高欽磊，程永現(xiàn)

1中國科學(xué)院昆明植物研究所 植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650201;2中國科學(xué)院大學(xué)，北京 100049

半夏屬(Pinellia)為天南星科(Araceae)南星亞科的一個(gè)屬，該屬植物中國目前發(fā)現(xiàn)的共有10 種，分別為滴水珠、石蜘蛛、掌葉半夏、盾葉半夏、半夏、大半夏、鷂落坪半夏、姊歸半夏、三裂葉半夏和五葉半夏［1］。中華人民共和國藥典(2000 版)僅收錄了半夏(P.ternata)的鱗莖作為藥材正品，半夏始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品，具有燥濕化痰、降逆止嘔、消痞散結(jié)等功效，其炮制品常與陳皮為伍組成二陳湯，用于支氣管或肺系疾病，效果確切。

天南星科中藥如半夏、天南星等一般毒性較大，但也是常用中藥，為此，多年來人們試圖揭開它們的藥效和毒性物質(zhì)［2-5］，但迄今尚無取得實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。目前已知半夏屬植物含有生物堿、揮發(fā)油、多糖、有機(jī)酸、氨基酸、黃酮［6］、三萜類［7］、吡咯并吡嗪二酮［8］等。藥理學(xué)研究表明半夏提取物具有鎮(zhèn)咳、祛痰、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)吐、抗?jié)?、促進(jìn)膽汁分泌以及抗早孕、抗腫瘤等作用［9］。此外，郁紅禮等人報(bào)道半夏及掌葉半夏中含有致炎作用的毒蛋白［10］。我們認(rèn)為目前關(guān)于半夏的研究還不夠深入，進(jìn)一步開展工作仍十分必要。本研究從其70%的乙醇提取物中分離得到8 個(gè)化合物，其中1 個(gè)為新化合物，其它均為首次從該藥材中獲得。

1 儀器與材料

Shimadzu UV-2401PC 紫外可見光分光光度計(jì);Horbia SEPA-300 型數(shù)字式旋光儀;Xevo TQ-S 質(zhì)譜儀、Brucker Esquire-LC 質(zhì)譜儀和Agilent G6230 TOF高分辨質(zhì)譜儀;Bruker、DRX-500 及Avance 600 MHz核磁共振儀(TMS 為內(nèi)標(biāo)，δ 為ppm，J為Hz);柱層析硅膠和薄層層析硅膠GF254(青島海洋化工廠);MCI gel CHP 20P(日本三菱公司);Sephadex LH-20(Pharmacia);RP-18(日本Daiso);北京創(chuàng)新通恒LC3000 型HPLC，色譜柱為Agilent Zorbax SB-C18(250 mm × 9.4 mm，i.d.5 μm)?；瘜W(xué)計(jì)算軟件為Gaussview 5.0，Discovery Studio 4.0 Client 和Originpro 9.0 64Bit;操作系統(tǒng)為Windows 7［高斯基組為密度擬合基組，溶劑為甲醇，在TDDFT/B3LYP/6-31G(d)環(huán)境下運(yùn)行］。

半夏于2012年9月購自中國云南省昆明市藥材市場，樣品經(jīng)云南省藥物研究所邱斌高級工程師鑒定，憑證標(biāo)本(CHYX-0576)保存于中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

取干燥的半夏鱗莖15 kg，粉碎后用70%乙醇室溫浸提(90 L × 48 h × 3)，合并提取液，減壓回收乙醇得浸膏680 g。將浸膏用4%鹽酸溶液充分捏溶，調(diào)pH 值至3～4 后用乙酸乙酯萃取得酸水層(A)和乙酸乙酯層(B)。酸水層(A)中和后用乙酸乙酯萃取3 次，回收溶劑得到A1(堿性部分)。B 部分用1%氫氧化鈉溶液調(diào)pH 值至9～10 后用乙酸乙酯萃取3 次，回收乙酸乙酯得B1(530 g)，堿水層中和后，用乙酸乙酯萃取3 次得B2(酸性部分22 g)。A1 部分(150 g)行MCI gel CHP 20P 柱色譜(甲醇/水，10%→100%)得Fr.1～Fr.5。Fr.4(80 g)行硅膠柱色譜(氯仿/甲醇，50∶1→1∶1)得Fr.4-1～Fr.4-3，其中Fr.4-2(15 g)經(jīng)Sephadex LH-20(甲醇)凝膠過濾再行RP-18 柱色譜得Fr.4-2-1～Fr.4-2-4。Fr.4-2-2(600 mg)經(jīng)制備型TLC(氯仿/甲醇)后再經(jīng)半制備HPLC(甲醇/水)純化得到化合物1(4.5 mg)和2(5 mg)。Fr.4-2-3(400 mg)經(jīng)制備型TLC(氯仿/甲醇)后再經(jīng)半制備HPLC(甲醇/水)純化得到化合物3(3 mg)和4(2 mg)。B2 部分(22 g)經(jīng)Sephadex LH-20 凝膠過濾(甲醇)分為3 個(gè)組份(Fr.1～Fr.3)，其中Fr.2(7 g)經(jīng)MCI gel CHP 20P后行Sephadex LH-20(甲醇)凝膠過濾得Fr.2-1～Fr.2-3。Fr.2-2(2 g)經(jīng)硅膠柱色譜(氯仿/甲醇)不斷精制后得Fr.2-2-1(500 mg)，再行制備型TLC(氯仿/甲醇)后再經(jīng)半制備HPLC(甲醇/水)得化合物8(12.6 mg)和一組份，該組份含有化合物5 和6，其比例為2∶1。Fr.3(2 g)經(jīng)RP-18 后行Sephadex LH-20(甲醇)凝膠過濾得Fr.3-1～Fr.3-3。其中Fr.3-2(400 mg)經(jīng)制備型TLC(氯仿/甲醇)后再經(jīng)半制備HPLC(甲醇/水)純化得化合物7(6.2 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

圖1 化合物1 的關(guān)鍵COSY 和HMBC 相關(guān)Fig.1 Key COSY and HMBC correlations of compound 1

圖2 (2R，6S)-1 和(2S，6S)-1 的ECD 計(jì)算與實(shí)測值比較Fig.2 Calculated and experimental ECD spectra for 2R，6S and 2S，6S of compound 1

表1 化合物1 的1H (600 MHz)、13C NMR (150 MHz)數(shù)據(jù)(氘代甲醇)及HMBC、COSY 相關(guān)Table 1 1H (600 MHz)and 13C NMR (150 MHz)data in CD3OD，HMBC and COSY correlations of 1

化合物2 白色固體，分子式為C12H14N2O4，EI-MSm/z:250 ［M］+。1H NMR (500 MHz，CD3OD)δ:8.90 (1H，s，H-3)，8.50 (1H，s，H-6)，7.72(1H，d，J=1.1 Hz，H-10)，7.17 (1H，d，J=2.7 Hz，H-8)，6.63 (1H，dd，J=2.7，1.1 Hz，H-9)，3.96 (1H，m，H-13)，3.79 (1H，dd，J=11.2，3.7 Hz，Ha-14)，3.64 (1H，dd，J=11.2，3.7 Hz，Hb-14)，3.55 (1H，m，H-12)，3.24 (1H，dd，J=11.2，3.7 Hz，Ha-11)，2.90 (1H，dd，J=11.2，3.7 Hz，Hb-11);13C NMR (125 MHz，CD3OD)δ:154.7(s，C-5)，152.3 (s，C-7)，145.9 (d，C-10)，145.7(d，C-6)，143.8 (s，C-2)，140.1 (d，C-9)，113.3(d，C-9)，111.3 (d，C-8)，76.2 (d，C-13)，72.9 (d，C-12)，64.6 (t，C-14)，39.6 (t，C-11)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道一致，故鑒定化合物2 的結(jié)構(gòu)為2-(furan-2-yl)-5-(2，3，4-trihydroxy-butyl)-1，4-diazine。

化合物3 白色固體，分子式為C11H18N2O2，ESI-MSm/z:211 ［M+H］+。1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ:4.20 (1H，m，H-9)，4.08 (1H，m，H-6)，3.52 (2H，m，H-3)，2.32 (1H，m，Ha-5)，2.17 (1H，m，Hb-5)，2.03 (1H，m，Ha-4)，1.93 (1H，m，Hb-4)，1.44 (1H，m，H-10)，1.32 (2H，m，H-11)，1.07(3H，d，J=7.2 Hz，H-13)，0.94 (3H，t，J=7.6 Hz，H-12);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δ:172.6(s，C-1)，167.7 (s，C-7)，61.4 (d，C-9)，60.1 (d，C-6)，46.3 (t，C-3)，37.1 (d，C-10)，29.7 (t，C-5)，25.5 (t，C-4)，23.4 (t，C-11)，15.7 (q，C-13)，12.7(q，C-12)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道一致，故鑒定化合物3 的結(jié)構(gòu)為cyclo(Pro-Leu)。

化合物4 白色固體，分子式為C11H8N2，ESIMSm/z:169 ［M+H］+。1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ:8.80 (1H，s，H-1)，8.29 (1H，d，J=5.2 Hz，H-3)，8.21 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5)，8.11(1H，d，J=5.2 Hz，H-4)，7.58 (1H，d，J=7.8 Hz，H-8)，7.45 (1H，td，J=7.8，1.0 Hz，H-7)，7.26 (1H，td，J=7.8，1.0 Hz，H-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道一致，故鑒定化合物4 的結(jié)構(gòu)為β-carboline。

化合物5 淡黃色固體，分子式為C26H28O14，ESI-MSm/z:563 ［M-H］-。1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ:8.25 (2H，d，J=8.7 Hz，H-2'，H-6')，6.90 (2H，d，J=8.7 Hz，H-3'，H-5')，6.68 (1H，s，H-3)，4.80-3.10 (sugar part);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δ:184.5 (s，C-4)，167.1 (s，C-2)，163.2(s，C-5)，160.4 (s，C-7)，157.6 (s，C-4')，156.5(s，C-9)，131.1 (d，C-2'，C-6')，123.0 (s，C-1')，117.1 (d，C-3'，C-5')，108.4 (s，C-6)，105.9 (s，C-8)，104.1 (s，C-10)，103.3 (d，C-3)，82.1 (d，Gal-5)，77.2 (d，Ara-1)，76.6 (d，Ara-3)，76.4 (d，Gal-3)，75.6 (d，Gal-1)，72.1 (t，Ara-5)，71.3 (d，Ara-4)，71.1 (d，Ara-2)，70.7 (d，Gal-4)，70.1 (d，Gal-2)，63.5 (t，Gal-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道一致，故鑒定化合物5 的結(jié)構(gòu)為芹菜素-6-C-阿拉伯糖-8-C-半乳糖苷。

化合物6 淡黃色固體，分子式為C26H28O14，ESI-MSm/z:563 ［M-H］-。1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ:7.90 (2H，d，J=8.6 Hz，H-2'，H-6')，6.93 (2H，d，J=8.6 Hz，H-3'，H-5')，6.63 (1H，s，H-3)，4.80-3.10 (sugar part);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δ:184.5 (s，C-4)，167.1 (s，C-2)，163.2(s，C-5)，160.4 (s，C-7)，157.6 (s，C-4')，156.5(s，C-9)，131.1 (d，C-2'，C-6')，123.0 (s，C-1')，117.1 (d，C-3'，C-5')，108.4 (s，C-6)，105.9 (s，C-8)，104.1 (s，C-10)，103.3 (d，C-3)，82.0 (d，Gal-5)，71.5 (t，Ara-5)，75.6 (d，Ara-3)，75.4 (d，Gal-3)，74.6 (d，Gal-1)，71.1 (t，Ara-5)，70.3 (d，Ara-4)，70.1 (d，Ara-2)，69.7 (d，Gal-4)，69.1 (d，Gal-2)，63.0 (t，Gal-6)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道一致，故鑒定化合物6 的結(jié)構(gòu)為芹菜素-6-C-半乳糖-8-C-阿拉伯糖苷。

化合物7 白色固體，分子式為C20H26O5，ESIMSm/z:345 ［M-H］-。1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ:7.89 (1H，d，J=6.3 Hz，H-3)，6.09 (1H，m，H-3')，6.06 (1H，dd，J=7.5，1.5 Hz，H-2)，5.48(1H，s，H-6)，4.87 (1H，m，H-8)，3.28 (1H，m，H-11)，3.13 (1H，m，H-1)，2.97 (1H，m，H-7)，2.47(2H，m，H-9)，2.17 (1H，m，H-10)，1.89 (3H，d，J=7.2 Hz，H-4')，1.73 (1H，s，H-15)，1.43 (3H，d，J=8.5 Hz，H-13)，1.26 (3H，d，J=6.7 Hz，H-14)，1.02 (3H，s，H-5');13C NMR (150 MHz，CD3OD)δ:212.6 (s，C-4)，167.8 (s，C-12)，165.5(s，C-1')，139.8 (d，C-3')，130.1 (d，C-2)，130.0(d，C-3)，128.9 (s，C-2')，81.7 (d，C-8)，73.2 (d，C-6)，56.3 (s，C-5)，55.7 (d，C-1)，50.3 (d，C-7)，42.1 (t，C-9)，41.6 (d，C-11)，27.3 (d，C-10)，20.1(q，C-14)，20.4 (q，C-15)，18.1 (q，C-5')，16.3 (q，C-4')，11.3 (q，C-13)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］報(bào)道一致，故鑒定化合物7 的結(jié)構(gòu)為6-O-angeloylprenolin.

化合物8 白色粉末，分子式為C20H24O6，ESIMSm/z:359 ［M-H］-。1H NMR (600 MHz，CD3OD)δ:6.74 (1H，d，J=8.1 Hz，H-5')，6.67 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2')，6.66 (1H，s，H-3)，6.62 (1H，dd，J=8.1，1.8 Hz，H-6')，6.17 (1H，s，H-6)，3.81(3H，s，OCH3-4)，3.78 (3H，s，OCH3-5)，3.71 (1H，d，J=4.7 Hz，H-1)，3.67 (2H，m，H-8)，2.78(4H，d，J=7.7 Hz，HOCH2-9，10)，2.02 (1H，m，H-10)，1.76 (1H，m，H-9);13C NMR (150 MHz，CD3OD)δ:149.3 (s，C-4)，147.8 (s，C-5)，146.8(s，C-3')，145.8 (s，C-2)，138.7 (s，C-7)，134.9(s，C-1')，129.6 (s，C-4')，123.9 (d，C-6')，117.8(d，C-5')，116.3 (d，C-2')，113.8 (d，C-6)，112.8(d，C-3)，66.8 (t，HOCH2-9)，62.7 (t，HOCH2-10)，56.4 (q，OCH3-4，5)，48.2 (d，C-10)，48.1 (d，C-1)，40.9 (d，C-9)，33.8 (t，C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］報(bào)道一致，故鑒定化合物8 的結(jié)構(gòu)為4-Omethyl-3'-O-demethyl-secoisolariciresinol。

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