■高鵬輝 王宏展 鄧曉敏 郭 舒 宋玉卓 刁新平

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030）

仔豬出生后的20～35 d，是生長(zhǎng)速度最快的階段；同時(shí)也是仔豬斷奶的時(shí)期，使得仔豬不能夠吮吸母乳，獲取機(jī)體代謝所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與母源抗體[1]。仔豬在斷奶后，消化系統(tǒng)中的小腸絨毛變短，隱窩加深，同時(shí)胃酸、消化酶分泌不足，活性減少；斷奶行為易造成仔豬腸道微生物菌群紊亂，免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)受到抑制，進(jìn)而抗病率下降、腹瀉率和死亡率升高[2]。抗生素以其效果顯著、價(jià)格低廉且易生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用在防治仔豬腹瀉中。雖然抗生素作為飼料添加劑應(yīng)用于畜牧業(yè)已取得了明顯的經(jīng)濟(jì)效益，但由于其所存在的殘留性、抗菌性、感染性，從上世紀(jì)60年代開(kāi)始，將抗生素作為飼料添加劑使用就一直存在著爭(zhēng)議[3]。在此背景下，無(wú)毒副與無(wú)殘留作用的中草藥成為關(guān)注的焦點(diǎn)，經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)中草藥飼料添加劑能夠提高畜禽生產(chǎn)性能、增強(qiáng)畜禽機(jī)體的免疫能力，同時(shí)還可改善畜產(chǎn)品的品質(zhì)[4]。

本試驗(yàn)中發(fā)酵的復(fù)方中草藥是由茯苓、黃芪、陳皮、板藍(lán)根、山楂、黃柏等配伍而成，其中茯苓、黃芪、陳皮具有補(bǔ)氣升陽(yáng)，益氣健脾，提高免疫功能，保肝降酶，誘生和促誘干擾素等功效；板藍(lán)根、山楂、黃柏則能夠清熱燥濕，瀉火解毒，健胃促消化，抗菌和抑制病毒的作用[5]。植物乳桿菌是一種長(zhǎng)期定植在人畜體內(nèi)的益生菌，具有很大的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，用植物乳酸桿菌對(duì)復(fù)方中草藥進(jìn)行發(fā)酵處理，能夠?qū)⒈患?xì)胞壁所包裹的藥效成分得以釋放，提高中草藥的利用價(jià)值。本試驗(yàn)是在發(fā)酵復(fù)方中草藥藥效優(yōu)于未發(fā)酵復(fù)方中草藥的定性基礎(chǔ)上，將發(fā)酵復(fù)方中草藥按照不同的添加量添加在斷奶仔豬飼糧中，通過(guò)測(cè)定仔豬的生長(zhǎng)性能與生化、免疫指標(biāo)，從而確定出最佳的添加量，并為大規(guī)模的生產(chǎn)應(yīng)用奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與儀器

中草藥：購(gòu)于哈爾濱中藥市場(chǎng)。

發(fā)酵復(fù)方中草藥制劑（實(shí)驗(yàn)課題組制備），基礎(chǔ)日糧（由哈爾濱華達(dá)飼料公司提供，配方及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1），試驗(yàn)仔豬（哈爾濱三元畜產(chǎn)種豬場(chǎng)）。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

酶聯(lián)免疫試劑盒：TP、IgA、IgM、IgG均購(gòu)自 R＆D公司。

酶標(biāo)儀：Biotek ELx800，購(gòu)自美國(guó)sigma公司。

高速離心機(jī)：Allegra 64R，購(gòu)自美國(guó)Beckman Coulter公司。

電子天平：AR1140，購(gòu)自梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

可調(diào)溫水浴鍋：DK-S12，購(gòu)自上海森信試驗(yàn)儀器有限公司。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及試驗(yàn)設(shè)計(jì)

按照體況相近，公母近半的原則，選取3～6胎齡母豬所產(chǎn)的“大×長(zhǎng)”二元雜交斷奶仔豬128頭。隨機(jī)分為4個(gè)處理組，每組4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8頭，并按照養(yǎng)殖場(chǎng)管理標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行正常飼喂、免疫，試驗(yàn)分組及處理見(jiàn)表2。

表2 試驗(yàn)分組與處理

1.3 測(cè)定指標(biāo)

1.3.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo)的測(cè)定

在試驗(yàn)的第1 d、第14 d及第28 d早上8點(diǎn)，稱量全部仔豬體重，依照飼喂量計(jì)算出平均日采食量，平均日增重和料重比，并根據(jù)每天仔豬的腹瀉情況，統(tǒng)計(jì)出腹瀉率。計(jì)算公式如下：

平均日采食量=階段每組總采食量/(階段時(shí)間×每組總頭數(shù))；

平均日增重=階段每組總增重/(階段時(shí)間×每組總頭數(shù))；

料重比=平均日采食量/平均日增重；

腹瀉率(%)=每組腹瀉頭數(shù)/每組總頭數(shù)×100。

1.3.2 血樣采集及免疫參數(shù)的測(cè)定

在仔豬斷奶后的第14日齡、28日齡晨飼前，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2頭仔豬，從前腔靜脈采血5 ml，經(jīng)3 000 r/min離心15 min，分離血清，分裝待測(cè)。免疫球蛋白IgA、IgG、IgM、總蛋白TP、生長(zhǎng)激素GH、總膽固醇CHOL采用酶聯(lián)免疫法與雙縮脲法測(cè)定，試驗(yàn)步驟遵照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析和鄧肯氏多重比較法，結(jié)果形式為“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤”，差異性顯著為P＜0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同添加劑量的發(fā)酵復(fù)方中草藥對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響（見(jiàn)表3）

由表3可知：仔豬在斷奶后1～14 d期間，1、2、3、4組的平均日采食量差異不顯著(P＞0.05)；4組的平均日增重略高于其它組，但與各組無(wú)顯著差異(P＞0.05)；4個(gè)組別間，仔豬的料重比無(wú)顯著性差異；1組的腹瀉率高于其它3個(gè)組，與3、4組差異顯著(P＜0.05)，2組與剩余組斷奶仔豬的腹瀉率均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

仔豬在斷奶后15～28 d期間，1組的平均日采食量顯著低于其它各處理組(P＜0.05)，3、4組仔豬的平均日采食量差異不顯著；4組的平均日增重顯著高于其它3個(gè)組(P＜0.05)，較1組的仔豬日增重相比，提高了32.17%，各組間差異顯著(P＜0.05)；1、2組間料重比差異不顯著，但均顯著性低于3、4組，3、4組組間料重比差異不顯著(P＞0.05)，其中3組相對(duì)于1組，料重比降低了9.7%；試驗(yàn)各處理組間仔豬腹瀉率無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

2.2 不同添加劑量發(fā)酵復(fù)方中草藥對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)及免疫功能的影響(見(jiàn)表4)

表3 發(fā)酵復(fù)方中草藥對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

表4 發(fā)酵復(fù)方中草藥對(duì)血清生化指標(biāo)及免疫功能的影響

由表4可知：在斷奶后1～14 d期間，仔豬血清中的總蛋白含量，4組顯著高于1、2組(P＜0.05)，但1、2、3組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，其中4組相對(duì)于1組，血清中總蛋白含量提高了6.19%；斷奶仔豬血清中的總膽固醇含量，2組顯著低于1、4組(P＜0.05)，但1、3、4組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)；1組仔豬生長(zhǎng)激素含量為20.10 μg/l，略低于其它組，但各組間含量差異不顯著(P＞0.05)；斷奶仔豬血清免疫球蛋白IgA中，1組含量略高于其它組，但1、2、3、4組間IgA含量差異不顯著(P＞0.05)；1、2、3、4組間仔豬免疫球蛋白IgG、IgM含量變化無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

在斷奶后15～28 d期間，仔豬血清中的總蛋白含量，3、4組顯著高于1、2組(P＜0.05)，3、4組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)，其中相對(duì)于1組，4組中的總蛋白含量提高了7.21%；仔豬的總膽固醇含量，3組含量略高于其它組，但各組間的差異均不顯著(P＞0.05)；1、3、4組中仔豬的生長(zhǎng)激素含量差異不顯著(P＞0.05)，均顯著高于2組仔豬血清中生長(zhǎng)激素的含量(P＜0.05)；斷奶仔豬血清免疫球蛋白IgA含量，3組略高于其它組，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，1、2、3、4組間亦無(wú)顯著性差異(P＞0.05)；1組與2組，3組與4組兩兩組別間免疫球蛋白IgG含量差異不顯著(P＞0.05)，但3、4組IgG含量顯著高于1、2組(P＜0.05)，其中相對(duì)于對(duì)照組，3、4組IgG含量分別提高了9.78%、9.45%；免疫球蛋白IgM含量，1組略低于其它組(P＞0.05)，但1、2、3、4組組間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

3 討論

3.1 不同添加量發(fā)酵復(fù)方中草藥對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由試驗(yàn)結(jié)果可以得知，不同添加劑量的發(fā)酵復(fù)方中草藥對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響不同，相對(duì)于添加0.1%，0.2%組，在飼糧中添加0.3%的發(fā)酵復(fù)方中草藥組在1～14 d期間日采食量偏低，導(dǎo)致這種結(jié)果的原因可能是：發(fā)酵后中草藥雖然藥材味道得以減弱，但依然有部分的苦、澀等味道。而仔豬生有特殊的鼻子，嗅區(qū)廣闊，嗅黏膜的絨毛面積很大，其中分布在嗅區(qū)的神經(jīng)異常密集，對(duì)氣味的辨別能力較強(qiáng)；另外仔豬在采食習(xí)慣上具有選擇性，特別喜愛(ài)甜食[6]，所以在斷奶初期，仔豬本身發(fā)生的應(yīng)激與飼糧中所添加中草藥的異味，促使了不同組別間，仔豬采食量的差異。在15～28 d期間，仔豬逐步適應(yīng)由于飼糧與環(huán)境變化所產(chǎn)生的應(yīng)激，0.3%添加量組平均日采食量逐漸升高，最終達(dá)到550.8 g。而正常飼糧組中由于未添加抗生素、中草藥等，在斷奶后逐漸出現(xiàn)僵豬、仔豬生長(zhǎng)骨架狹窄等現(xiàn)象，其平均日采食量較0.3%組，顯著降低了16.23%(P＜0.05)。

在1～14 d期間，各組間仔豬的平均日增重差異不顯著(P＞0.05)，在15～28 d期間，0.3%添加量組日增重顯著高于其它各組。仔豬腸道是吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的主要場(chǎng)所，其中小腸上皮細(xì)胞絨毛能夠增加腸道與食物的接觸面積，能夠提高消化率；上皮細(xì)胞的完整性是維持胃腸黏膜上皮細(xì)胞完整性和產(chǎn)生黏液及碳酸根離子的前提條件，對(duì)生理有著重要的作用[7]。發(fā)酵復(fù)方中草藥中含有中草藥復(fù)合多糖，復(fù)合多糖能夠提高仔豬盲腸、結(jié)腸、直腸的上皮細(xì)胞厚度和絨毛高度，增強(qiáng)仔豬消化吸收能力[8]。唐建安等試驗(yàn)亦表明：復(fù)方中草藥能有效改善胃腸道的發(fā)育和促進(jìn)消化腺酶的分泌，從而增強(qiáng)仔豬物質(zhì)和能量代謝，改善仔豬生長(zhǎng)性能和飼料報(bào)酬[9]。斷奶仔豬腹瀉率提高主要是由自身生理結(jié)構(gòu)與應(yīng)激共同造成，復(fù)方中草藥能夠改善腸道功能，并通過(guò)促進(jìn)仔豬機(jī)體蛋白質(zhì)的合成，降低斷奶仔豬的應(yīng)激，所以在斷奶1～14 d期間，添加發(fā)酵復(fù)方中草藥組仔豬腹瀉率顯著低于正常組(P＜0.05)[10]。仔豬斷奶后15～28 d，腸道功能得以完善，應(yīng)激對(duì)仔豬的影響趨于減弱，各組間仔豬腹瀉率差異不顯著(P＞0.05)。刁新平等亦證實(shí)在飼糧中添加中草藥茯苓，能顯著提高斷奶仔豬平均日采食量和平均日增重[11]。

3.2 不同添加量發(fā)酵復(fù)方中草藥對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)及免疫功能的影響

蛋白能夠增強(qiáng)組織器官及循環(huán)中免疫細(xì)胞的功能，增加維持黏膜屏障功能的相關(guān)蛋白，有助于抵御感染和消除微生物，對(duì)機(jī)體有著重要的作用[12]。復(fù)方中草藥能夠促進(jìn)血紅蛋白、血清蛋白的合成，改善蛋白代謝，并能促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)與免疫某些酶和激素分泌的作用[9]。試驗(yàn)結(jié)果中可以看出，在飼糧中添加0.2%、0.3%發(fā)酵復(fù)方中草藥的斷奶仔豬粗蛋白含量顯著高于正常飼糧組(P＜0.05)。在15～28 d期間，3、4組仔豬血清中總蛋白含量分別達(dá)到49.33、49.67 g/l，相對(duì)于正常飼糧組，分別提高了6.48%與7.21%。

在試驗(yàn)期間，各組間仔豬的總膽固醇含量與生長(zhǎng)激素含量均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，造成這種結(jié)果的原因可能是：動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的生化指標(biāo)總是維持在合理的范圍內(nèi)，過(guò)低或者過(guò)高都會(huì)導(dǎo)致健康受到損傷[13]。免疫球蛋白IgM、IgG、IgA在動(dòng)物機(jī)體有著重要的免疫調(diào)節(jié)作用，免疫球蛋白與抗原結(jié)合形成免疫復(fù)合物及獨(dú)特型抗原和抗獨(dú)特型抗體形成免疫網(wǎng)絡(luò)[14]，試驗(yàn)中各組間IgG的含量變化不顯著(P＞0.05)。在早期的免疫防御中，初次免疫應(yīng)答中產(chǎn)生的抗體主要是IgM，并具有很高的抗原結(jié)合價(jià)和親和性，其激活補(bǔ)體殺菌、溶菌、溶血、調(diào)理吞噬及凝集作用[15]，而IgA和內(nèi)源防御素的表達(dá)直接反映了腸道先天性免疫能力[16]。發(fā)酵復(fù)方中草藥中茯苓能夠健脾利濕，化氣行水；黃芪補(bǔ)中益氣，健脾升陽(yáng)，均能提高動(dòng)物機(jī)體免疫力[17]，所以相對(duì)于正常飼糧組，免疫球蛋白含量IgG顯著增加(P＜0.05)，IgM、IgA含量略微上升，但與正常飼糧組相比，差異不顯著(P＞0.05)。

4 結(jié)論

①與正常飼糧相比，在飼糧中添加0.2%、0.3%發(fā)酵復(fù)方中草藥能夠增加仔豬平均日采食量、提高平均日增重、降低料重比，并在1～14 d斷奶初期降低仔豬腹瀉率，差異顯著(P＜0.05)。

②在飼糧中添加0.2%、0.3%發(fā)酵復(fù)方中草藥，飼喂28 d后，仔豬血清中總蛋白、IgG含量提高，與正常飼糧組相比，差異顯著(P＜0.05)。

綜上所述：在飼糧中添加發(fā)酵復(fù)方中草藥可以顯著提高斷奶仔豬生長(zhǎng)性能及免疫性能，最適宜的添加量為0.2%。