周立斌，周桂英

（惠州學(xué)院 生命科學(xué)系 生物技術(shù)研究所，廣東 惠州 516007）

褶皺臂尾輪蟲（Brachionus plicatilis）隸屬于輪蟲綱（Rotatoria），單巢目（Monogononta），臂尾輪蟲科（Brachionidae)，分L-型和S-型兩個(gè)亞種。L-型褶皺臂尾輪蟲（Brachionus plicatilistypycus）最適海水鹽度是3.0%，在此鹽度輪蟲體內(nèi)含有最高的ω3HUFA。而自從Ito（1960）發(fā)現(xiàn)褶皺臂尾輪蟲是海水魚類育苗的活餌料以來，它就作為魚類和甲殼類的重要開口餌料在生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。目前已報(bào)道輪蟲可作為60種海水魚類和18種甲殼動(dòng)物育苗的活餌料［1］。

國內(nèi)外許多學(xué)者對(duì)輪蟲的繁殖生態(tài)、餌料營養(yǎng)、培養(yǎng)技術(shù)等方面作了大量的試驗(yàn)研究，特別是餌料問題引起了眾多學(xué)者的關(guān)注。1967年Hirata與Mori發(fā)現(xiàn)可以用面包酵母培養(yǎng)輪蟲，70年代用海水小球藻與面包酵母大量培養(yǎng)輪蟲。并且海水小球藻和油脂酵母含較多的ω3HUFA（高級(jí)不飽和脂肪酸），比較適于投喂輪蟲。其后，微膠囊飼料、面包酵母添加光合細(xì)菌和Vc、海洋酵母、酵母與藻類搭配等各種餌料被用來測(cè)試對(duì)輪蟲的營養(yǎng)價(jià)值［2-5］。目前，在生產(chǎn)上培養(yǎng)輪蟲主要以單胞藻為餌料，很少使用酵母，因?yàn)榻湍竿段惯^量會(huì)敗壞水質(zhì)。王金秋［5］觀察，培養(yǎng)輪蟲效果最好的是綠藻門的小球藻。李樹國［6］利用硅藻、金藻、微綠球藻、裸藻、小球藻、扁藻分別培養(yǎng)褶皺臂尾輪蟲，他認(rèn)為扁藻和小球藻對(duì)輪蟲的繁殖最有利，裸藻較差。本實(shí)驗(yàn)采用小球藻、面包酵母以及兩者的混合餌料研究對(duì)輪蟲的體寬、密度和懷卵率的影響，以探討培養(yǎng)培養(yǎng)更小型、高密度的輪蟲的最佳餌料，為發(fā)展魚苗口徑小、對(duì)餌料要求嚴(yán)格的魚類的大規(guī)?；a(chǎn)提供幫助。

1 材料與方法

1.1 材料

L-型褶皺臂尾輪蟲由廣東省海洋漁業(yè)試驗(yàn)中心提供，接種前用150目篩絹手抄網(wǎng)收集輪蟲。

海水小球藻培養(yǎng)液密度為1800萬個(gè)/mL，面包酵母投放量按輪蟲密度上升而增加（比例為輪蟲總數(shù)/酵母量=100萬/克），酵母投喂前要進(jìn)行活化。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)條件

水溫在22℃左右，鹽度在2.8℅，pH值在7-8之間。

1.2.2 培養(yǎng)容器500L的透明塑料培養(yǎng)容器，每個(gè)培養(yǎng)容器放置一個(gè)散氣石。

1.2.3 試驗(yàn)分組

按輪蟲餌料的不同設(shè)計(jì)分為海水小球藻組，面包酵母組和海水小球藻與面包酵母混合組（以下稱混合組）3個(gè)餌料組，輪蟲投放初始密度都為30個(gè)/mL，試驗(yàn)進(jìn)行7天。

1.3 測(cè)量方法

用光學(xué)顯微鏡觀察測(cè)量輪蟲的體寬，在4倍目鏡下觀察，輪蟲的體寬=觀察的刻度值×25μm。

用光學(xué)顯微鏡觀察輪蟲的懷卵情況，取1毫升的輪蟲培養(yǎng)液滴到玻璃觀察板上并用1%甲醛固定，在4倍目鏡下觀察并計(jì)算輪蟲懷卵量，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組各取3毫升輪蟲培養(yǎng)液，以3次測(cè)量結(jié)果的平均數(shù)為最后記錄數(shù)據(jù)。輪蟲懷卵量=懷卵輪蟲數(shù)/輪蟲總數(shù)。

用萬能生物投影儀檢測(cè)輪蟲的數(shù)量，取1毫升的輪蟲培養(yǎng)液平均滴到玻璃觀察上，然后置于投影儀下觀察計(jì)算個(gè)數(shù)。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組各取3毫升輪蟲培養(yǎng)液，以3次測(cè)量結(jié)果的平均數(shù)為最后記錄數(shù)據(jù)。

1.4 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SE）表示，用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件中Duncan′s檢驗(yàn)（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同餌料對(duì)輪蟲體寬的影響

從圖1可見，同一餌料經(jīng)過7天的培養(yǎng)，輪蟲的體寬變化不顯著；而不同餌料之間輪蟲體寬有一定差異，但不顯著，一般位于的

圖1 不同餌料對(duì)輪蟲體寬的影響

2.2 不同餌料對(duì)輪蟲密度的影響

從圖2中可見，投喂各種餌料后，輪蟲前三天增長緩慢，第四天開始迅速增長。其中混合組增長速度最顯著，至第7天達(dá)到155個(gè)/ml；面包酵母組次之，小球藻組增長最小。

圖2 不同餌料對(duì)輪蟲密度的影響

2.3 不同餌料對(duì)輪蟲懷卵率的比較

從圖3可見，不同餌料培養(yǎng)的輪蟲，其懷卵率變化趨勢(shì)基本一致，前三天懷卵量上升并于第三天達(dá)到最高值；第三天后開始下降，第五天降到最低值，隨后有一定的回升，其中以混合組的懷卵率最高，在第3天達(dá)到70%。

圖3 不同餌料對(duì)輪蟲懷卵率的影響

3 討論

3.1 餌料對(duì)輪蟲體寬的影響

在沒有捕食壓力存在的情況下，最可能影響輪蟲個(gè)體大小的因素有基因型（品系）、食物種類和濃度、溫度以及種群增長階段等。有關(guān)食物對(duì)輪蟲個(gè)體大小的影響研究國內(nèi)外已有一些報(bào)道，但所得結(jié)果存在著不一致性。目前已知，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)培養(yǎng)的大肚須足輪蟲（Euchlanis dilatata）、紅臂尾輪蟲（B.rubens)、褶皺臂尾輪蟲和扁平臂尾輪蟲（B.patulus)的個(gè)體大小均隨食物濃度的增大而增大。胡好遠(yuǎn)等［7］認(rèn)為角突臂尾輪蟲（B.angularis）和萼花臂尾輪蟲（B.calyciflorus）［8］個(gè)體具有隨食物濃度的增大而增大的趨勢(shì)。在食物類型方面，岡內(nèi)等（1983）認(rèn)為用綠枝藻類Tetraselmis培養(yǎng)的輪蟲較用小球藻培育的個(gè)體大［9］。劉東超等研究認(rèn)為攝食亞心形扁藻的輪蟲個(gè)體與攝食綠色巴夫藻、小球藻和大溪地等鞭金藻存在顯著差異，攝食綠色巴夫藻與攝食小球藻的輪蟲個(gè)體大小之間存在顯著差異［10］。在人工培養(yǎng)條件下，繁殖狀態(tài)活潑時(shí)，輪蟲變小，有增殖密度越大，個(gè)體越小的趨勢(shì)［9］。本試驗(yàn)中，比較輪蟲體寬和密度可見，密度大的實(shí)驗(yàn)組輪蟲的體寬相對(duì)較小，實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了密度越大，個(gè)體越小的這種結(jié)果。從圖1可見不同餌料組的輪蟲體寬存在有一定差異，但各餌料組差異不顯著。對(duì)產(chǎn)于美國佛羅里達(dá)州的褶皺臂尾輪蟲的研究發(fā)現(xiàn)，適宜的食物類型僅使輪蟲個(gè)體增大15%，而攝食相同食物的13個(gè)地理品系的輪蟲個(gè)體大小差異大137%［11］?？梢?，不同的餌料能引起輪蟲個(gè)體大小產(chǎn)生變化，但其影響是否有顯著性可能與選擇的餌料種類和輪蟲的品種有關(guān)。

3.2 不同餌料對(duì)輪蟲密度和懷卵量的影響

圖2中輪蟲密度不斷上升，主要是由于第三天輪蟲的懷卵率出現(xiàn)生殖周期的第一個(gè)高峰，第四天開始不斷有輪蟲孵出，并且新增長的輪蟲個(gè)數(shù)大于死亡個(gè)數(shù)?；旌辖M和酵母組增長速度比小球藻組快，是因?yàn)檫@兩組的懷卵率比較高，食物供給較充足，使輪蟲的密度能保持不斷上升的趨勢(shì)。

而圖3中，混合組的輪蟲懷卵率最高，面包酵母組次之，這與餌料的可利用量有關(guān)?；旌辖M有小球藻和酵母可供輪蟲利用，食物量充足，輪蟲種群增長穩(wěn)定；面包酵母組增長比混合組低是因?yàn)橹挥薪湍缚晒┹喯x利用餌料單一，影響了輪蟲種群的生長和繁殖；已有實(shí)驗(yàn)證明，用酵母培養(yǎng)輪蟲比用小球藻培養(yǎng)輪蟲，輪蟲的密度更大，這可能與輪蟲的攝食速度比小球藻的繁殖速度快有關(guān)。小球藻組在第七天呈現(xiàn)下降是因?yàn)榧尤氲男∏蛟迮囵B(yǎng)液大量被輪蟲食用了，食物的減少限制了輪蟲種群的增長。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，以小球藻和面包酵母混合為餌料組的輪蟲密度和懷卵率最大，其次是酵母組，小球藻組最小。小球藻是目前生產(chǎn)中最常用的藻類，但其培養(yǎng)效果均差于其余兩組，這與輪蟲的攝食比小球藻的繁殖速度快有關(guān)。小球藻的增殖慢于輪蟲的增殖，使輪蟲的攝食量受到限制，進(jìn)而影響種群的生長和繁殖。目前已有實(shí)驗(yàn)證明，使用面包酵母和啤酒酵母作為輪蟲飼料時(shí)，其輪蟲密度大約是小球藻培養(yǎng)的10倍［12］。本試驗(yàn)中面包酵母比小球藻培養(yǎng)的輪蟲密度高和懷卵率高，也基本和前人的結(jié)果研究相類似，混合組明顯地優(yōu)于小球藻和面包酵母的單獨(dú)使用，除了與酵母培養(yǎng)輪蟲的效果比小球藻高以外，還與兩者搭配使用在一定程度上營養(yǎng)互補(bǔ)有關(guān)。另外混合組餌料對(duì)輪蟲的增加量在第4天開始顯著增加，懷卵率也是在第3天達(dá)到70%，達(dá)到了最高，因此提示我們?cè)趯?shí)際生產(chǎn)中進(jìn)行L-型褶皺臂尾輪蟲培養(yǎng)時(shí)，可采用海水小球藻與面包酵母混合進(jìn)行培養(yǎng)，并且在海水養(yǎng)殖魚類育苗中，要提前3-4天培養(yǎng)輪蟲，以提供充足的餌料。

3.3 生產(chǎn)實(shí)踐中培養(yǎng)輪蟲對(duì)餌料的選擇

工廠化高密度培養(yǎng)輪蟲，要求其餌料不但能使輪蟲快速增殖，而且能保證大量穩(wěn)定的供應(yīng)。雖然小球藻是培養(yǎng)輪蟲的適宜餌料，但由于輪蟲的攝食速度遠(yuǎn)大于藻類的繁殖速度，要完全依靠藻類來維持輪蟲的高密度培養(yǎng)難度相當(dāng)大，并且需要相當(dāng)規(guī)模的藻類培養(yǎng)配套設(shè)施。因此，小球藻作為輪蟲高密度培養(yǎng)的餌料有一定的局限性。面包酵母和啤酒酵母培養(yǎng)輪蟲，使培養(yǎng)密度比小球藻增加了10倍。其不足之處是，酵母細(xì)胞在高滲海水中極易分解，不僅降低了自身的餌料價(jià)值，還污染了水質(zhì)，使培養(yǎng)水體中有機(jī)物質(zhì)含量增加，細(xì)菌和原生動(dòng)物大量繁殖，影響輪蟲的培養(yǎng)。小球藻與酵母混合為餌料培養(yǎng)輪蟲，糅合了兩種餌料的優(yōu)勢(shì)，其培養(yǎng)效果均優(yōu)于兩者單獨(dú)使用。在使用酵母時(shí)要注意，投喂前先對(duì)酵母進(jìn)行充氧活化增強(qiáng)其活力，而且每天投喂量要適當(dāng)，這樣能有效地降低酵母對(duì)水質(zhì)的污染。小球藻營養(yǎng)較全面對(duì)水體污染極??；酵母方便易得易保存，培養(yǎng)輪蟲密度高。所以在實(shí)際生產(chǎn)中，用小球藻培養(yǎng)輪蟲的同時(shí)，投以適量的酵母有利于提高輪蟲的產(chǎn)量。

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