練青平,宓國強*,姚子亮,胡廷尖,李 倩,劉士力,王雨辰
(1.浙江省淡水水產(chǎn)研究所,浙江 湖州 313001;2.浙江省麗水市水產(chǎn)技術推廣站,浙江 麗水 323000)
唇魚骨(Hemibarbus labeo)俗稱鞠旦,隸屬鯉形目,鯉科,鮈亞科,魚骨屬[1]。其分布廣,除西部高原地區(qū)之外,我國南北各大水系、浙江省內(nèi)各水系都有分布[1]。而棲息在甌江的唇魚骨是甌江干流重要經(jīng)濟種類之一,以其肉質(zhì)鮮美,深受浙南地區(qū)人們喜愛,但由于近年來捕撈強度過大和生態(tài)環(huán)境惡化,野生唇魚骨已經(jīng)十分珍稀。為了甌江野生唇魚骨資源的恢復及唇魚骨養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展需要,本課題組于2006 年成功突破了唇魚骨的全人繁殖技術,使其達到生產(chǎn)規(guī)模,很好的解決了唇魚骨養(yǎng)殖和人工放流的苗種的問題。近些年來學者也對唇魚骨進行了一系列的研究[2-14],但未見詳細描述在人工養(yǎng)殖條件下的全人繁殖及胚胎發(fā)育。本文報道了人工養(yǎng)殖唇魚骨的親魚在池塘養(yǎng)殖成熟后,進行人工催產(chǎn),獲得魚苗,進行胚胎發(fā)育觀察,旨在為唇魚骨的規(guī)?;N提供科學依據(jù)。
唇魚骨父母本來源于浙江麗水池塘養(yǎng)殖,個體質(zhì)量在150~200 g,年齡為3 齡,試驗時直接從養(yǎng)殖池塘中挑選,試驗前一年冬季放入池塘培育,試驗時從塘中挑選。
催產(chǎn)劑為馬來酸地歐酮(DOM)、促黃體素釋放激素2 號(LHRH-A2)和絨毛膜促性腺激素(HCG)的混合激素。劑量為5 mgDOM+10 μg LHRH-A2+1 000 HCG/kg,雄魚(唇魚骨)減半。采用1 次注射,注射后將雌雄親本放在不同網(wǎng)箱內(nèi),用流速0.1~0.2 m/s 的水流刺激,促使發(fā)情、排卵。2005—2012 年,采用常規(guī)人工干法授精獲得唇魚骨受精卵。大部分在水泥池中靜水孵化,只取部分受精卵在塑料盆中孵化,受精卵孵化為水溫(20±1)℃。
授精率、孵化率、出苗率計算參照練青平等[15]計算要求進行計算,計算公式如下:
利用ZOOM645S 連續(xù)變倍體視顯微鏡對整個胚胎發(fā)育過程進行連續(xù)活體觀察,每次隨機觀察取樣30 粒卵以上,記錄胚胎發(fā)育各個階段的形態(tài)特征及發(fā)育時間,胚胎發(fā)育時間以50%以上的受精卵明顯進入該發(fā)育階段為準。
在繁殖季節(jié),唇魚骨雌性成熟個體腹部膨大而柔軟,腹腔近肛門處隆起,泄殖孔紅潤且向外突出,吻部和胸鰭處光滑;雄性成熟個體在吻部和胸鰭處布滿“追星”,手摸上去有明顯粗糙、刺手的感覺,輕壓腹部就能擠出有白色精液,且精液入水既散開。
唇魚骨的全人工繁殖技術人工催產(chǎn)情況見表1,野外捕撈成熟的野生魚,對其注射催產(chǎn)劑為馬來酸地歐酮(DOM)、促黃體素釋放激素2 號(LHRH-A2)和絨毛膜促性腺激素(HCG)的混合激素,在水溫17~22 ℃下,效應時間為20~22 h,使其產(chǎn)卵。2007 年后,采用池塘養(yǎng)殖的親本進行人工繁殖,其催產(chǎn)率、受精率和孵化率情況見表2,2005—2012 年,共計獲得受精卵為1 635萬粒,平均催產(chǎn)率、受精率和孵化率分別為86.8%,71.4%和90.9%。
表1 甌江唇魚骨的全人工繁殖催產(chǎn)情況Tab.1 Artificially induced spawning with hormone for Hemibarbus labeo in Oujiang River
表2 甌江唇魚骨的全人工繁殖催產(chǎn)情況催產(chǎn)率、受精率和孵化率Tab.2 Induced spawning rate,fertilization rate,hatching rate under artifical propagation condition of Hemibarbus labeo in Oujiang River
人工養(yǎng)殖的唇魚骨成熟卵有淡綠色的和橙黃色的,卵徑為1.55~1.95 mm。甌江唇魚骨胚胎在(18~20)℃條件下,整個胚胎發(fā)育過程歷時約88 h20 min,所需積溫A=1 678.33(h·℃)。從受精卵到出膜各個發(fā)育時期的時序及特征見表1。
圖版Ⅰ 唇魚骨的胚胎發(fā)育Plate Ⅰ Embryonic development of Hemibarbus labeo
2.2.1 受精卵胚盤形成階段 成熟卵子受精后,受精卵遇水迅速膨脹并快速產(chǎn)生粘性粘附在附著物上,同時出現(xiàn)卵周隙,卵膜在水中粘附雜質(zhì)后變得不透明,很難觀察到胚胎(圖版Ⅰ-1)。受精后1 h40 min,積溫為30.00(h·℃)時,由于原生質(zhì)不斷向動物極聚集,在動物極隆起形成一盤狀的結(jié)構(gòu),為胚盤,此時進入胚盤期(圖版Ⅰ-2),胚盤的形成是卵裂階段的基礎。
2.2.2 卵裂階段 受精后2 h10 min,積溫為39.00(h·℃),受精卵進行第一次分裂,此時胚盤經(jīng)裂成2 個大小相等的分裂小球,此時胚胎進入2細胞期(圖版Ⅰ-3);接著繼續(xù)分裂,且第二次與第一次分裂溝相垂直,把胚胎分裂成4 個分裂球,進入4 細胞期。隨著卵裂繼續(xù)進行,胚胎進入8細胞(圖版Ⅰ-2)、16 細胞、32 細胞、64 細胞……分裂的細胞數(shù)越來越多(圖版Ⅰ-4~6);受精后5 h35 min,積溫為106.08(h·℃),分裂小球越分越小,大小不一致且形狀不規(guī)則,逐漸形成多細胞的胚體,形似桑椹,此時進入桑椹期(圖版Ⅰ-7)。
2.2.3 囊胚階段 受精后5 h55 min,積溫為118.33(h·℃),桑椹期后,分裂球越來越小,但細胞界限不清晰,有許多分裂球組成高囊胚如帽狀,大小約占卵徑的2/5,此時胚胎進入囊胚早期(圖版Ⅰ-8);受精后7 h30 min,積溫為150.0(h·℃),隆起的高囊胚的高度有所降低,且囊胚開始向四周擴散下包,此時胚胎進入囊胚中期(圖版Ⅰ-9);受精后8 h,積溫為160.00(h·℃),囊胚繼續(xù)下包高度降低,且囊胚的表面細胞開始向卵黃下包,胚環(huán)逐漸形成,此時胚胎進入囊胚晚期(圖版Ⅰ-10)。
2.2.4 原腸胚階段 受精后9 h,積溫為180.00(h·℃),胚層下包卵黃達1/4,胚環(huán)出現(xiàn),此時胚胎進入原腸早期(圖版Ⅰ-11);受精后11 h10 min,積溫為212.17(h·℃),胚層下包卵黃達1/2,胚環(huán)明顯,胚盾出現(xiàn),此時胚胎進入原腸中期(圖版Ⅰ-12);受精后14 h50 min,積溫為267.00(h·℃),胚層下包卵黃達3/4,卵黃體由圓形變橢圓形,出現(xiàn)雛形胚體,此時胚胎進入原腸晚期(圖版Ⅱ-1)。
2.2.5 神經(jīng)胚形成階段 受精后18 h,積溫為324.00(h·℃),胚層進一步下包達4/5,而未被包裹的卵黃栓外露,囊胚呈不對稱形狀,胚體開始側(cè)臥,胚體輪廓顯現(xiàn),此時進入神經(jīng)胚期(圖版Ⅱ-2)。受精后21 h,積溫為378.00(h·℃),背唇、腹唇和側(cè)唇在胚孔處匯合而將胚孔關閉,此刻胚層完全包圍卵黃囊,此時胚胎進入胚孔封閉期(圖版Ⅱ-3)。
2.2.6 器官形成階段 受精后23 h,積溫為437.00(h·℃),胚體側(cè)臥后,在胚體中部出現(xiàn)2 對肌節(jié),胚體前部隆起,此時胚胎進入肌節(jié)出現(xiàn)期(圖版Ⅱ-4);受精后25 h30 min,積溫為484.50(h·℃),在前腦2 側(cè)出現(xiàn)一對腎形的突起為眼的原基,且肌節(jié)增加到4~5 對,此時胚胎進入眼基出現(xiàn)期;受精后27 h,積溫為540.00(h·℃),眼基中央出現(xiàn)裂縫,并形成長橢圓形的眼囊,且肌節(jié)出現(xiàn)7~8對,此時胚胎進入眼囊期。受精后29 h10 min,積溫為583.33(h·℃),在胚體后端腹面隆起為尾芽,呈圓錐狀,且肌節(jié)出現(xiàn)18~19 對,此時胚胎進入尾芽期(圖版Ⅱ-5);受精后38 h40 min,積溫為734.67(h·℃),在眼杯口出現(xiàn)圓形眼晶體,卵黃囊成腎形,肌節(jié)為25~26 對,此時胚胎進入眼晶體出現(xiàn)期(圖版Ⅱ-6);受精后43 h30 min,積溫為783.00(h·℃),胚體開始表現(xiàn)輕微的顫動,然后形成比較穩(wěn)定的肌肉收縮,此時胚胎進入肌肉效應期,標志著胚胎活動的開始(圖版Ⅱ-7);受精后46 h,積溫為828.00(h·℃),在耳囊內(nèi)出現(xiàn)1 對透亮的耳石,尾芽伸直,胚體擺動頻率不斷增加,此時肌節(jié)出現(xiàn)31~32 對,胚體扭動頻率15 次/min,此時胚胎進入耳石出現(xiàn)期(圖版Ⅱ-8);受精后48 h50 min,積溫為927.83(h·℃),在卵黃囊前下方出現(xiàn)管狀心臟原基,此時胚胎進入心臟原基出現(xiàn)期;受精后51 h,積溫為969.00(h·℃),心臟已經(jīng)形成,位于卵黃囊頭端,已開始作微弱的搏動,然后收縮繼而加強,此時胚胎進入心跳期(圖版Ⅱ-9)。受精后53 h,積溫為1 060.00(h·℃),眼囊腹面出現(xiàn)出現(xiàn)黑色,然后逐漸加深,心臟進一步發(fā)育,此時胚胎進入眼色素出現(xiàn)期。受精后58 h20 min,積溫為1 108.33(h·℃),在胚體的卵黃囊表面出現(xiàn)淡淡的黃色圓斑狀的孵化腺細胞,此時卵膜的透明度增高,肌節(jié)出現(xiàn)34~36 對,此時胚胎進入孵化腺細胞出現(xiàn)期(圖版Ⅱ-10),這是唇魚骨所特有的。受精后73 h30 min,積溫為1 396.50(h·℃),在卵黃囊的背部靠頭部處兩側(cè)出現(xiàn)一度泡狀胸鰭原基,此時胚胎進入胸鰭原基出現(xiàn)期。
圖版Ⅱ 唇魚骨的胚胎發(fā)育Plate Ⅱ Embryonic development of Hemibarbus labeo
表3 唇魚骨的胚胎發(fā)育情況Tab.3 Embryo development of Hemibarbus labeo in Oujiang River
2.2.7 孵化出膜階段 受精后88 h20 min,積溫1 678.33(h·℃),仔魚開始出膜,此時大部分胚胎的卵膜開始變薄薄,且卵膜變得透明,可見胚體在出膜前進行著劇烈的顫動。出膜主要有2 種方式,第一種為尾部率先出膜,繼而繼續(xù)扭動,至整個身體脫膜而出;第二種為頭部先出膜,繼而整個身體出膜的。第二種出膜方式比較迅速,輕盈。出膜期較長,可持續(xù)12 h,若是遇到出膜環(huán)境不適合,則推遲出膜孵化時間。
剛出膜的仔魚身體透明且無黑色素;卵黃囊呈棒狀,前大后小,占整個魚體的1/2;全長6.0~6.80 mm,肌節(jié)為38~43。耳囊中可見清晰的左右耳石。初孵仔魚游泳功能較弱,只能間隙性運動,需臥底或者貼壁休息。眼色素較明顯,呈灰黑色(圖版Ⅱ-11)。
同種魚類的繁殖季節(jié)因為分布在不同地理水域的水溫季節(jié)變化不同而不同,本研究認為在浙江地區(qū)的甌江唇魚骨繁殖時間為3 月下旬開始至4 月上旬結(jié)束,水溫在17 ℃以上即可;而涪江下游唇魚骨繁殖季節(jié)為每年的3—4 月,水溫為12~24 ℃,此種群與甌江種群繁殖時間上相似。徐偉等[16]研究認為烏蘇里江唇魚骨的繁殖季節(jié)在每年的6 月,水溫在22 ℃以上,可能是烏蘇里江地區(qū)的冬天水溫比較低,性腺發(fā)育緩慢。甌江唇魚骨的繁殖季節(jié)較早,為每年初春,與其“四大家魚”和翹嘴紅鲌繁殖季節(jié)分別在4月底直7 月初、5 至7 月,同屬的花魚骨也為4 月中旬至下旬,造成這樣不同的是本來在野外環(huán)境的不同,為山溪溪流性魚類,而“四大家魚”、翹嘴紅鲌和花魚骨為江河湖泊性魚類。
本研究認為甌江唇魚骨胚胎在(18~20)℃條件下,整個胚胎發(fā)育過程歷時約88 h20 min,所需積溫A=1 678.33(h·℃)。馮曉宇等[4]研究認為唇魚骨受精卵在水溫18~21 ℃條件下,唇魚骨受精卵經(jīng)過90~120 h 仔魚孵化出膜。賀吉勝[2]認為涪江下游唇魚骨受精卵在12.5~18.5 ℃下歷時195 h。本研究基本和馮曉宇等研究相似,但是與賀吉勝[4]認為涪江下游唇魚骨胚胎發(fā)育時間不同,這可能與地理種群及孵化水溫有關。
浙江地區(qū)我們多采用靜水孵化唇魚骨的方法,即受精卵撣粘在用聚乙烯塑料網(wǎng)片或者棕梠片做成的架子上,放在水泥池中孵化,這樣有效提高了孵化率,徐偉等[16]認為此種靜水孵化不方便和不易管理,而是通過泥漿水脫粘的方法進行脫粘后,把受精卵放入“四大家魚”孵化缸進行孵化。
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