彭新關(guān)兵劉新王瑩葉實(shí)明徐麗

揚(yáng)州地區(qū)117例聽(tīng)力障礙嬰幼兒常見(jiàn)致聾基因突變分析*

彭新2關(guān)兵1劉新3王瑩1葉實(shí)明1徐麗1

目的調(diào)查揚(yáng)州市蘇北人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科及揚(yáng)州市婦幼保健院就診聽(tīng)力障礙嬰幼兒常見(jiàn)致聾基因突變情況。方法對(duì)兩院117名聽(tīng)力障礙嬰幼兒進(jìn)行問(wèn)卷調(diào)查、?？戚o助檢查及聽(tīng)力學(xué)評(píng)估。以足跟或外周靜脈血提取DNA，并對(duì)四個(gè)常見(jiàn)致聾基因（線粒體12SrRNA，GJB2、GJB3和SLC26A4）中20個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢查。結(jié)果GJB2基因突變13例（11.11%），其中235delC純合突變2例（1.71%），235delC雜合突變5例（4.27%），299delAT純合突變2例（1.71%），299delAT雜合突變3例（2.56%），235delC/299delAT復(fù)合雜合突變1例（0.85%）。SLC26A4基因突變12例（10.26%），其中IVS7-2A＞G純合突變2例（1.71%），IVS7-2A＞G雜合突變4（3.42%），IVS7-2A＞G/2168A＞G復(fù)合雜合突變2例（1.71%），IVS7-2A＞G/2162C＞T復(fù)合雜合突變1例（0.85%），IVS7-2A＞G雜合突變3例（2.56%）。GJB2基因235delC雜合和SLC26A4基因IVS7-2A＞G雜合突變2例（1.71%）。未檢查出GJB3基因突變。結(jié)論此次調(diào)查結(jié)果顯示，對(duì)聽(tīng)力障礙嬰幼兒進(jìn)行常見(jiàn)耳聾基因篩查，其中GJB2和SLC26A4均有較高的檢出率，并且部分患兒能夠從分子水平進(jìn)行診斷。這有助于盡早明確患兒耳聾的病因并進(jìn)行干預(yù)和康復(fù)，應(yīng)該將耳聾基因檢測(cè)作為一個(gè)常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行普及。

聽(tīng)力障礙；基因突變；GJB2;SLC26A4

在日常臨床就診中，聽(tīng)力障礙是臨床上常見(jiàn)的疾病之一。導(dǎo)致聽(tīng)力障礙的病因可分為遺傳性和獲得性兩種，根據(jù)發(fā)病時(shí)間可以分為先天性和遲發(fā)型兩種。據(jù)統(tǒng)計(jì)，新生兒及嬰幼兒中，約有0.6‰～1‰表現(xiàn)為極重度耳聾，這部分患兒中，約60%為遺傳因素導(dǎo)致[1]。隨著疾病的診斷不斷提高，遺傳因素導(dǎo)致的耳聾的重要性也越來(lái)越高。因此，早期發(fā)現(xiàn)聽(tīng)力障礙嬰幼兒致病原因就顯得很有必要。近年來(lái)，隨著耳聾基因分子流行病學(xué)的不斷發(fā)展以及檢測(cè)技術(shù)的不斷革新，已經(jīng)能夠從遺傳學(xué)的角度解釋50%以上的先天性聾[2]。同時(shí)亦可對(duì)目標(biāo)人群進(jìn)行多個(gè)基因及多個(gè)位點(diǎn)同時(shí)檢測(cè)，大大提高了檢測(cè)效率。我們對(duì)揚(yáng)州市蘇北人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科及揚(yáng)州市婦幼保健院就診共117例聽(tīng)力障礙嬰幼兒描述致病特點(diǎn)及輔助檢查的結(jié)果，同時(shí)進(jìn)行檢測(cè)國(guó)人最常見(jiàn)的四個(gè)耳聾致病基因20個(gè)常見(jiàn)位點(diǎn)的檢測(cè)，總結(jié)如下。

資料與方法

1 臨床資料

兩院2010年7月～2014年5月就診聽(tīng)力障礙嬰幼兒共117例，男女比例為63∶54。年齡分布在45天～35個(gè)月不等。來(lái)至揚(yáng)州及周邊地區(qū)，漢族人。患兒就診原因有：出生后3天及42天OAE聽(tīng)力篩查未通過(guò)，AABR檢查發(fā)現(xiàn)異常或者患兒言語(yǔ)發(fā)育遲緩等。高危因素嬰幼兒共計(jì)53例，其中家族已確診診斷或可疑遺傳性聾15例；早產(chǎn)、難產(chǎn)、宮內(nèi)窒息病史患兒7例，頭顱外傷史6例。出生后感染性疾病（EB，風(fēng)疹病毒等）11例。高膽紅素血癥（病理性黃疸）14例。排除明顯綜合征型耳聾患兒。

2 方法

2.1 病史采集

采用問(wèn)卷調(diào)查形式，調(diào)查表內(nèi)容涉及患者基本信息及耳聾病史、家族史、高危因素等，由患者或其監(jiān)護(hù)人填寫。本研究獲得醫(yī)院道德倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，對(duì)所有研究對(duì)象的臨床信息和血樣采集，均獲得監(jiān)護(hù)人的同意，并簽署了知情同意書(shū)。

2.2 聽(tīng)力學(xué)診斷

完善患兒AABR、聲導(dǎo)抗、耳科?？茩z查，排除因中耳炎、外耳炎等耳聾，對(duì)部分患兒進(jìn)行顳骨CT掃描，耳聾分級(jí)以世界衛(wèi)生組織1997年日內(nèi)瓦會(huì)議聽(tīng)力障礙分級(jí)為標(biāo)準(zhǔn)[3]，均有不同程度聽(tīng)力損害，其中輕度占81例，中度26例，重度及極重度10例。

2.3 基因檢測(cè)方法

抽取患者3ml靜脈血或足跟血，送往天津華大基因科技有限公司科學(xué)研究所對(duì)其最常見(jiàn)的四個(gè)耳聾基因20個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)方法采用基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜[4]。檢測(cè)位點(diǎn)如下：線粒體12SrRNA c.1555A＞G、c.1494C＞T，GJB2基因35delG、167delT、176_191del16、235delC、299_300 delAT，GJB3基因538C＞T、547G＞A,SLC26A4基因281C＞T、589G＞A、IVS7-2A＞G、1174A＞T、1226G＞A、1229C＞T、IVS15+5G＞A、1975G＞C、2027T＞A、2162C＞T、2168A＞G。

結(jié)果

117例患兒中檢出GJB2基因突變13例（11.11%， 13/117），其中235delC純合突變2例（1.71%，2/117），235delC雜合突變5例（4.27%，5/117），299delAT純合突變2例（1.71%，2/117），299delAT雜合突變3例（2.56%，3/117），235delC/299delAT復(fù)合雜合突變1例（0.85%，1/117）；SLC26A4基因突變12例（10.26%，12/117），其中IVS7-2A＞G純合突變2例（1.71%），IVS7-2A＞G雜合突變4（3.42%，4/117），IVS7-2A＞G/2168A＞G復(fù)合雜合突變2例（1.71%，2/ 117），IVS7-2A＞G/2162C＞T復(fù)合雜合突變 1例（0.85%，1/117），IVS7-2A＞G雜合突變3例（2.56%，3/117）。GJB2基因235delC雜合和SLC26A4基因IVS7-2A＞G雜合突變2例（1.71%，2/117）；未檢查出GJB3基因突變；其余為野生型。(見(jiàn)表1)

表1 117例患者的基因檢測(cè)結(jié)果

討論

先天性聾是眾多先天性疾病中最常見(jiàn)之一,位列我國(guó)五大常見(jiàn)先天性疾病之首，發(fā)病率約為千分之一，這其中約有一半為遺傳因素導(dǎo)致[5,6]。根據(jù)遺傳方式對(duì)遺傳性耳聾分類四大類，其中最常見(jiàn)為常染色體隱性遺傳，占60%～70%，其次為常染色顯性遺傳，占20%～30%，約2%左右為X連鎖和線粒體遺傳[7,8]。其中，約有70%的患兒無(wú)合并有其他臨床特征，稱之為非綜合征型耳聾（NSHI）。劉學(xué)忠等[9]報(bào)道顯示，國(guó)人遺傳性聾的最常見(jiàn)致病基因分別是：GJB2、SLC26A4、GJB3、線粒體12SrRNA基因。我們的117聽(tīng)力障礙嬰幼兒的耳聾致病基因篩查是針對(duì)這四個(gè)基因的20個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行的。

導(dǎo)致NSHI耳聾最常見(jiàn)的致病基因是GJB2基因[10]。GJB2基因DNA全長(zhǎng)為4804bp，定位于13q11-q12，有2個(gè)外顯子。已有100多個(gè)突變位點(diǎn)被發(fā)現(xiàn)，約90%常染色體隱性遺傳，最常見(jiàn)的是錯(cuò)義突變、無(wú)義突變等，同時(shí)也包括點(diǎn)缺失、移碼、插人和缺失等突變模式。同時(shí)是國(guó)內(nèi)外目前研究最為廣泛的致病基因，幾乎覆蓋整個(gè)編碼區(qū)；各個(gè)國(guó)家GJB2導(dǎo)致耳聾的頻率不盡相同，匈牙利耳聾患者中報(bào)道最高，GJB2基因突變占遺傳性隱性非綜合征型聾為46%[11]。在我國(guó)，檢出率為21%[12,13]其中，235delC突變占耳聾致病性突變中占到78.79%，最常見(jiàn)的GJB2基因突變順序依次為 235delC、299delAT、176del16和35delG[12-15]。在我們檢測(cè)的117例病例中，檢出率較低，檢測(cè)出有GJB2致病突變的為13例（11.11%，13/117），并確診了5例，攜帶者為8例。同時(shí)確診患兒經(jīng)行AABR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)有4例為重度耳聾，1例為輕度耳聾。導(dǎo)致陽(yáng)性檢出率低的可能以下原因：①早期報(bào)道目標(biāo)人群主要為重度極重度聽(tīng)力障礙人群，其中輕度聽(tīng)力障礙人群所占比例較少。②本次檢測(cè)GJB2基因熱點(diǎn)突變，未經(jīng)行全序列測(cè)序分析，存在假陰性的可能。其中最常見(jiàn)的突變位點(diǎn)為235delC，其中純合突變2例，單雜合突變5例。王國(guó)建等[16]認(rèn)為約70%～90%GJB2單雜合突變可以經(jīng)測(cè)序檢測(cè)到另一個(gè)病理性突變位點(diǎn)，我們將采用測(cè)序測(cè)序法對(duì)這7位患者的GJB2基因進(jìn)行全序列測(cè)序，尋找另一個(gè)潛在存在的致病突變位點(diǎn)。本次檢測(cè)還發(fā)現(xiàn)在GJB2基因突變陽(yáng)性人群中，檢測(cè)出合并SLC26A4 IVS7-2A＞G雜合突變耳聾患兒度2例，同時(shí)進(jìn)行顳骨高分辨率CT檢測(cè)，未發(fā)現(xiàn)解剖結(jié)構(gòu)異常。下一步對(duì)其GJB2、SLC26A4進(jìn)行全序列測(cè)序以尋找另一個(gè)可能存在的致病位點(diǎn)。

SLC26A4基因突變是我國(guó)致聾第二位基因。該基因位于染色體7q22.3-2q31。共含有21個(gè)外顯子，編碼1個(gè)Pendrin蛋白質(zhì)，由780個(gè)氨基酸的組成。該蛋白是一種跨膜碘/氯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，具有高度疏水性。該基因發(fā)生突變可引起Pendred綜合征（簡(jiǎn)稱PS），PS是最常見(jiàn)的綜合征型耳聾，其解剖特點(diǎn)為：有耳蝸發(fā)育異常、先天性感音神經(jīng)性聽(tīng)力障礙以及彌漫性甲狀腺腫，遺傳模式為常染色體隱形遺傳疾病。SLC26A4基因具有較強(qiáng)的遺傳異質(zhì)性，其突變廣泛，目前國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的200余種突變類型，除外顯子20上，其他外顯子均有突變報(bào)道。在不同的國(guó)家地區(qū)中具有各自的特異性的突變特點(diǎn)，在中國(guó)其最常見(jiàn)的突變類型則是IVS7-2A＞G和2168A＞G兩個(gè)突變等位基因頻率最高，分別可達(dá)44.11%和11.60%[17]。其余可見(jiàn)1226G＞A、1975G＞C、1229C＞T、1174A＞T、1687_1692insA、IVS15+5G＞A、2027T＞A、589G＞A、281C＞T等。因此，選擇性對(duì)以上基因優(yōu)先進(jìn)行篩查，這樣可以提高篩查效率，降低篩查成本目的。本次調(diào)查中，共檢測(cè)出12例（10.27%，12/117）嬰幼兒攜帶有SLC26A4突變，確診5例，攜帶者7例。同時(shí)我們對(duì)其中23例（所有重度極重度患兒，部分輕、中度患兒）進(jìn)行顳骨CT掃描發(fā)現(xiàn)，SLC26A4突變確診5例患兒均表現(xiàn)為雙側(cè)的前庭導(dǎo)水管的擴(kuò)大，7例攜帶者中未發(fā)現(xiàn)有該病變。同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)一例單側(cè)前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大患兒，但是基因檢測(cè)未檢測(cè)到攜帶有SLC26A4突變。黃莎莎等[18]認(rèn)為，單側(cè)前庭導(dǎo)水管擴(kuò)大可能和SLC26A4之外的基因突變或者其他因素有關(guān)。我們同時(shí)還對(duì)攜帶有SLC26A4突變的患兒經(jīng)行頸部甲狀腺的B超檢測(cè)，暫未發(fā)現(xiàn)有甲狀腺腫大。但是這并不能排除PS可能，早期的研究發(fā)現(xiàn)[19]初期的甲狀腺腫多發(fā)生于兒童期，20～30歲之間最明顯。因此我們對(duì)這部分嬰幼兒應(yīng)建議定期的甲狀腺檢測(cè)。

此次調(diào)查結(jié)果顯示，對(duì)聽(tīng)力障礙嬰幼兒進(jìn)行常見(jiàn)耳聾基因篩查，其中GJB2和SLC26A4均有較高的檢出率，并且部分患兒能夠從分子水平進(jìn)行診斷。這有助于盡早明確患兒耳聾的病因并進(jìn)行干預(yù)和康復(fù)，應(yīng)該將耳聾基因檢測(cè)作為一個(gè)常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行普及。

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（收稿:2015-03-11 修回：2015-06-11）

江蘇省科技支撐計(jì)劃（BE2012706）

1 揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院暨蘇北人民醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科（揚(yáng)州，225001）

2 江西省兒童醫(yī)院耳鼻咽喉科

3 揚(yáng)州市婦幼保健院耳鼻咽喉科

關(guān)兵，主任醫(yī)師.Email:aliceguan0685@sina.com