賈軍李非潘巍巍

1.盤錦市中心醫(yī)院神經(jīng)外科，遼寧盤錦124010;2.遼河油田第二職工醫(yī)院，遼寧盤錦124001;3.遼河油田總醫(yī)院，遼寧盤錦124001

人腦膠質(zhì)瘤中KAI1/CD82的表達(dá)及其臨床意義

賈軍1李非2潘巍巍3

1.盤錦市中心醫(yī)院神經(jīng)外科，遼寧盤錦124010;2.遼河油田第二職工醫(yī)院，遼寧盤錦124001;3.遼河油田總醫(yī)院，遼寧盤錦124001

目的探討KAI1/CD82在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其與惡性程度的關(guān)系。方法收集腦膠質(zhì)瘤病理132例,為膠質(zhì)瘤組,對(duì)照組為20例顱腦外傷內(nèi)減壓的腦組織,按照膠質(zhì)瘤級(jí)別膠質(zhì)瘤組分為四個(gè)亞組。采用免疫組化方法分析膠質(zhì)瘤組與對(duì)照組間,以及不同惡性程度膠質(zhì)瘤中KAI1/CD82基因表達(dá)。結(jié)果KAI1/CD82在膠質(zhì)瘤組中表達(dá)率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。不同惡性程度膠質(zhì)瘤中KAI1/CD82的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。KAI1/CD82的表達(dá)與人腦膠質(zhì)瘤的惡性程度呈正相關(guān),在Ⅲ-Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤中表達(dá)明顯高于Ⅰ-Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤(P＜0.05)。通過(guò)隨訪發(fā)現(xiàn)KAI1/CD82陽(yáng)性組復(fù)發(fā)率低于陰性組,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論KAI1/CD82在膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。檢測(cè)KAI1/CD82的表達(dá)可能成為監(jiān)測(cè)膠質(zhì)瘤進(jìn)展及臨床上判斷預(yù)后的重要參考指標(biāo)。

膠質(zhì)瘤;KAI1/CD82;免疫組化

膠質(zhì)瘤(glioma)是顱內(nèi)最常見(jiàn)的原發(fā)惡性腫瘤,患者治療失敗和死亡的主要原因是腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移。KAI1/CD82是近年發(fā)現(xiàn)的特異性腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因,關(guān)于KAI1/CD82抑制腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制極其復(fù)雜，尚未完全闡明。目前國(guó)內(nèi)外,對(duì)KAI1/ CD82在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及作用研究較少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)免疫組織化學(xué)法對(duì)KAI1/CD82在不同惡性程度的膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)進(jìn)行研究,探討KAI1/CD82膠質(zhì)瘤惡性程度與表達(dá)水平之間的關(guān)系,為進(jìn)一步治療和判斷預(yù)后提供新的參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1援1一般資料

選取遼寧省盤錦市中心醫(yī)院2011年12月-2012年12月收治、手術(shù)切除并經(jīng)病理組織學(xué)確診的膠質(zhì)瘤132例,為膠質(zhì)瘤組。132例患者中,男58例,女74例,年齡22～67歲、平均49歲。按2000年WHO膠質(zhì)瘤分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí):I級(jí)28例,Ⅱ級(jí)50例,Ⅲ級(jí)38例,Ⅳ級(jí)16例;24例正常腦組織標(biāo)本均為急性顱腦損傷患者行內(nèi)減壓術(shù)切除的腦組織,為對(duì)照組。膠質(zhì)瘤組與對(duì)照組患者在年齡、性別、組織部位等一般資料上上無(wú)顯著差異,具有可比性。所有標(biāo)本經(jīng)10%福爾馬林溶液固定,石蠟包埋。

1.2 主要試劑及免疫組化染色

兔抗人KAI1/CD82單克隆抗體及免疫組化SP試劑盒均購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。免疫組化技術(shù)采用SP法,標(biāo)本連續(xù)組織切片4～6 μm,常規(guī)采用脫蠟,水化,PBS沖洗,3%H2O2室溫15 min,PBS沖洗,高壓PH9.0抗原修復(fù)1 min30 s,加入一抗4℃過(guò)夜。PBS沖洗,加入二抗37℃孵育30min,PBS沖洗,DAB顯色,蘇木素對(duì)比染色,水洗分化,梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片,觀察。用已知陽(yáng)性組織切片做陽(yáng)性對(duì)照,PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

以在胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒判定為陽(yáng)性。根據(jù)染色程度及染色陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)百分比綜合計(jì)分。按照陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)分:≤25%為0分,25%～50%為1分,50%～75%為2分,大于75%為3分;不染色記0分,淡黃色記1分,黃色或深黃色記2分,棕黃色記3分。每張切片的兩項(xiàng)得分之和＜4分為陰性表達(dá),≥4分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

所得數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，χ2檢驗(yàn)及Speaman相關(guān)分析,P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

2 結(jié)果

2.1 KAI1/CD82蛋白在正常腦組織和腦膠質(zhì)瘤中的陽(yáng)性表達(dá)

腦膠質(zhì)瘤組織中KAI1/CD82在腦膠質(zhì)瘤中陽(yáng)性率為63.63%(84/132),高于對(duì)照組29.17%(7/24);差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 不同病理級(jí)別腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本中KAI1/CD82陽(yáng)性表達(dá)情況

KAI1/CD82蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為:I級(jí)42.86%(12/28),II級(jí)56%(28/50),Ⅲ級(jí)78.95%(30/38),Ⅳ級(jí)87.5%(14/16),將各相鄰級(jí)別腦膠質(zhì)瘤KAI1/CD82蛋白陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行χ2檢驗(yàn),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);將低級(jí)別組(I+Ⅱ)與高級(jí)別組(Ⅲ+Ⅳ)的Kiss-1陽(yáng)性表達(dá)率進(jìn)行χ2檢驗(yàn),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.29,P＜0.05)。

表1 不同病理級(jí)別腦膠質(zhì)瘤標(biāo)本中KAI1/CD82陽(yáng)性表達(dá)情況

KAI1/CD82在I級(jí)+II級(jí)與III級(jí)+IV級(jí)陽(yáng)性表達(dá)率比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.29,P＜0.05)。

2.3 腦膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)率的比較

通過(guò)對(duì)腦膠質(zhì)瘤患者術(shù)后1年的隨訪,我們發(fā)現(xiàn)腦膠質(zhì)瘤總復(fù)發(fā)率為42.42%(56/132),KAI1/CD82陽(yáng)性組復(fù)發(fā)率為33.33% (28/84),KAI1/CD82陰性組復(fù)發(fā)率為62.50%(30/48),KAI1/CD82陽(yáng)性組的1年復(fù)發(fā)率低于陰性組,兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),見(jiàn)表2。

表2 腦膠質(zhì)瘤1年復(fù)發(fā)率的比較

3 討論

KAI1/CD82是位于人染色體11P11.2上高度保守的抑癌基因,最早是由Dong等研究前列腺癌時(shí)發(fā)現(xiàn)的,它編碼含有267個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)CD82,具有10個(gè)外顯子及9個(gè)內(nèi)含子的,是屬于跨膜4超家族成員之一的細(xì)胞表面糖蛋白。后來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)KAI1/CD82在乳腺癌、肝癌、胃癌、肺癌等多種實(shí)體腫瘤中存在不同程度的表達(dá)較弱或缺失,它在腫瘤的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中起著非常重要的作用。一些研究[1]發(fā)現(xiàn)KAI1/CD82在乳腺正常組織高表達(dá),而在乳腺癌中存在表達(dá)減弱,并且它與ER陽(yáng)性呈正相關(guān)。腫瘤惡性程度越低,KAI1/CD82表達(dá)越高,越不容易發(fā)生淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[2],患者5年生存率也越高。后來(lái)一些研究者[3]發(fā)現(xiàn)KAI1/CD82蛋白在肺良性病組的表達(dá)高于肺癌組,與臨床分期,病理分化程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),但與性別,年齡,腫瘤大小和病理類型無(wú)關(guān)。KAI1/CD82的高表達(dá)能抑制肺癌區(qū)域淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移[4],Choi UJ等[5]證實(shí)KAI1/CD82的下降通過(guò)PI3K/Akt/mTOR信息傳導(dǎo)路徑對(duì)H1299肺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移表型下調(diào)Rac1的表達(dá)。KAI1/CD82在大腸癌中陽(yáng)性表達(dá)約55%,其表達(dá)和Dukes'分期,靜脈侵犯,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,腫瘤分化程度和肝轉(zhuǎn)移之間有統(tǒng)計(jì)上的顯著相關(guān)。并且KAI1/CD82表達(dá)和Dukes分期被確定為重要和獨(dú)立的預(yù)后因素[6]。KAI1/CD82表達(dá)的減弱或者缺失可能是腫瘤發(fā)生和發(fā)展的潛在因素。不少文獻(xiàn)報(bào)道KAI1/CD82在通過(guò)Sprouty2的上調(diào)抑制肝癌細(xì)胞遷移,野生型p53和JunB的協(xié)同作用下,調(diào)節(jié)著肝癌細(xì)胞的KAI1/CD82的蛋白表達(dá)[8-9]。

KAI1/CD82作為腫瘤轉(zhuǎn)移抑制的細(xì)胞表面分子,在腦部惡性疾病中的研究尚不多見(jiàn)有研究發(fā)現(xiàn)該基因在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中的表達(dá)與臨床分期呈負(fù)相關(guān),其表達(dá)下調(diào)是神經(jīng)母細(xì)胞瘤分化和轉(zhuǎn)移的一個(gè)標(biāo)志。其表達(dá)是由NF-κB和NF-κB介導(dǎo)的APPct等控制[10],可能減緩遷移,促進(jìn)成熟的少突膠質(zhì)祖細(xì)胞的分化。相反,下調(diào)CD82在腦室管膜下區(qū)細(xì)胞內(nèi),利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體表達(dá)的shRNA,阻止它們分化成髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞[11]。我國(guó)研究者發(fā)現(xiàn)神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系的細(xì)胞高表達(dá)KAI1/CD82,與人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系細(xì)胞的體外高轉(zhuǎn)移潛能呈負(fù)相關(guān)[12];CD82/KAI1在惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中表達(dá),且在U251細(xì)胞中表達(dá)較CHG-5細(xì)胞高. CD82/KAI1可抑制膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞的遷移[13]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在正常腦組織中KAI1/CD82的陽(yáng)性表達(dá)率為29.17%,顯著低于腦膠質(zhì)瘤組織63.63%。因此,KAI1/CD82的陽(yáng)性表達(dá)有提示存在腦膠質(zhì)瘤病變的能力。此外,我們進(jìn)行膠質(zhì)瘤分級(jí)后的分組研究中發(fā)現(xiàn),KAI1/CD82的表達(dá)與人腦膠質(zhì)瘤的惡性程度呈正相關(guān)，在Ⅲ-Ⅳ級(jí)膠質(zhì)瘤中表達(dá)明顯高于Ⅰ-Ⅱ級(jí)膠質(zhì)瘤,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。因此,在臨床中發(fā)現(xiàn)通過(guò)隨訪發(fā)現(xiàn)KAI1/CD82的表達(dá)較高時(shí)可能提示病變分級(jí)較高,惡性程度較高。然而,我們通過(guò)隨訪研究結(jié)合KAI1/CD82的表達(dá)缺失可能是腦膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)的重要因素。以上的研究結(jié)果表明,KAI1/CD82在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中發(fā)揮著重要作用,通過(guò)調(diào)節(jié)少突膠質(zhì)祖細(xì)胞的分化,從而限制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移,是一種伴隨膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展而發(fā)揮功能的保護(hù)性因子,這可能正是腦膠質(zhì)瘤很少發(fā)生轉(zhuǎn)移的原因。但其具體的作用途徑和機(jī)制仍需要我們進(jìn)一步的研究和探索。

綜上,KAI1/CD82在腦膠質(zhì)瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起著重要作用,檢測(cè)KAI1/CD82在腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)可能有助于對(duì)病情的評(píng)估,從而為腦膠質(zhì)瘤的治療和預(yù)后奠定基礎(chǔ)。

[1]Mooez S,Malik FA,Kayani MA,et al.Expressional alterations and transcript isoforms of metastasis suppressor genes(KAI1 and KiSS1)in breast cancer patients.[J].Asian Pac J Cancer Prev.2011;12(10):2785-91.

[2]Markowska J,Bar J,M dry R,et al.The expression of BRCA1,P53, KAI1,and Nm23 in ovaries of BRCA1 mutation carriers after prophylactic adnexectomy[J].Arch Gynecol Obste，2013，288(4):839-44.

[3]Shiwu WU,Lan Y,Wenqing S,et al.Expression and clinical significance of CD82/KAI1 and E-cadherin in non-small cell lung cancer.[J]. Arch Iran Med，2012，15(11):707-12.

[4]Wu SW,Yu L,Zhou L,et al.[Expression of Gal-3 and CD82/KAI1 proteins in non-small cell lung cancer and their clinical significance].[J]. Zhonghua Zhong Liu Za Zhi，2013 Feb，35(2):124-128.

[5]Choi UJ,Jee BK,Lim Y,et al.KAI1/CD82 decreases Rac1 expression and cell proliferation through PI3K/Akt/mTOR pathway in H1299 lung carcinoma cells[J].Cell Biochem Funct，2009，27(1):40-47.

[6]Ma ZB,Li K,Wang J,et al.Role of KAI1/CD82 polymorphisms in colon cancer risk in Han Chinese population.[J].Med Oncol，2013，30(3):668.

[7]Dai W,Wang C,Wang F,et al.Anti-miR-197 inhibits migration in HCC cells by targeting KAI 1/CD82[J].Biochem Biophys Res Commun，2014，446(2):541-548.

[8]Lee JH,Bae JA,Lee JH,Seo YW,et al.Glycoprotein 90K,downregulated in advanced colorectal cancer tissues,interacts with CD9/CD82 and suppresses the Wnt/beta-catenin signal via ISGylation of beta-catenin.[J]. Gut，2010;59(7):907-917.

[9]Guo C,Liu QG,Zhang L,et al.Expression and clinical significance of p53,JunB and KAI1/CD82 in human hepatocellular carcinoma[J].Hepatobiliary Pancreat Dis Int，2009，8(4):389-396.

[10]Mela A,Goldman JE.CD82 blocks cMet activation and overcomes hepatocyte growth factor effects on oligodendrocyte precursor differentiation.[J].J Neurosci，2013，5(18):7952-7960.

[11]Mela A,Goldman JE.The tetraspanin KAI1/CD82 is expressed by late-lineage oligodendrocyte precursors and may function to restrict precursor migration and promote oligodendrocyte differentiation and myelination[J].J Neurosci，2009，29(36):11172-11181.

[12]孫維勝，鹿洪亭，董蒨，等.不同轉(zhuǎn)移潛能人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系KAI1/CD82的表達(dá)[J].中華小兒外科雜志,2013,34(4):249-251.

[13]陳亮,羅文萍,鐘東等.CD82/KAI1在神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞株中的表達(dá)及對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32(13):1438-1141.

Expression and clinical significance of KAI1/CD82 in human brain glioma

JIA Jun1,LI Fei2,PAN Weiwei3
1.Panjin central Hospital,Panjin,124010,China;2.No.2 Workers′Hospital of Liaohe Oilfield,Panjin,124001,China;3.General Hospital of Liaohe Oilfield,Panjin,124001,China

ObjectiveTo study the expression of KAI1/CD82 in human brain glioma and its relationship with malignant degrees.MethodsGene expression of KAI1/CD82 levels were studied using immunohistochemical methods in 132 cases with different degrees of malignant glioma.Resultsthe expression of KAI1/CD82 had significant difference in different degrees of malignant glioma(P＜0.05).The expression of KAI1/CD82 positively correlated with the malignant degree of brain glioma,and expression inⅢ-Ⅳgrade glioma was significantly higher thanⅠ-Ⅱgrade glioma(P＜0.05).Followed-up,the recurrence rate in KAI1/ CD82positive patients is significant lower than the negative group(P＜0.05).ConclusionKAI1/CD82 plays an important role in the occurrence and development of glioma.To detect the expression of KAI1/CD82 may be an important indicator to monitor the progress and prognosis of glioma.

Glioma;KAI1/CD82;Immunohistochemistry

R5

A

1674-0742（2015）03（b）-0112-02

2014-10-11）

賈軍(1972-),男,遼寧盤錦人，副主任醫(yī)師,醫(yī)學(xué)碩士，研究方向：神經(jīng)修復(fù)方面。