李敬濤 吳 超 王 雅 黃開松 金梅林

農業(yè)微生物學國家重點實驗室/華中農業(yè)大學動物醫(yī)學院，武漢 430070

湖北部分地區(qū)紅斑丹毒絲菌分離株耐藥性分析

李敬濤 吳 超 王 雅 黃開松 金梅林*

農業(yè)微生物學國家重點實驗室/華中農業(yè)大學動物醫(yī)學院，武漢 430070

采用藥敏紙片擴散法對31株湖北部分地區(qū)分離株進行19種臨床常用抗生素耐藥性試驗分析，結果表明：臨床分離株對卡那霉素、鏈霉素、阿米卡星、多粘菌素B、萬古霉素和磺胺異惡唑的耐藥率為100%，慶大霉素、復方新諾明、氧氟沙星、壯觀霉素、林可霉素和四環(huán)素的耐藥率分別為96.8%、83.9%、32.3%，25.8%，22.6%和9.67%，對頭孢拉定、阿莫西林和阿奇霉素高度敏感。

紅斑丹毒絲菌；耐藥性；藥敏試驗

紅斑丹毒絲菌是一種革蘭氏陽性小桿菌，是豬丹毒的主要病原菌[1]。近些年來，中國南方部分地區(qū)暴發(fā)大規(guī)模的豬紅斑丹毒絲菌感染疫情，主要表現為急性敗血癥和疹塊型，以3～6月齡架子豬發(fā)病率最高，可引起母豬的急性死亡，給養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經濟損失，同時給人類健康造成了潛在威脅。本實驗室對湖北省8個不同地區(qū)豬場臨床分離株進行了藥物敏感性測定，為臨床用藥提供理論依據，避免濫用抗生素，減緩紅斑丹毒絲菌產生耐藥性的速度。

1 材料與方法

1.1 試驗菌株

紅斑丹毒絲菌（31株）。本實驗室于2012-2013 年10月從湖北省8個不同地區(qū)（武漢市15株、荊州市7株、沙洋3株，松滋、鐘祥、隨州各2株）的豬場發(fā)生豬丹毒的病死豬中分離、純化和鑒定。

1.2 培養(yǎng)基和藥敏紙片

TSA（胰蛋白胨大豆瓊脂）和TSB（胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基）購自美國BD公司；新生牛血清購自杭州四季青生物公司；強力霉素、卡那霉素、氧氟沙星、鏈霉素、阿莫西林、慶大霉素、阿米卡星、多粘菌素B、萬古霉素、復方新諾明、壯觀霉素、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、林可霉素、四環(huán)素、青霉素、磺胺異惡唑、頭孢拉定、阿其霉素、克林霉素，購自杭州天和微生物試劑有限公司。

1.3 藥敏試驗

取凍干保存的待測菌株，于TSA平板劃線，37℃復蘇。挑取培養(yǎng)的紅斑丹毒絲菌單菌落于添加10%血清的TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h。按1∶500轉接添加10%血清的TSB培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數中期。用無菌棉拭子蘸取菌液均勻涂于TSA培養(yǎng)基表面。平板于室溫下干燥后將抗生素紙片緊貼于瓊脂表面。37℃恒溫培養(yǎng)18 h，觀察結果。參考美國臨床實驗室標準委員會（NCCLS）藥敏紙片擴散法，以抗生素的抑菌環(huán)和敏感標準作為判定依據。

1.4 耐藥率和耐藥譜的分析

耐藥率的測定。對某種抗生素的耐藥菌株數占分離株的豬鏈球菌總數的百分比。

耐藥譜的測定。統(tǒng)計同一菌株對不同抗生素的耐藥率。

2 結 果

2.1 藥敏試驗結果

選擇19種較常見的抗生素藥敏紙片對31株分離株進行藥敏試驗。結果顯示，這3株豬紅斑丹毒絲菌均對氨芐青霉素、青霉素、阿莫西林、復方新諾明、頭孢噻肟、頭孢曲松耐藥；對氟哌酸、替考拉寧、恩諾沙星敏感，其中對恩諾沙星的抑菌圈最大，最為敏感，對其他5種抗生素敏感性不一。見表1、表2。

表1 31株紅斑丹毒絲菌的藥敏試驗結果

2.2 紅斑丹毒絲菌的耐藥性

31株紅斑丹毒絲菌分離株對19種抗生素有不同的耐藥性，所有菌株均對卡那霉素、鏈霉素、阿米卡星、多粘菌素B、萬古霉素和磺胺異惡唑耐藥，慶大霉素和復方新諾明的耐藥率分別為96.8%和83.9%，氧氟沙星、壯觀霉素、林可霉素和四環(huán)素的耐藥率分別為32.3%、25.8%、22.6%和9.67%。其他藥物未發(fā)現耐藥性。見圖1。

2.3 紅斑丹毒絲菌分離株耐藥譜分析

31株紅斑丹毒絲菌對19種抗生素耐藥譜分析結果見表3，所有分離株均對多種抗生素有不同程度的耐藥性，有30株對8種及以上的抗生素耐藥，占分離株的96.8%，只有一株菌耐7種抗生素，可見臨床分離株的多重耐藥比較嚴重。

3 討 論

從31株紅斑丹毒絲菌對19種抗生素耐藥性分析結果顯示，所有菌株對不同抗生素具有多重耐藥性，可見湖北省的一些豬場耐藥性很普遍，而且耐藥譜廣，究其原因可能是：紅斑丹毒絲菌在健康豬的扁桃體和淋巴組織中的分離率高達30%～50%[2]，養(yǎng)殖戶在養(yǎng)殖和疾病防控時大量使用抗生素加速了多重耐藥的產生；紅斑丹毒絲菌可能和其他種類的細菌發(fā)生基因組交流。因此，在臨床選擇治療豬丹毒時應高度重視，合理用藥。

圖1 紅斑丹毒絲菌對20種抗生素的耐藥率

表2 31株紅斑丹毒絲菌的藥敏試驗結果

表3 不同紅斑丹毒絲菌分離株對20種抗生素耐藥譜測定結果

本研究選取常見的19種抗生素對臨床分離株進行藥敏試驗，結果表明31株分離菌對青霉素、頭孢他啶、阿奇霉素敏感性最強，對喹諾酮類藥物如恩諾沙星和環(huán)丙沙星的敏感性降低，對卡那霉素、鏈霉素、磺胺異惡唑、阿莫西林、萬古霉素完全耐藥，未發(fā)現耐青霉素菌株。在這次中國豬丹毒疫情暴發(fā)之前，紅斑丹毒絲菌對青霉素高度敏感，一直是發(fā)生豬丹毒疫情的首選藥[3-6]，何世成等報道湖南紅斑丹毒絲菌臨床分離株HR-6、ZY-8、XY-9對氨芐青霉素、青霉素、阿莫西林、頭孢噻肟和頭孢曲松均產生耐藥性[7]，但是這次安徽和廣州的分離株還是對青霉素高度敏感[8-9]。中國的這次豬丹毒疫情暴發(fā)，湖南省產生了耐青霉素菌株，因此其他省份在治療豬丹毒時，選擇青霉素時應謹慎。此外，這次豬丹毒疫情暴發(fā)的臨床分離株對磺胺類藥物產生了耐藥性，對喹諾酮類藥物的敏感性在降低，紅斑丹毒絲菌的耐藥性越趨嚴重。

張樂宜等[8]報道，此次廣州豬丹毒疫情，在臨床治療過程中采用飼料添加阿莫西林、頭孢類藥物同時肌注兩類藥物的方法，短期內不能控制疫情的持續(xù)發(fā)生，須持續(xù)用藥10～14 d。在臨床使用頭孢類和青霉素類藥物，應注意使用的劑量、次數、時間和反復用藥，否則會導致部分紅斑丹毒絲菌不被抑殺，從而產生耐藥性。

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2015-01-04

李敬濤，男，1988年生，在讀碩士生，研究方向：動物傳染病學。