邸福川，王淑芳，何 佩

（天?？h動物疫病預防控制中心，甘肅 天祝733299）

牦牛在O 型-亞洲Ⅰ型二價苗一免、二免（一免后一月）、三免（二免后6月）后，每月采樣，采用液相阻斷ELISA 試驗方法測定牛血清樣品中O 型-亞洲Ⅰ型口蹄疫抗體水平，并計算免疫抗體的群體合格率。在30d時，O 型口蹄疫免疫抗體群體合格率分別為76.7%、90%、100%；亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗體群體合格率分別為76.7%、85%、90%。60d 時O 型免疫抗體群體合格率降到72.5%、85%、100%，亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗體群體合格率分別降為56.6%、80%、90%。二免的牛口蹄免疫抗體群體合格率在120d內(nèi)都能在70%以上；三免后5～6月內(nèi)抗體維持在60%～70%之間。

多年來，我們常用牛羊口蹄疫O 型、亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗預防牛羊口蹄疫，A 型苗用量不多。對免疫后的抗體檢測，僅限于O 型口蹄疫抗體水平檢測，方法常用易操作的間接血凝試驗或3ABCELISA 法，省略了亞洲1型抗體水平評估。研究證明，口蹄疫液相阻斷ELISA 抗體檢測技術具有良好的敏感性、快速診斷性和可重復性，現(xiàn)被大量應用于口蹄疫免疫抗體水平的檢測中。本試驗利用中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所研制的O 型口蹄疫、亞洲1型免疫抗體液相阻斷ELISA 試劑盒，對牛不同時間和不同次數(shù)免疫后，2個型的抗體合格率作了跟蹤監(jiān)測，時間跨度為12個月，通過監(jiān)測，找出個體達到99%保護，群體抗體合格率全面達到70%以上的最簡便、最有效免疫程序，為制定天祝白牦?？谔阋叨r苗免疫程序提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗 牛羊口蹄疫O 型--亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗 中牧實業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號1201001和1201003。

1.1.2 試驗動物 選用天祝縣華藏寺鎮(zhèn)一家牦牛育肥場-牧陽養(yǎng)殖場，是一個飼養(yǎng)管理正規(guī)、免疫規(guī)范的規(guī)?；觥ｏ曫B(yǎng)牦牛約300頭.選取3群1歲左右健康、營養(yǎng)良好、未接種過口蹄疫疫苗的牦牛。

1.1.3 診斷試劑 O 型口蹄疫免疫抗體液相阻斷ELISA 試劑盒由中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號2012030101、2012070601、2012091001。亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗體液相阻斷ELISA 試劑盒由中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號2012030102、2012072102、2012100902。

1.2 方法

1.2.1 試驗分組 試驗牛分3組，每組10頭，分別為一次免疫組，第30d二次免免疫組，第180d三次免疫組，計量按照疫苗使用說明書的規(guī)定進行操作，分別于末次免疫后30、60、90、120、150、180d采集血樣，制備血清樣品共360份。

1.2.2 檢測方法 用國家標準GB／T18935-2003中的液相阻斷酶聯(lián)免疫吸附（LBP-ELISA）。

1.2.3 判定標準 以病毒抗原對照平均D 值的50%為臨界值，被檢血清D 值大于臨界值的孔為陰性孔，小于臨界值的孔為陽性孔，陽性孔的最高稀釋度為該血清的抗體效價。O 型口蹄疫LPBELISA 抗體效價≥1∶128 為99%保護，效價≤1∶16 不保護；1∶22 ～1∶90 為50%保護。亞洲I型口蹄疫試驗標準同O 型檢測標準。存欄家畜的抗體合格率≥70%時判定為群體免疫合格。

2 結果與分析

2.1 牛O 型口蹄疫不同免疫次數(shù)抗體效價結果。3組牦牛在1次免疫后在不同時間抗體檢測保護率比例，詳見表1。

表1 牛O 型口蹄免疫抗體效價合格率統(tǒng)計表 %

從表1看出，無論是一次、二次還是三次免疫后30d到60d之內(nèi)，抗體合格率均在70%以上或接近高峰，僅進行一次免疫的組免后30d 時免疫抗體群體合格率雖能達到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的標準，但免疫抗體群體合格率下降速度較快，一免后60d時免疫抗體群體合格率降到73.3%，臨近農(nóng)業(yè)部規(guī)定標準，維持合格僅2個月；二免后一個月合格率為90%，比相同時間的一免合格率72.5%提高了17.5個百分點；合格率維持了4個月；三免時間是二免5月后，當時平均合格率為60%，30d 后采樣檢測合格率達到了100%，比起2免的55%提高了45個百分點，6個月內(nèi)合格率均在70%以上，達到了農(nóng)業(yè)部規(guī)定標準。2.2 牛亞洲1型口蹄疫不同免疫次數(shù)抗體效價合格率結果。詳見表2。

表2 牛亞洲1型口蹄免疫抗體效價合格率統(tǒng)計表 %

從表2看出，僅進行一次亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫的組，在疫苗免疫后30d抗體合格率為76.7%，第60d時迅速下降低于農(nóng)業(yè)部規(guī)定的群體合格率標準，僅僅維持了一個多月，免疫效果不理想；二免后直到120d還能達到70%的合格率；三免后一個月比二免同時間的合格率60%提高了30 個百分點，并且5個月內(nèi)合格率達到70%以上。

3 討論

3.1 從檢測結果看出，一次免疫后，O 型和亞州1型口蹄疫抗體上升的不快，并且下降很快，加強沒有后抗體上升快并且持續(xù)時間也長。據(jù)了解，首免后可以誘導免疫動物對抗原產(chǎn)生免疫記憶，再次進行免疫時動物體內(nèi)的記憶細胞會被迅速激活，從而誘導機體產(chǎn)生高效的Ig G 抗體。所以，一免后只有及時進行加強免疫才能保證牛群口蹄疫抗體群體合格率超過農(nóng)業(yè)部規(guī)定標準。

3.2 牦牛群一免后60d時盡管O 型口蹄疫抗體群體合格率仍高于農(nóng)業(yè)部規(guī)定標準，但亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗體群體合格率在一免后30～60d之間時已降低于農(nóng)業(yè)部規(guī)定標準，所以牛首次應用二價滅活苗免疫后應在30 日齡左右及時加強免疫，以免產(chǎn)生亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫空白期。本研究表明，牛群首免牛羊口蹄疫O 型，亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗，30～60d內(nèi)后加強免疫，5～6個月后第三次免疫，可以保證牛群的O 型和亞洲Ⅰ型口蹄取得良好的免疫效果。

3.3 牛免疫牛羊口蹄疫O 型、亞洲Ⅰ型二價滅活疫苗后產(chǎn)生的O 型口蹄疫平均效價和群體合格率與亞洲Ⅰ型總體上呈正相關，說明用二價苗進行免疫時，可以使牛同時獲得O 型和亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗體，所以在生產(chǎn)實際中應用二價滅活苗能夠很好地預防口蹄疫。

3.4 通過一年的跟蹤檢測，不論是O 型口蹄疫還是亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫，牛群在進行2 次以上強化免疫后，免疫抗體群體合格率不但高而且維持的時間長，說明對牛群每年進行3次強化免疫，可以使免疫抗體平均效價高而且維持時間長，因此在本地免疫口蹄疫疫苗后應及時、定期用科學的方法進行口蹄疫免疫抗體群體合格率監(jiān)測，通過統(tǒng)計分析監(jiān)測數(shù)據(jù)對免疫效果進行準確評估，并且結合疫情流行動向、疫苗效價及場（戶）自身防疫條件等多種因素，制定適合本地的免疫程序。

［1］ 楊蘇珍，盧曾軍等.牛、羊、豬人工感染口蹄疫病毒3ABC 抗體的變化［J］.甘肅農(nóng)業(yè)大學學報，2006（5）：22-26.

［2］ 李靜，張魯安.奶牛口蹄疫O-AsiaⅠ型雙價疫苗母源抗體消長情況的觀察［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2008，35（4）：69-70.