劉天釗李曉青劉俊江張艷玲梁 巖

1(北京大學(xué)深圳醫(yī)院 深圳 518036)

2(中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院食品安全及環(huán)境技術(shù)研究室 深圳 518055)

ATP 熒光檢測法檢測醫(yī)院電梯按鈕表面細(xì)菌總數(shù)

劉天釗1李曉青2劉俊江2張艷玲2梁 巖2

1(北京大學(xué)深圳醫(yī)院 深圳 518036)

2(中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院食品安全及環(huán)境技術(shù)研究室 深圳 518055)

使用 ATP 熒光快速檢測法測定了北京大學(xué)深圳醫(yī)院 16 部電梯按鈕表面的細(xì)菌總數(shù)。按照 GB15982-2012評價標(biāo)準(zhǔn)評價，消毒前合格率為 72.92%，消毒后合格率為 93.75%。ATP 發(fā)光強度對數(shù)值與表面細(xì)菌總數(shù)對數(shù)值線性關(guān)系為y＝1.12048x－0.66611，相關(guān)系數(shù)R2＝0.95797。分析主要影響因素為人員類型及人流量。ATP 熒光檢測法能夠快速、準(zhǔn)確對醫(yī)院電梯按鈕表面細(xì)菌總數(shù)進(jìn)行測定，可以有效反映醫(yī)院公共衛(wèi)生狀況，防止交叉感染。

電梯；表面細(xì)菌總數(shù)；ATP 熒光；醫(yī)院清潔

1 引 言

電梯作為現(xiàn)代化醫(yī)院的標(biāo)志，能夠為上下樓人員提供方便、快捷、省時、省力的運輸。在現(xiàn)代社會生活中，大家為了節(jié)省時間和體力，大多數(shù)人更傾向于選擇乘坐電梯，因此電梯是醫(yī)院流動人群相對集中的場所之一。醫(yī)院的電梯日流量通常為 1000～3000 人，主要包括患者、陪護(hù)人員、探視人員、醫(yī)護(hù)人員以及行政人員[1]。在電梯各個部分中，電梯按鈕是人員接觸最多卻最容易被忽視的一個部分，其中以上下樓鍵、開關(guān)門鍵及一樓鍵的使用頻率最高，是引起醫(yī)院感染的一個重要傳播媒介。北京大學(xué)深圳醫(yī)院是深圳大型的三級甲等醫(yī)院，每日有大量人員流動，因此評估電梯衛(wèi)生狀況對防止交叉感染有重要意義。目前醫(yī)院每日會定時安排清潔工對電梯進(jìn)行擦拭消毒，使用的有機氯消毒液在眾多報道中均有較好的殺菌效果。但由于不同電梯用途和使用率不同，目前的消毒方式和消毒頻率是否能夠起到預(yù)期的作用尚不明確。此外，目前針對電梯衛(wèi)生的研究并不多，且大多采用棉拭子法采樣和平板菌落法檢測，采樣和檢測時間長，不利于快速監(jiān)控。三磷酸腺苷(Adenosine Triphosphate，ATP)生物熒光檢測法作為一種新型的微生物快檢方法，其原理是對微生物體內(nèi) ATP 含量進(jìn)行熒光檢測，通過相對發(fā)光強度(Relative Light Unit，RLU)對微生物含量進(jìn)行定量。

在國外利用 ATP 熒光快速檢測法監(jiān)控微生物以及表面清潔度被越來越多的采用[2]。1996年 Siragusa 等[3]發(fā)現(xiàn)了新型的微生物 ATP 熒光檢測法用來檢測家禽尸體上的微生物。Aycicek等[4]利用 ATP 熒光快速檢測法測定了醫(yī)院廚房里器具表面的清潔度并跟傳統(tǒng)的擦拭采樣法進(jìn)行了比較。其研究結(jié)果顯示，ATP 熒光快速檢測法能更迅速得出結(jié)果，更利于衛(wèi)生防控。本文利用 ATP 熒光快速檢測法檢測電梯表面細(xì)菌總數(shù)在外文文獻(xiàn)中未見報道過。

與傳統(tǒng)微生物檢測方法相比，ATP 熒光檢測法的測試時間短，操作簡便，能夠快速檢測微生物的含量[5-7]。因此，使用 ATP 熒光檢測法能夠快速了解電梯按鈕上細(xì)菌污染的狀況以及消毒效果的評估，對于改善醫(yī)院衛(wèi)生環(huán)境、減少醫(yī)院內(nèi)交叉感染以及醫(yī)院日常衛(wèi)生控制有重要意義。

2 材料與方法

2.1 材 料

2.1.1 實驗對象

實驗對象為北京大學(xué)深圳醫(yī)院門診部、肝炎腸道門診、住院部、住院北樓、手術(shù)梯、行政樓、行政貨梯共 16 個電梯消毒前和消毒后的內(nèi)外按鈕表面，采樣位置包括上樓、下樓、開門、關(guān)門、一層、二層、三層、四層一共 8 個按鈕，總面積為90～120 cm2。

2.1.2 檢測設(shè)備

檢測設(shè)備為 Clean-trace ATP 熒光檢測儀及采樣棒(美國 3M 公司)、Petrifilm 菌落總數(shù)測試片(美國 3M 公司)和恒溫微生物培養(yǎng)箱(上海一恒儀器有限公司)。

2.2 方 法

2.2.1 樣本采集

醫(yī)院統(tǒng)一消毒時間為每日 14:00，醫(yī)院清潔人員使用 1/500 質(zhì)量濃度的有機氯消毒液對物體表面進(jìn)行擦拭。消毒前采樣時間為 13:30，消毒后采樣時間為 14:30。按如下方式采樣：從 ATP采樣棒中取出棉簽，分別對 2.1.1 中的實驗對象進(jìn)行表面涂抹，盡量涂抹充分均勻，且每個樣本涂抹的方式保持一致。將涂抹后的棉簽插回采樣棒中震蕩 20 次使其充分反應(yīng)。將采樣棒放入ATP 熒光檢測儀中檢測其發(fā)光強度 RLU 值，記錄檢測結(jié)果，同時記錄測量采樣面積，完成一個樣本的采集。在連續(xù) 3 個工作日的同一時間對消毒前和消毒后的實驗對象分別采樣，消毒前后各48 個樣本，總共 96 個樣本。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線

按照《GB15982-2012 醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》[8]中“物體表面微生物污染檢查方法”，使用沾有無菌生理鹽水的無菌棉拭子進(jìn)行涂抹采樣，迅速剪下棉拭子置于 10 mL 無菌生理鹽水試管中送檢，得到細(xì)菌總數(shù)(Colony-Forming Units，CFU)值。同時取 100 μL～1 mL 試管中的采樣液進(jìn)行不同梯度稀釋后使用 ATP 熒光檢測法檢測，得到對應(yīng)的 RLU 值。將 lg(CFU)和 lg(RLU)進(jìn)行線性分析，得到對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線公式。

2.2.3 結(jié)果計算

將 RLU 檢測結(jié)果通過 2.2.2 中標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得到 CFU 值，即樣品總表面的細(xì)菌總數(shù)，除以實際采樣面積(以 cm2為單位)即單位面積的細(xì)菌總數(shù)。

2.2.4 結(jié)果評價

《GB15982-2012 醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定 IV類環(huán)境物體表面平均菌落總數(shù)不得超過10 CFU/cm2，按照該限值對 2.2.3 結(jié)果進(jìn)行判定。

2.2.5 人員類型

與醫(yī)院清潔人員、醫(yī)護(hù)人員溝通，了解不同電梯的使用人群類型。

2.2.6 人流量評估

隨機選取 3 日于 10:30 在樣本電梯一樓門口，統(tǒng)計 15 分鐘內(nèi)進(jìn)入電梯的人數(shù)，統(tǒng)計結(jié)果最終取平均值。

3 結(jié)果與分析

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

按照 2.2.2 方法獲得 CFU 值與其對應(yīng) RLU值。使用 Origin Pro 8.0 軟件進(jìn)行分析，RLU 值的對數(shù)與 CFU 值的對數(shù)呈顯著線性相關(guān)，線性方程y＝1.12048x－0.66611，相關(guān)系數(shù)R2＝0.95797，如圖 1。

3.2 樣本檢測結(jié)果

對 16 個不同電梯的按鈕消毒前后的細(xì)菌總數(shù)使用 ATP 熒光檢測法進(jìn)行檢測，結(jié)果見圖 2。消毒前檢測結(jié)果表明，門診部電梯、手術(shù)電梯、住院北樓檢測結(jié)果較高，最高達(dá)到了 12.13 CFU/cm2，消毒前 48 個樣本中合格率為 72.92%。消毒后大部分檢測結(jié)果均遠(yuǎn)低于《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定的細(xì)菌總數(shù)限值 10 CFU/cm2(如圖中紅線所示)，48 個樣本中合格率達(dá)到 93.75%。消毒前后對比發(fā)現(xiàn)，除行政貨梯外，所有的電梯按鈕細(xì)菌總數(shù)均有明顯的降低，其中門診部及住院部變化較大。

圖 1 lg(RLU)與 lg(CFU)的線性關(guān)系Fig. 1 Linear relationship between lg(RLU) and lg(CFU)

圖 2 電梯按鈕表面細(xì)菌總數(shù)檢測結(jié)果Fig. 2 CFU testing result of surface microbial count of elevator buttons

3.3 電梯使用人群類型及人流量

通過醫(yī)院相關(guān)人員我們了解到，不同區(qū)域電梯的乘坐人員類型和人流量均有著較大差異，結(jié)果見表 1。電梯使用人員類型主要包括病患人員、陪同或探視人員、醫(yī)護(hù)人員以及行政人員。16 部電梯中，門診部和住院部的人群類型最為復(fù)雜，幾乎涵蓋所有的人員類型，而其人流量也遠(yuǎn)高于其他區(qū)域電梯，門診部 2 部電梯、住院部 3號梯以及住院北樓 1 號梯的使用頻率最高；行政樓電梯則基本上為非患者使用；行政貨梯主要是搬運貨物的人員使用。由結(jié)果可以看出，細(xì)菌總數(shù)檢測結(jié)果較高的電梯如門診部及肝炎腸道門診等，其人員類型更復(fù)雜，人流量也較其他電梯更高，人員類型復(fù)雜程度及人流量與細(xì)菌總數(shù)基本呈正相關(guān)。

表 1 不同電梯使用人群類型及人流量比較Table 1 Types and flow value of people using elevators

4 討 論

醫(yī)院公共衛(wèi)生環(huán)境影響著病患、陪同人員以及工作人員的健康，防止醫(yī)院感染至關(guān)重要。據(jù)觀察，幾乎所有人員在去二樓以上樓層時都會選擇乘坐電梯，因此電梯的使用頻率相當(dāng)高，電梯按鈕可以在一定程度上反映醫(yī)院公共衛(wèi)生狀況。本研究通過使用 ATP 熒光快速檢測法檢測消毒前后 16 部電梯按鈕表面的細(xì)菌總數(shù)，消毒前合格率為 72.92%，消毒后合格率為 93.75%。本研究檢測結(jié)果明顯好于大部分其他研究結(jié)果[1,9-13]，表明北京大學(xué)深圳醫(yī)院的清潔制度對于電梯按鈕的衛(wèi)生控制非常有效。消毒后的大部分檢測結(jié)果均遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)限值，說明有機氯消毒液適用于電梯按鈕消毒。門診部、住院部、行政樓的電梯消毒強度都較好，但手術(shù)電梯和行政貨梯的消毒強度還需加強。

影響電梯衛(wèi)生狀況的主要因素包括人員類型及人流量。門診部人員類型最復(fù)雜且每天有著巨大的人流量，住院部人員類型也較多但人流量適中，行政樓的人員種類單一且人流量相對較少。醫(yī)院目前對于所有的電梯基本上采用同樣的消毒方式和消毒頻率，但由于其中一部分常用電梯的使用頻率較高，消毒后很快就可能回到消毒前的衛(wèi)生狀態(tài)。因此，醫(yī)院應(yīng)該針對不同區(qū)域電梯的具體人員類型和人流量制定相應(yīng)的清潔頻率，加強對門診部和住院部區(qū)域電梯的清潔。

本研究使用 ATP 熒光快速檢測法，發(fā)光強度與細(xì)菌總數(shù)有較好的線性關(guān)系，能夠準(zhǔn)確反映真實檢測結(jié)果。傳統(tǒng)檢測法需要進(jìn)行微生物培養(yǎng)，通常需要 48～72 小時，而 ATP 熒光快速檢測法檢測一個樣本僅需要 3～5 分鐘。因此，ATP 熒光檢測法可以作為醫(yī)院日常監(jiān)控公共衛(wèi)生環(huán)境的方法。

[1] 郭晨霞, 李萬蘭. 醫(yī)院電梯微生物污染監(jiān)測 [J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2012, 22(20): 4579-4579.

[2] Favero MS, Gabis DA, Vesley D. Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods [M]. Washington DC: American Public Health Associaton, 1984: 49-54.

[3] Aycicek H, Oguz U, Karci K. Comparison of results of ATP bioluminescence and traditional hygieneswabbing methods for the determination of surface cleanliness at a hospital kitchen [J]. International Journal of Hygiene and Environmental Health, 2006, 209(2): 203-206.

[4] Siragusa GR, Dorsa WJ, Cutter CN, et al. Use of a newly developed rapid microbial ATP bioluminescence assay to detect microbial contamination on poultry carcasses [J]. Journal of Bioluminescence and Chemiluminescence, 1996, 11(6): 297-301.

[5] 曹澤紅, 李勇. ATP 生物熒光法在食品微生物檢驗上的應(yīng)用 [J]. 彭城職業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2003, 18(5): 96-98.

[6] 王茁. ATP 熒光微生物檢測法在食品衛(wèi)生監(jiān)控領(lǐng)域中的應(yīng)用與展望 [J]. 中國食品衛(wèi)生雜志, 2004, 16(3): 266-267.

[7] 史帥. ATP 熒光法快檢系統(tǒng)實現(xiàn)細(xì)菌總數(shù)的快速檢測 [J]. 食品安全導(dǎo)刊, 2008, 3(1): 51-52.

[8] GB15982-2012. 醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) [S].

[9] 吳志堅, 歐陽育琪, 陳亞光. 醫(yī)院電梯按鈕細(xì)菌污染的調(diào)查 [J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2002, 12(10): 771-772.

[10] 馮萍, 黃小慧. 醫(yī)用電梯內(nèi)環(huán)境細(xì)菌學(xué)監(jiān)測與分析[J]. 中華醫(yī)院感染學(xué)雜志, 2004, 14(3): 316-316.

[11] 劉魯霞, 查紅, 冷瓊芳. 醫(yī)院電梯按鈕細(xì)菌學(xué)調(diào)查及預(yù)防措施 [J]. 西南軍醫(yī), 2004, 6(5): 51-51.

[12] 馬宏. 醫(yī)院電梯按鈕細(xì)菌污染情況檢測分析 [J].錦州醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2005, 26(3): 89-89.

[13] 陳利. 醫(yī)院電梯按鈕的細(xì)菌污染調(diào)查 [J]. 實用醫(yī)技雜志, 2008, 15(16): 2172-2172.

Detection of Surface Microbial Count on Elevator Buttons of Hospital Using ATP Bioluminescence Method

LIU Tianzhao1LI Xiaoqing2LIU Junjiang2ZHANG Yanling2LIANG Yan2

1(Peking University Shenzhen Hospital,Shenzhen518036,China)
2(Laboratory for Food Safety and Environmental Technology,Shenzhen Institutes of Advanced Technology,Chinese Academy of Sciences,Shenzhen518055,China)

Microbial count on surface of buttons in 16 elevators in Peking University Shenzhen Hospital was detected using ATP bioluminescence method. The quantification significantly correlated with the pour plate method (y＝1.12048x－0.66611,R2＝0.95797). According to the GB15982-2012 standard, about 72.92% unsterilized samples and 95.83% sterilization samples were acceptable. Factors affecting general hygiene condition in elevators were mainly people types and flux. In general, ATP bioluminescence method was demonstrated to be a reliable fast testing method for quantifying microbial contamination on surface of elevator buttons, which therefore could serve as a good indicator of public hygiene surveillance and management in hospitals. This is important for preventing cross-infection.

elevator; surface microbial count; ATP bioluminescence; hospital hygiene

R 187

A

2015-02-03

：2015-04-21

劉天釗，碩士，助理研究員，研究方向為醫(yī)院衛(wèi)生管理；李曉青，碩士，研究方向為食品科學(xué)；劉俊江，碩士，研究方向為食品檢測；張艷玲，博士，研究方向為環(huán)境科學(xué)；梁巖(通訊作者)，博士，助理教授，研究方向為環(huán)境科學(xué)、環(huán)境微生物/毒理、食品微生物等，E-mail：yan.liang@siat.ac.cn。