熱比姑麗·伊斯拉木，尤力都孜·買買提，買合素提·卡德?tīng)?，斯拉甫·艾?/p>

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室，烏魯木齊 830054；2.新疆維吾爾醫(yī)方劑學(xué)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830049；3.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，烏魯木齊 830049)

異常黑膽質(zhì)成熟劑對(duì)銀屑病模型小鼠的治療作用*

熱比姑麗·伊斯拉木1，2，3，尤力都孜·買買提2，3，買合素提·卡德?tīng)?，3，斯拉甫·艾白1，2，3

(1.新疆醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室，烏魯木齊 830054；2.新疆維吾爾醫(yī)方劑學(xué)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830049；3.新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所，烏魯木齊 830049)

目的 探討異常黑膽質(zhì)成熟劑對(duì)銀屑病模型小鼠的作用。方法 建立小鼠鼠尾鱗片表皮模型，觀察異常黑膽質(zhì)成熟劑對(duì)該模型病理狀態(tài)影響；建立鹽酸普萘洛爾致小鼠耳部皮膚銀屑病樣模型，觀察異常黑膽質(zhì)成熟劑對(duì)小鼠體質(zhì)量、脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)及病理狀態(tài)的影響。采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法檢查各組小鼠血清白細(xì)胞介素(IL)-10、IL-17、IL-23水平。結(jié)果 2，4，8 g·kg-1異常黑膽質(zhì)成熟劑組小鼠一般狀況、體質(zhì)量均無(wú)明顯異常變化(P>0.05)；2 g·kg-1異常黑膽質(zhì)成熟劑組小鼠胸腺指數(shù)(1.903±0.885)mg·g-1，比模型對(duì)照組(2.841±1.211)mg·g-1明顯降低(P<0.05)；2，4，8 g·kg-1異常黑膽質(zhì)成熟劑組小鼠血清IL-10、IL-17、IL-23水平無(wú)明顯變化(P>0.05)；2，4，8 g·kg-1異常黑膽質(zhì)成熟劑能促進(jìn)小鼠鼠尾表皮顆粒層細(xì)胞的形成，改善小鼠耳部皮膚銀屑病樣組織病理學(xué)變化。結(jié)論 異常黑膽質(zhì)成熟劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性銀屑病有較好的治療作用。

異常黑膽質(zhì)成熟劑；銀屑病，實(shí)驗(yàn)性；指數(shù)，胸腺

銀屑病維吾爾醫(yī)學(xué)名為節(jié)熱比[1]，是指以發(fā)生于全身皮膚，無(wú)傳染性紅斑鱗屑為主要特征的病癥。病因多由在體內(nèi)外不良因素的影響下，體液失衡，氣質(zhì)失調(diào)，堿性黏液質(zhì)偏盛變成為異常黑膽質(zhì)，并凝結(jié)沉著于皮膚，損傷局部所致。異常黑膽質(zhì)型(漢文直譯為非自然黑膽質(zhì))銀屑病在新疆維吾爾自治區(qū)銀屑病患者中比較常見(jiàn)[2-3]。異常黑膽質(zhì)成熟劑(木尼孜其·賽危大依)是維吾爾醫(yī)學(xué)臨床治療異常黑膽質(zhì)型銀屑病的首選藥物(經(jīng)典方劑)，療效確切，無(wú)明顯毒副作用[3-4]。甲氨蝶呤是葉酸拮抗藥，具有很強(qiáng)的免疫抑制作用，是一種傳統(tǒng)的抗銀屑病藥物，臨床療效好、安全性高，且價(jià)格低廉[5]。因小鼠尾部表皮天然缺少顆粒層細(xì)胞，類似銀屑病表皮角化不全病理改變，因而可作為銀屑病角化異常的傳統(tǒng)天然模型[5-7]。筆者通過(guò)實(shí)驗(yàn)性銀屑病小鼠模型，探討其藥效作用。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康昆明種小鼠，130只，雌雄各半，無(wú)特定病原體(specific pathogen free，SPF)級(jí)，體質(zhì)量18～22 g，由新疆實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(新)2011-0001，使用許可證號(hào)：SYXK(新)2011-0006，飼養(yǎng)于新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所藥物安全性評(píng)價(jià)中心SPF級(jí)動(dòng)物房，室溫20～26 ℃，相對(duì)濕度40%～70%，光照、黑暗12 h交替，給予SPF鼠繁殖飼料及純化水。

1.2 藥品與試劑 異常黑膽質(zhì)成熟劑(木尼孜其·賽危大依，維吾爾語(yǔ)命名為Munziq Sawda，批準(zhǔn)文號(hào)：新藥制字M20052635)由新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院制劑室提供。甲氨蝶呤片由上海信誼藥廠有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H31020644，批號(hào)：20130403。鹽酸普萘洛爾片(心得安)由常州康普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H32021276，批號(hào)：1203004。小鼠白細(xì)胞介素(interleukin，IL)-10試劑盒[國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2009第3400951號(hào)]、小鼠IL-17試劑盒[國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字 2012第3401164號(hào)]、小鼠IL-23試劑盒[國(guó)食藥監(jiān)械(準(zhǔn))字2012第3401163，批號(hào)均為：201310]由烏魯木齊西域醫(yī)鳴商貿(mào)有限公司提供。

1.3 儀器 TGL-5-A低速大容量離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；Anthos 2010酶標(biāo)儀、Anthos iWO洗板機(jī)(鄭州安圖實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；DM2500生物顯微鏡、RM2235切片機(jī)(德國(guó)萊卡公司)；KD-BM生物組織自動(dòng)包埋機(jī)、KD-TS3D生物組織自動(dòng)脫水機(jī)(浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司)；KZPG-1A攤片烤片機(jī)(天津天利航空機(jī)電有限公司)。

1.4 異常黑膽質(zhì)成熟劑對(duì)銀屑病模型小鼠的作用

1.4.1 對(duì)小鼠鼠尾鱗片表皮模型的作用 取小鼠60只，適應(yīng)性飼養(yǎng)2 d，檢疫合格后，取50只小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為5組，即正常對(duì)照組，甲氨蝶呤組(劑量1.5 mg·kg-1)，2，4，8 g·kg-1異常黑膽質(zhì)成熟劑組(根據(jù)急性毒性實(shí)驗(yàn)、臨床應(yīng)用量、藥效預(yù)實(shí)驗(yàn)確定劑量)，每組10只，雌雄各半。每10 g體質(zhì)量0.2 mL，每天1次，灌胃給予相應(yīng)藥物連續(xù)20 d。給藥第21天處死小鼠，取鼠尾距離根部3 cm皮膚標(biāo)本，用10%甲醛固定、脫水、石蠟包埋并用蘇木精-伊紅(hematoxylin eosin，HE)染色后在光鏡下觀察。

1.4.2 對(duì)鹽酸普萘洛爾致小鼠耳部皮膚銀屑病樣模型作用 取小鼠70只，適應(yīng)性飼養(yǎng)2 d，檢疫合格后，取60只小鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為6組，即正常對(duì)照組，模型對(duì)照組，甲氨蝶呤組(1.5 mg·kg-1)及2，4，8 g·kg-1異常黑膽質(zhì)成熟劑組，每組10只，雌雄各半。除正常對(duì)照組外，其余各組用5%鹽酸普萘洛爾乳劑(取鹽酸普萘洛爾5 g用50%乙醇溶解，加入月桂氮酮作為透皮吸收促進(jìn)劑，加入聚乙烯吡咯烷酮5 g為成膜材料，再加50%乙醇至100 mL，即得)，均勻涂抹于小鼠雙耳背部皮膚，每耳涂抹0.1 mL，早晚各一次，連續(xù)涂抹20 d(在本實(shí)驗(yàn)室條件下，此模型已成熟，根據(jù)皮膚肉眼觀察可以準(zhǔn)確判斷模型是否成立，建模型動(dòng)物數(shù)為50只，正常對(duì)照組10只)。造模第21天開(kāi)始，除模型對(duì)照組小鼠涂抹造模劑外，其余各給藥組小鼠上午涂抹造模劑，下午灌胃給予相應(yīng)藥物，每10 g 體質(zhì)量0.2 mL，每天1次，連續(xù)20 d。給藥第21天，末次給藥2 h后，取血，隨后取脾臟、胸腺及雙側(cè)耳廓。先稱脾臟、胸腺，后與右側(cè)耳廓一起迅速放入低溫冰箱(-86 ℃)，待測(cè)相關(guān)指標(biāo)。左側(cè)耳廓皮膚標(biāo)本，用10%甲醛固定、脫水、石蠟包埋并用HE染色后在光鏡下觀察。分離血清，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法檢測(cè)小鼠血清IL-10、IL-17、IL-23水平，操作步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行[8-9]。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組，甲氨蝶呤組，2，4，8 g·kg-1異常黑膽質(zhì)成熟劑組小鼠在實(shí)驗(yàn)期間，行為活動(dòng)、皮毛、糞便、飲食等未見(jiàn)異常。

2.2 體質(zhì)量 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組，甲氨蝶呤組，2，4，8 g·kg-1異常黑膽質(zhì)成熟劑組小鼠在實(shí)驗(yàn)期間，體質(zhì)量變化差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1，2。

2.3 胸腺、脾臟指數(shù) 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠胸腺指數(shù)升高(F=1.992，P<0.05)；與模型對(duì)照組比較，甲氨蝶呤組、2 g·kg-1異常黑膽質(zhì)成熟劑組小鼠胸腺指數(shù)降低(F=2.190，P<0.05)；對(duì)脾臟指數(shù)的影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 見(jiàn)表3。

2.4 小鼠血清IL-17、IL-23、IL-10水平 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠血清IL-10、IL-17、IL-23水平無(wú)明顯變化(P>0.05)。與模型對(duì)照組比較，甲氨蝶呤組、異常黑膽質(zhì)成熟劑組(2，4，8 g·kg-1)小鼠血清IL-10、IL-17、 IL-23水平無(wú)明顯變化(P>0.05)，見(jiàn)表4。

2.5 小鼠皮膚組織病理學(xué)變化

2.5.1 耳朵皮膚組織病理學(xué)變化 正常對(duì)照組角質(zhì)層為不全角化，上皮變薄。有顆粒細(xì)胞層，但顆粒不明顯。真皮內(nèi)無(wú)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。皮脂腺、毛囊結(jié)構(gòu)清晰。

與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組角質(zhì)層增厚，角質(zhì)層內(nèi)有角栓和微小膿腫形成。有顆粒細(xì)胞層，且顆粒明顯，棘層增厚。真皮內(nèi)血管擴(kuò)張充血，大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)。說(shuō)明模型成立[10]。與模型對(duì)照組比較，甲氨蝶呤組角質(zhì)層變薄、均勻，角質(zhì)層內(nèi)角栓和微小膿腫明顯減少。有1或2層顆粒細(xì)胞層，且顆粒明顯。棘層變薄3或4層。真皮內(nèi)炎癥明顯減輕。2，4，8 g·kg-1異常黑膽質(zhì)成熟劑組角質(zhì)層漸變薄，角質(zhì)層內(nèi)微小膿腫逐漸減少；有1或2層顆粒細(xì)胞層，且細(xì)胞內(nèi)顆粒明顯；棘細(xì)胞層變?。徽嫫觾?nèi)炎細(xì)胞逐漸減少。無(wú)明顯劑量規(guī)律性。見(jiàn)圖1。

表1 6組小鼠造模期間體質(zhì)量變化

組別劑量/(g·kg-1)造模第1天造模第7天造模第14天造模第21天正常對(duì)照組-21.98±2.2028.60±3.0934.45±4.0337.17±4.52模型對(duì)照組-22.34±1.6327.09±2.5230.17±4.2833.52±5.34甲氨蝶呤組1.5×10-322.08±1.3327.653±2.0731.82±3.7935.52±5.39異常黑膽質(zhì)成熟劑 小劑量組222.33±1.7024.44±2.0031.49±2.6934.84±5.75 中劑量組423.03±1.4428.00±2.2332.23±3.0535.57±3.18 大劑量組822.94±1.6428.89±2.0432.13±2.4836.22±3.71

表2 6組小鼠給藥期間體質(zhì)量變化情況

組別劑量/(g·kg-1)給藥第1天給藥第7天給藥第14天給藥第21天正常對(duì)照組-37.17±4.5240.28±6.0939.55±4.8942.02±5.74模型對(duì)照組-33.52±5.3434.44±5.9436.30±5.3236.89±5.31甲氨蝶呤組1.5×10-335.52±5.3937.14±6.1937.68±5.6938.35±6.24異常黑膽質(zhì)成熟劑 小劑量組234.84±5.7537.59±6.9538.13±6.9938.40±7.31 中劑量組435.57±3.1837.43±3.9939.08±5.8338.10±4.34 大劑量組836.22±3.7137.78±4.1537.98±5.1338.48±5.27

表3 6組小鼠胸腺、脾臟指數(shù)比較

與正常對(duì)照組比較，*1P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*2P<0.05Compared with normol control group，*1P<0.05；compared with model control group，*2P<0.05

2.5.2 尾部皮膚組織病理學(xué)變化 小鼠尾部表皮天然缺少顆粒層細(xì)胞，類似銀屑病表皮角化不全病理改變，因而可作為銀屑病角化異常的傳統(tǒng)天然模型。正常對(duì)照組無(wú)顆粒細(xì)胞層，實(shí)際上相當(dāng)于模型對(duì)照組。與正常對(duì)照組比較，甲氨蝶呤組個(gè)別區(qū)域內(nèi)出現(xiàn)1或2層顆粒細(xì)胞層，但細(xì)胞內(nèi)顆粒不明顯。2，4，8 g·kg-1異常黑膽質(zhì)成熟劑組大部分區(qū)域出現(xiàn)1～2層顆粒細(xì)胞層，細(xì)胞內(nèi)顆粒較明顯。無(wú)明顯劑量規(guī)律性。見(jiàn)圖2。

表4 6組小鼠血清IL-10、IL-17、IL-23水平比較

組別小鼠數(shù)劑量/(g·kg-1)IL-10IL-17IL-23正常對(duì)照組10-61.21±7.704.98±0.674.17±0.34模型對(duì)照組10-49.55±4.335.27±0.484.38±0.27甲氨蝶呤組101.5×10-357.65±11.595.02±0.314.41±0.25異常黑膽質(zhì)成熟劑 小劑量組10257.26±6.424.74±0.505.08±0.68 中劑量組10454.25±3.764.85±0.444.97±0.37 大劑量組10854.44±3.465.04±0.525.15±0.64

A.正常對(duì)照組；B.模型對(duì)照組；C.甲氨蝶呤組；D.異常黑膽質(zhì)成熟劑組(8 g·kg-1劑量)

A.正常對(duì)照組；B.甲氨蝶呤組；C.異常黑膽質(zhì)成熟劑組(2 g·kg-1劑量)；D.異常黑膽質(zhì)成熟劑組(4 g·kg-1劑量)

3 討論

維吾爾醫(yī)學(xué)將正常體液(合立體·臺(tái)比依)分為膽液質(zhì)、血液質(zhì)、黏液質(zhì)和黑膽質(zhì)等4種體液，其中正常黑膽質(zhì)體液(賽危大依·臺(tái)比依)是一種色略黑、味酸澀的液體[3]，相對(duì)其他體液較濃，屬性干寒。它具有形成沉淀、保持器官形狀與特質(zhì)的功能。黑膽質(zhì)體液產(chǎn)生于肝臟，貯于脾臟，由于它對(duì)脾胃活動(dòng)有一定的影響，因而被認(rèn)為具有增強(qiáng)胃吸收力的功能。維吾爾醫(yī)學(xué)認(rèn)為，許多疾病都是因?yàn)樘幱谄胶鉅顟B(tài)下的4種正常體液的質(zhì)和(或)量發(fā)生異常變化引起。異常體液性疾病首先是指體液自身發(fā)生的變化，其次是指發(fā)生變化后的體液對(duì)全身或局部產(chǎn)生的作用，并由此導(dǎo)致的疾病[1-2，11]。

維吾爾醫(yī)學(xué)臨床實(shí)踐中，對(duì)異常體液(合立體·海日·臺(tái)比依)性疾病的治療經(jīng)常采用維吾爾醫(yī)獨(dú)具特色的成熟和清除療法，首先給予該體液的成熟劑，待物質(zhì)成熟的特征出現(xiàn)后，再給予清除異常體液的該類體液的清除劑，待全身被清理后，再根據(jù)失調(diào)氣質(zhì)引起的疾病癥狀給予專門(mén)的治療藥物或補(bǔ)益藥[1-2，11]。新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)醫(yī)院制劑異常黑膽質(zhì)成熟劑由破布木果實(shí)、鐵線蕨、地錦草等單味藥組成，筆者通過(guò)現(xiàn)代銀屑病動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ吞接懫渥饔?。近年?lái)，Th17細(xì)胞和Treg細(xì)胞失衡與銀屑病的關(guān)系日益受到重視[12-13]，其中IL-17是Th17細(xì)胞分泌的重要細(xì)胞因子具有促進(jìn)炎癥反應(yīng)功能，并受IL-23細(xì)胞因子調(diào)控；IL-10是Treg細(xì)胞分泌的重要的抑制性細(xì)胞因子，有臨床研究應(yīng)用于銀屑病的治療。

本研究結(jié)果表明，異常黑膽質(zhì)成熟劑能促進(jìn)小鼠鼠尾表皮顆粒層細(xì)胞的形成，改善鹽酸普萘洛爾致小鼠耳部皮膚銀屑病樣組織病理學(xué)變化，血液細(xì)胞因子IL-17、IL-23、IL-10變化不明顯；但仍提示單獨(dú)使用異常黑膽質(zhì)成熟劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性銀屑病小鼠模型有一定的改善作用，證實(shí)維吾爾醫(yī)臨床用藥的合理性。

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Therapeutic Effect of Munziq Sawda on Mouse Psoriasis Model

RABIGUL Islam1，2，3，YULTUZ Mamat2，3，MAHSUTJAN Kadirt2，3，SIRAPIL Abay1，2，3

(1.DepartmentofPharmacology，BasicMedicalCollegeofXinjiangMedicalUniversity，Urumqi830054，China; 2.LaboratoryofTraditionalUyghurMedicinePrescriptionofXinjiang，Urumqi830049，China; 3.InstituteofXinjiangTraditionalUyghurMedicine，Urumqi830049，China)

Objective To study anti-psoriasis effect of Munziq Sawda on mouse model. Methods We established the mouse tail scale epidermis and psoriasis-like skin inflammation model by applying 5%propranol hydrochloride emulsion on mouse ears，and then observed body weight，thymus and spleen index，measured IL-10 ，IL-17，IL-23 secretion in serum with ELISA method，and also detected istopathological changes of the skin of tail and ears in mouse. Results No obvious abnormalities were found of general condition and body weight (P>0.05)during the experiment period in the Munziq Sawda treated groups(2，4，8 g·kg-1) ; Compared with the model control group，2 g·kg-1Munziq Sawda decreased thymus index(2.841±1.211)vs(1.903±0.885) mg·g-1(P<0.05); Munziq Sawda at 2，4，8 g·kg-1did not obviously impact on the serum level of IL-10，IL-17 and IL-23 (P>0.05); Munziq Sawda 2，4，8 g·kg-1promoted the formation of epidermis granular layer in mouse tail and improved histopathological changes of the mouse ear skin. Conclusion Munziq Sawda has therapeutic action on experimental psoriasis model.

Munziq Sawda; Psoriasis ，experimental; Index，thymus

2014-06-16

2014-08-29

*新疆維吾爾自治區(qū)公益性科研院所項(xiàng)目(KY201302)

熱比姑麗·伊斯拉木(1970-)，女，維吾爾族，新疆阿圖什人，副研究員，博士，研究方向：維藥藥理學(xué)。電話：(0)13394919907，E-mail：rabiya@126.com。

斯拉甫·艾白(1960-)，男，維吾爾族，新疆伊犁人，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：維藥藥理學(xué)。電話：(0)13999193503，E-mail：aibai@263.net。

R285；R291.5

A

1004-0781(2015)09-1135-05

10.3870/j.issn.1004-0781.2015.09.003