趙 磊，薛 劍，杜君曉，王瑜玲，王 偉

(石家莊市第五醫(yī)院結(jié)核科/石家莊市結(jié)核病防治研究所，河北石家莊 050000)

干擾素釋放試驗(yàn)在AIDS合并結(jié)核感染患者中的診斷價(jià)值

趙 磊，薛 劍，杜君曉，王瑜玲，王 偉

(石家莊市第五醫(yī)院結(jié)核科/石家莊市結(jié)核病防治研究所，河北石家莊 050000)

目的 評價(jià)4種診斷方法對人獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)合并結(jié)核病(TB)患者的診斷價(jià)值。方法將52例人類免疫缺陷病毒(HIV)感染合并TB患者作為觀察組，100例未感染HIV的TB患者為對照組，對兩組患者進(jìn)行結(jié)核菌素(PPD)試驗(yàn)、痰結(jié)核菌培養(yǎng)、結(jié)核抗體和γ干擾素釋放試驗(yàn)(IGRA)進(jìn)行診斷。結(jié)果對照組患者PPD試驗(yàn)、痰結(jié)核菌培養(yǎng)和結(jié)核抗體陽性率明顯高于觀察組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；而IGRA陽性率兩組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；觀察組IGRA陽性明顯高于PPD試驗(yàn)、痰結(jié)核菌培養(yǎng)和結(jié)核抗體陽性率，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療觀察組患者IGRA陰性發(fā)生率明顯高于陽性率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論IGRA是診斷HIV感染合并TB的敏感方法，而抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療可能對結(jié)果有一定的影響。

獲得性免疫缺陷綜合征；HIV；結(jié)核；γ干擾素釋放試驗(yàn)

結(jié)核病(tuberculosis，TB)是全球范圍內(nèi)主要的傳染病之一，有研究顯示，全世界 60 億人口中大約有 20 億人口感染結(jié)核桿菌，并且每年新增TB患者 800 萬至1 000 萬，TB再次成為危害人類健康和生命安全的主要疾病之一[1-2]。研究顯示，人感染人免疫缺陷病毒(human immunodificiency virus，HIV)后，TB的發(fā)病率增高30%～50%，根據(jù)WHO的研究顯示，TB是導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合征(cquired immunodeficiency syndrome，AIDS)患者死亡的首要原因，大約有25%的AIDS患者死亡原因是TB[3]，其中2010年新增110萬例HIV /TB患者，當(dāng)年有35萬HIV感染患者死于TB，并且HIV/TB雙重感染的數(shù)量與日俱增，研究一種適用于HIV感染合并TB的診斷方法已迫在眉睫，為此本研究對4種TB診斷方法在HIV感染合并TB患者中的診斷價(jià)值進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2010 年1月至2013年9月在石家莊市第五醫(yī)院診治的HIV感染合并TB患者52例(觀察組)，其中男34例，女18例，平均年齡(34.23±11.32)歲。52例患者均經(jīng)過 HIV 確認(rèn)試驗(yàn)(Western blot 免疫印跡法)2次確定為陽性，其中T淋巴細(xì)胞亞群CD4+≥200 mm341例，CD4+<200 mm311例)；無癥狀期42例，艾滋病期10例。選取同期在本院住院治療的TB患者100例為對照組，男65例，女35例，平均年齡(36.34±14.32)歲。兩組患者均符合TB的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且均排除急性病毒感染，嚴(yán)重肝、腎衰竭等病史。兩組患者年齡、性別比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1結(jié)核菌素(PPD)試驗(yàn)及痰結(jié)核桿菌培養(yǎng) PPD試驗(yàn)：在前臂內(nèi)側(cè)注射PPD 5個(gè)單位，72 h測量其硬結(jié)大小。痰結(jié)核桿菌培養(yǎng)：患者入院后連續(xù)3 d取清晨痰，由本院細(xì)菌室經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)科醫(yī)師進(jìn)行培養(yǎng)檢查。

1.2.2血清結(jié)核抗體檢測 采用結(jié)核分枝桿菌抗體檢測試劑盒(上海凱士佰科技有限公司提供)進(jìn)行分析，具體步驟及判斷方法嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.2.3γ干擾素釋放試驗(yàn)(interferon gamma release assay,IGRA)方法 (1)血樣采集：兩組患者于入院次日清晨抽取空腹靜脈血3 mL，置于真空肝素抗凝管中。(2)刺激采血后6 h內(nèi)在生物安全柜內(nèi)將靜脈血加入24孔培養(yǎng)板內(nèi)(1 mL/孔)，共5孔，每孔依次加入植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)、培養(yǎng)濾過蛋白-10(culture filtrate protein,CFP-10)、早期分泌抗原靶-6(early secretory antigenic target,ESAT-6)、ESAT-6/CFP-10融合抗原和生理鹽水，所有操作均按生產(chǎn)供應(yīng)商要求進(jìn)行。(3)孵育于5%CO2、37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱孵育過夜16～22 h。(4)每孔收集血漿至少300 μL，于-20 ℃保存不超過28 d。(5)采用海口維瑅璦生物研究院生產(chǎn)的IFN-γ檢測試劑盒檢測，嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行操作。結(jié)果判定：當(dāng)N<0.5 IU/mL時(shí)，(T-N)/(P-N) ≥0.06時(shí)判為陽性，否則為陰性；當(dāng)N≥0.5 IU/mL時(shí)，(T-N)/(P-N) ≥0.85時(shí)判為陽性，否則為陰性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05視為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.14種診斷方法陽性率觀察 對照組PPD實(shí)驗(yàn)、痰結(jié)核菌培養(yǎng)和結(jié)核抗體檢測陽性率明顯高于觀察組(P<0.01)；而IGRA陽性率兩組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；觀察組IGRA陽性明顯高于PPD實(shí)驗(yàn)、痰結(jié)核菌培養(yǎng)和結(jié)核分枝桿菌抗原陽性率，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表1。

表1 不同診斷方法陽性率比較[n(%)]

2.2影響IGRA陽性率相關(guān)因素分析 不同性別、感染方式及CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)在HIV感染合并TB患者的IGRA陽性率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而經(jīng)過抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療HIV感染合并TB患者IGRA陰性發(fā)生率明顯高于陽性率(P<0.05)，見表2。

表2 影響IGRA陽性率相關(guān)因素調(diào)查

續(xù)表2 影響IGRA陽性率相關(guān)因素調(diào)查

3 討 論

TB是一種嚴(yán)重危害人類身體健康的傳染性疾病病，并且21世紀(jì)以來全球范圍內(nèi)TB的死灰復(fù)燃趨勢[4-5]。中國是全球TB高負(fù)擔(dān)國家之一，以往的流行病調(diào)查中國已有1/3 以上的人口感染了結(jié)核菌，其中活動性肺TB患者450萬，每年死于TB的患者約有25萬，是其他各類傳染性疾病死亡人數(shù)總和的2倍[6]。而且，HIV感染逐漸由高危人群向普通人群播散，HIV的感染呈現(xiàn)持續(xù)增加的趨勢。人體感染HIV后，HIV 主要攻擊人的 CD4+T細(xì)胞，從而導(dǎo)致機(jī)體免疫功能受損，是導(dǎo)致結(jié)核菌感染發(fā)展成為活動性結(jié)核患者最重要的危險(xiǎn)因素[7]，并且相對于非HIV感染的TB患者，HIV感染合并TB的診斷和治療更為困難，并且HIV感染合并TB因?yàn)闄C(jī)體免疫功能受損導(dǎo)致TB擴(kuò)散較為迅速[8]，患者隨時(shí)有生命危險(xiǎn)，因此及時(shí)診斷并控制TB對HIV感染患者提高生存率至關(guān)重要。但HIV感染合并TB，PPD試驗(yàn)的假陰性、影像學(xué)結(jié)核病灶表現(xiàn)不典型，因此，尋找一種敏感的檢測方法具有重要的臨床價(jià)值和社會意義。

本研究采用PPD試驗(yàn)、痰結(jié)核菌培養(yǎng)、結(jié)核抗體及IGRA對HIV感染合并TB患者進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，PPD試驗(yàn)、痰結(jié)核菌培養(yǎng)、結(jié)核抗體在單純TB患者中的陽性率明顯高于HIV感染合并TB患者，而IGRA的陽性率兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，說明IGRA在HIV感染合并TB的診斷中具有重要的輔助診斷價(jià)值。這可能是因?yàn)閭鹘y(tǒng)的診斷TB方法有痰結(jié)核菌培養(yǎng)、PPD試驗(yàn)、結(jié)核抗體等檢測方法在檢測HIV感染合并TB中均存在不同的局限性。痰結(jié)核桿菌培養(yǎng)：培養(yǎng)周期較長，培養(yǎng)基2～3周未見結(jié)核桿菌，則需觀察至45 d才能出最后結(jié)果[9]，會延誤臨床診斷，并且影響培養(yǎng)陽性率的因素較多，培養(yǎng)陽性率相對于IGRA較低。由于中國大面積接種卡介苗導(dǎo)致PPD試驗(yàn)存在假陽性，且對于HIV感染合并TB患者屬于免疫低下人群，假陰性率較大[10-11]，鄭素華等[12]對HIV感染合并TB患者研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)患者CD4+T淋巴細(xì)胞小于200 mm3時(shí)，PPD試驗(yàn)無反應(yīng)，因此此方法只能作為TB的輔助診斷。結(jié)核抗原常規(guī)檢測方法較復(fù)雜，并且也受到免疫力的影響，導(dǎo)致HIV合并TB 患者陽性率同樣低下。IGRA其原理是TB患者體內(nèi)存在特異的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，當(dāng)在體外再次受到結(jié)核桿菌特異抗原(ESAT-6與CFP-10)的刺激時(shí)，會分泌釋放IFN-γ，因此，通過檢測IFN-γ的水平可以判斷機(jī)體是否存在結(jié)核感染[13]。Mori等[14]進(jìn)行的大模多中心實(shí)驗(yàn)顯示，IGRA在針對TB中敏感性為89.0%，特異性為98.1%，本研究IGRA顯示，對于HIV感染合并TB的敏感性80.77%，較對照組有所下降，這可能是因?yàn)镮FN-γ主要由 CD4+T 細(xì)胞分泌產(chǎn)生，HIV感染后導(dǎo)致CD4+T 細(xì)胞下降，然而CD8+T 細(xì)胞、γδT 細(xì)胞也可以少量分泌IFN-γ，從而導(dǎo)致該試驗(yàn)受CD4+T淋巴細(xì)胞的影響并不十分明顯[15]，因此本研究認(rèn)為可以應(yīng)用于HIV感染合并TB的診斷中。

為了分析導(dǎo)致HIV感染合并TB患者IGRA出現(xiàn)假陰性的因素，本研究對HIV感染合并TB患者IGRA陽性和陰性的相關(guān)資料進(jìn)行了對比分析，結(jié)果顯示性別、感染方式及CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)對于IGRA結(jié)果影響并不明顯，而經(jīng)過抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療HIV感染合并TB患者IGRA陰性發(fā)生率較高，這一結(jié)果可能是因?yàn)楸狙芯繕颖玖枯^小有關(guān)，也可能是因?yàn)榻?jīng)過抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療對機(jī)體的免疫功能有影響，有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究認(rèn)為IGRA在診斷HIV感染合并TB患者中敏感度較高，值得臨床推廣應(yīng)用，但是本研究存在因?yàn)椴±Y源有限，樣本量過少的局限性，導(dǎo)致結(jié)果難免存在偏差，因?yàn)楸狙芯繉⑦M(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行研究。

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Diagnostic value of interferon-γ release test in acquired immune deficiency syndrome complicating tuberculosis infection*

ZhaoLei,XueJian,DuJunxiao,WangYuling,WangWei

(DepartmentofPhymatiosis,ShijiazhuangMunicipalFifthHospital/ShijiazhuangMunicipalInstituteforTuberculosisControl,Shijiazhuang,Hebei050000,China)

Objective To evaluate the value of the four kinds of diagnostic method in acquired immune deficiency syndrome(AIDS) infection complicating tuberculosis (TB).Methods 52 cases of human immunodeficiency virus(HIV) infection complicating TB were taken as the observation group and 100 cases of TB without complicating HIV infection were taken as the control group.The two groups were performed the PPD test,sputum Mycobacterium tuberculosis culture,tuberculosis antibody and interferon gamma release assay(IGRA) for conducting the diagnosis.Results The positive rate of the PPD test,sputum Mycobacterium tuberculosis culture and tuberculosis antibody in the control group were significantly higher than those in the observation group,the differences were statistically significant (P<0.01);the positive rate of the IGRA in the observation group was obviously higher than that of the PPD test,sputum Mycobacterium tuberculosis culture and tuberculosis antibody,the differences had statistical significance (P<0.01).The negative occurrence rate of the IGRA in the observation group treated by the antiretroviral therapy was obviously higher than the positive rate,the difference was statistically significant (P<0.05).Conclusion The IGRA may be a sensitive method for diagnosing HIV infection complicating TB and the antiretroviral therapy may have a certain impact on the results.

acquired immunodeficiency syndrome;HIV;tuberculosis;interferon gamma release assay

·臨床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.11.014

石家莊科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃基金項(xiàng)目(121461833)；河北省科技技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(12277746)。

趙磊(1982-)，主治醫(yī)師，碩士研究生，主要從事結(jié)核病的診斷與治療研究。

R521

A

1671-8348(2015)11-1484-03

2014-09-08

2015-01-05)