患者血清中亦存在ASCA、ANCA［7，8］，故單獨(dú)檢測P-ANCA或ASCA對診斷IBD的價(jià)值有限。2010 年世界胃腸病學(xué)實(shí)踐指南明確指出聯(lián)合檢測 ASCA 和P-ANCA 指標(biāo)作為鑒別 UC 與 CD的輔助檢查， 即P-ANCA陽性/ ASCA陰性者提示UC，ASCA 陽性/P-ANCA陰性者提示CD［9］。本資料顯示P-ANCA陽性、ASCA陰性/ P-ANCA陽性在UC中的表達(dá)率明顯增高（P＜0.01），ASCA陽性、ASCA陽性/P-ANCA陰性在CD中的表達(dá)率明顯增高（P＜0.01）；提示單項(xiàng)檢測和聯(lián)合檢測對鑒別診斷UC和CD者有較高的價(jià)值。聯(lián)合檢測ASCA+/ P-ANCA-和ASCA-/P-ANCA+對診斷CD和UC的靈敏性與單項(xiàng)檢測無差異（P＞0.05），但特異性比較有明顯差異（P＜0.01），提示聯(lián)合檢測 ASCA 和P-ANCA 可作為鑒別 UC 與 CD較好的輔助檢查。

腸結(jié)核與CD的臨床表現(xiàn)相似，病理上均有肉芽腫形成，臨床上較難鑒別，結(jié)核分枝桿菌DNA PCR技術(shù)已成為目前的研究熱點(diǎn)［10］。國內(nèi)的研究機(jī)構(gòu)認(rèn)為TB-DNA PCR 技術(shù)的靈敏性＞60%［11，12］，國外的報(bào)道認(rèn)為，其敏感性在21.6%～45.0%，而特異性＞80%［13～15］。本資料結(jié)果顯示TB-DNA PCR的靈敏性和特異性分別為44.1%和100%。提示DNA PCR法可作為確診腸結(jié)核以及研究腸結(jié)核和CD鑒別診斷的一種快捷的輔助診斷方法。

1 葛均波,徐永?。?內(nèi)科學(xué)． 第8版． 北京:人民衛(wèi)生出版社,2013．381．

2 Escher JC,Rotterdam MJ．Inflammatory bowel disease in children and adolescents: recommendations for diagnosis the Porto criteria． J Pediatr Gastroenterol Nutr, 2005, 41(1): 1～7．

3 Stange EF, travis SP, Vermeire S, et al． European evidence based consensus on the diagnosis and management of Crohn’s disease: definitions and diagnosis． Gut,2006, 55(1): 1～15．

4 Ristvedt SL, McFarland EG, Weinstock LB, et al． Patient preferences for CT colonography, conventional colonoscopy, and bowel preparation．Am J Gastroenterol, 2003, 98(3): 578～85．

5 Peyrin BL, Standaert VA, Branche J, et al． IBD serological panels: facts and perspectives． Inflammatory bowel diseases, 2007, 13(12): 1561～1566．

6 Reumaux D, Sendid B, Poulain D, et al． Serological markers in inflammatory bowel diseases． Best Practice & Research Clinical Gastroenterology, 2003, 17(1): 19～35．

7 譚立明,彭衛(wèi)華,董葉, 等． MPO、ANCA、SMA及ANA抗體聯(lián)合檢測對自身免疫性肝炎的診斷意義． 山東醫(yī)藥, 2008,48(27):114～115．

8 胡朝軍,張蜀瀾,周仁芳,等． 抗釀酒酵母細(xì)胞抗體在原發(fā)性膽汁性肝硬化患者中的臨床意義． 中華風(fēng)濕病學(xué)雜志,2010, 14(10): 659～663．

9 Bernstein CN, Fried M, Krabshuis JH, et al． World Gastroenterology Organization Practice Guidelines for the diagnosis and management of IBD in 2010． Inflammatory bowel diseases,2010, 16(1): 112～124．

10 陳瑜君,何瑤,陳白莉,等．PCR 法檢測結(jié)核分枝桿菌DNA 在鑒別克羅恩病與腸結(jié)核中的價(jià)值．中國病理生理雜志,2013,29(1):188～192．

11 甘華田,歐陽欽,步宏,等．聚合酶鏈反應(yīng)對腸結(jié)核和克隆病的診斷價(jià)值．中華內(nèi)科雜志,1995,34(1): 30～33．

12 吳東紅,楊志剛,李慶華． IL-21對Jurkat細(xì)胞增殖及WAVE-1表達(dá)的影響．中華全科醫(yī)學(xué),2009,7(8):789～790．

13 Pulimood AB,Peter S,Rook GW,et al．In situ PCR for Mycobacterium tuberculosis in endoscopic mucosal biopsy specimens of intestinal tuberculosis and crohn,s disease ． Am J Clin Pathol,2008,129(6): 846～851．

14 Amarapurkar DN,Patel ND, Amarapurkar AD,et al．Tissue polymerase chain reaction in diagnosis of intestinal tuberculosis and crohn’s disease．J Assoc Physicians India,2004,52(12): 863～867．

15 Jin J,Kim JM,Kim HK,et al． Histopathology and TBPCR kit analysis in differentiating the diagnosis of intestinal tuberculosis and crohn’s disease．World J Gastroenterol,2010,16(20): 2496～2503．

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