王改玲,石亞中,李文潔,段勁生
(1.蚌埠學(xué)院 生物與食品工程系,安徽 蚌埠 233030;2.安徽省農(nóng)科院 植物保護(hù)研究所,安徽 合肥 230031)
水稻是一年生禾本科植物,是人類的主要糧食作物[1]。但現(xiàn)今水稻經(jīng)常會患紋枯病,造成結(jié)實(shí)率和米質(zhì)下降[2]。己唑醇對水稻紋枯病有防治效果,由于各地的降雨量、土壤類型、土壤pH 值等均有差異,農(nóng)藥在使用后的降解程度也是不同的。因此,研究5%己唑醇在稻米中的殘留檢測對于提高食品質(zhì)量監(jiān)督,保障民生建設(shè)和維護(hù)食品安全都具有重要意義。
5%己唑醇懸浮劑(殺菌劑),工業(yè)品;乙腈、無水硫酸鈉、正己烷、丙酮、石油醚(60 ~90 ℃)、氯化鈉均為分析純;弗羅里硅土,食品級(粒徑149 ~250 μm);安徽潛山縣余井鎮(zhèn)、霍山縣符橋鎮(zhèn)、鳳臺縣新集鎮(zhèn)稻谷。
GC 7890,配ECD 檢測器;KQ-50B 超聲波清洗器;RE-52CS 旋轉(zhuǎn)濃縮蒸發(fā)器;N-EVAP24 氮吹儀;Y-4 水浴恒溫振蕩器;HP-5 毛細(xì)管柱等。
試驗(yàn)共設(shè)置14 個處理,每處理3 個重復(fù),每重復(fù)為一小區(qū),每小區(qū)不小于30 m2。施藥劑量:最終殘留試驗(yàn)低劑量75 g a.i. /ha(制劑100 g/Mu)和高劑量112.5 g a.i. /ha(制劑150 g/Mu),施藥次數(shù)為3 次、4 次,施藥間隔期為14,28,45 d。同時設(shè)空白對照處理。各小區(qū)之間設(shè)保護(hù)行,壘梗防串灌。
2012 年試驗(yàn)期間平均氣溫為18.7 ~30.3 ℃,降雨量為538.4 mm 左右。土壤類型為砂壤土,pH值為5.34,有機(jī)質(zhì)含量為2.43%。
1.3.1 樣品的準(zhǔn)備 在試驗(yàn)小區(qū)中隨機(jī)取樣,選取6 ~12 個采樣點(diǎn),每小區(qū)的采樣量不少于1 kg。將稻谷處理干凈,通風(fēng)晾干后脫殼,將稻米裝于自封袋中。
1.3.2 稻米中殘留的己唑醇的提取
1.3.2.1 粗提取 稱取10.0 g 稻米置于打碎機(jī)中打碎,并轉(zhuǎn)移到250 mL 具塞三角瓶中,加入50 mL乙腈,塞上瓶塞后,浸泡過夜。用振蕩器振蕩提取1 h,并置于已裝有無水硫酸鈉和濾紙的濃縮瓶上過濾,殘?jiān)偌尤?0 mL 乙腈振蕩提取30 min,過濾,用20 mL 乙腈洗滌殘?jiān)?。合并濾液于250 mL 濃縮瓶中,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(≤45 ℃)上濃縮至近干,待柱層析凈化。
1.3.2.2 柱層析凈化 在層析柱內(nèi)塞入棉花(以防止加入的無水硫酸鈉漏掉),加入2 cm 無水硫酸鈉,裝填4.0 g 弗羅里硅土(用前640 ℃處理4 h,加水5%減活)和0.2 g 活性炭的混合吸附劑,再加入2 cm 無水硫酸鈉,用玻棒將柱體敲實(shí)。每個層析柱內(nèi)加入15 mL 石油醚預(yù)淋,待預(yù)淋液降為2 cm,關(guān)閉層析柱。用60 mL 石油醚/丙酮(8/2,V/V)淋洗,前3 次用2 ~3 mL 淋洗液洗濃縮瓶,并將濃縮瓶內(nèi)的洗滌液轉(zhuǎn)移到樣品柱上,讓吸附劑充分吸附樣品中的雜質(zhì)。將剩余的淋洗液倒入濃縮瓶中,把濃縮瓶仔細(xì)清洗后轉(zhuǎn)移到樣品柱上,沖洗柱體,收集合并淋洗液。
1.3.2.3 濃縮蒸餾 將收集淋洗液后的濃縮瓶在小于45 ℃的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮至近干,并用氮?dú)獯蹈伞?/p>
1.3.2.4 正己烷定容 用吸耳球和5 mL 的移液管吸取5 mL 正己烷于濃縮瓶中,搖晃濃縮瓶,以充分溶解濃縮瓶內(nèi)的藥品。用膠頭滴管轉(zhuǎn)移到1.5 mL的安捷倫小瓶內(nèi),加蓋,待GC 測定。
1.4.1 GC 測定的條件 Agilent GC 7890 氣相色譜儀器,ECD 檢測器;HP-5 毛細(xì)管柱,10 m ×0.53 mm×2. 65 μm,柱溫(程序升溫):150 ℃(2 min)8 ℃/min,260 ℃(5 min);進(jìn)樣口溫度250 ℃,檢測器溫度300 ℃;載氣為高純氮,流速10 mL/min,不分流,進(jìn)樣量1 μL。
1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 稱取98.5%的己唑醇0.050 7 g 己唑醇標(biāo)樣于50 mL 容量瓶中,用石油醚定容,得到1 000 μg/mL 的己唑醇母液。用移液管吸取1 mL 母液于10 mL 容量瓶中,用石油醚定容至刻度,制成100 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。取1 mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL 容量瓶中,用石油醚定容至刻度,制成10 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。這樣用石油醚逐級稀釋,得到濃度分別為5.0,1.0,0.2,0.1,0.002 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液,用GC 進(jìn)行測定。以濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo),峰面積(Hz×S)為縱坐標(biāo),制作標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1。
圖1 己唑醇的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 The standard curve of hexaconazole
由圖1 可知,己唑醇線性回歸方程y =11 499x-4 749,R=0.999。
稻米中己唑醇的殘留量:
式中 R——樣本中農(nóng)藥殘留量,mg/kg;
C標(biāo)——標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度,μg/mL;
V標(biāo)——標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣體積,μL;
S樣——注入樣本溶液的峰面積,Hz·S;
V終——樣本最終定容體積,mL;
V樣——樣本溶液進(jìn)樣體積,μL;
S標(biāo)——注入標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積,Hz·S;
W——樣品質(zhì)量,g。
稱取4 個10.0 g 空白粉碎稻米于具塞三角瓶中,分別標(biāo)記0.2,0.02,0.002 μg/mL。并相應(yīng)加入0,1 mL 2 μg/mL,1 mL 0. 2 μg/mL,1 mL 0.02 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,按上述方法進(jìn)行提取后,濃縮定容,并進(jìn)行GC 測定,平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD 見表1。
表1 己唑醇的添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 1 The recovery and relative standard deviation of hexaconazole
己唑醇的相對保留時間為11.7 min。標(biāo)樣的響應(yīng)值較高,且峰形對稱,各樣品中測定的目標(biāo)農(nóng)藥的出峰時間基本一樣且平行性良好,雜峰和目標(biāo)農(nóng)藥的峰得到了很好的分離,沒有對測定物分析造成一定的影響[3]。由表1 可知,稻米中己唑醇的添加濃度為0.002 ~0.2 mg/kg 時,平均回收率為76.44%~85.52%,RSD 為1.03% ~1.76%,表明準(zhǔn)確度和精密度均滿足殘留分析的要求,所以此方案可行。
2012 年安徽三地稻米中的殘留量檢測結(jié)果見表2 ~表4。
表2 潛山縣余井鎮(zhèn)稻米中己唑醇?xì)埩袅縏able 2 The residue of hexaconazole in rice of Yujing town,Qianshan county
表3 霍山縣符橋鎮(zhèn)稻米中己唑醇最終殘留量Table 3 The residue of hexaconazole in rice of Fuqiao town,Huoshan country
表4 鳳臺縣新集鎮(zhèn)稻米中己唑醇最終殘留量Table 4 The residue of hexaconazole in rice of Xinji town,F(xiàn)engtai country
由表2 ~表4 可知,在安徽主要地區(qū)用5%的己唑醇懸浮劑施藥,用藥量為75 ~112.5 g a.i. /ha,施藥3 ~4 次,施藥間隔期為7 d,采收間隔期為14,28,45 d,結(jié)果顯示,收獲的稻米中己唑醇的殘留量為ND ~0. 091 3 mg/kg。而 歐 盟 的MRL 值 為0.02 mg/kg,所以上述材料顯示2011 年安徽省潛山縣余井鎮(zhèn)在用藥量為75 g a.i. /ha,施藥3 次,間隔期為28 d 以上時符合標(biāo)準(zhǔn),在用藥量112.5 g a.i. /ha,施藥次數(shù)為4 次,間隔期為28 d 以上符合標(biāo)準(zhǔn),而2012 年的安徽霍山縣符橋鎮(zhèn)和鳳陽縣新集鎮(zhèn)均符合標(biāo)準(zhǔn)。
由上述材料可知,儀器對己唑醇的最小檢出量是1. 0 × 10-12g。稻 米 中 最 低 檢 測 濃 度 為0.002 mg/kg。己 唑 醇 的 添 加 濃 度 為0. 002 ~0.2 mg/kg 時,平均回收率為76. 44% ~85. 52%,RSD 為1.03% ~1.76%。實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度和精密度均符合農(nóng)藥殘留分析的要求。
(1)目前,中國和CAC 尚未規(guī)定稻米中己唑醇的最大殘留限量值(MRL),歐盟規(guī)定為0.02 mg/kg。由安徽稻米中殘留己唑醇的數(shù)據(jù),建議5%己唑醇懸浮劑用于防治水稻紋枯病,最高制劑用藥量為100 g/Mu(有效成分75 g a. i. /ha),最多可施藥3 次,安全間隔期為45 d。
(2)在農(nóng)藥殘留實(shí)驗(yàn)中的農(nóng)藥殘留提取劑有乙腈、二氯甲烷、丙酮等,其中乙腈的提取效果最好,提取率可達(dá)70%以上,但是乙腈溶劑在濃縮蒸餾時花費(fèi)時間較多,二氯甲烷濃縮蒸餾時間雖然最短,但是揮發(fā)性較強(qiáng),毒性較大,不推薦使用。
(3)實(shí)驗(yàn)主要的層析柱吸附劑有兩種,一種是弗羅里硅土吸附劑,另一種是中性氧化鋁吸附劑,其中弗羅里硅土的效果較好,而且相對經(jīng)濟(jì),推薦使用。
[1] 劉光明,羅逢健,陳宗.5%己唑醇在水稻中殘留降解動態(tài)研究[J].農(nóng)藥,2004,43(4):181-183.
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