李偉 洪為松 傅麗芳 尉曉冬 許愛娥

黑素細胞移植治療甲狀腺功能異常白癜風的臨床觀察

李偉 洪為松 傅麗芳 尉曉冬 許愛娥

目的探討自體培養(yǎng)黑素細胞移植治療甲狀腺功能異常白癜風的臨床療效。方法白癜風患者分為2組,甲狀腺功能異常組30例和無甲狀腺功能異常組30例。負壓吸皰獲取患者正常表皮片,體外培養(yǎng)黑素細胞,經(jīng)2～5代體外培養(yǎng),受皮區(qū)應(yīng)用超脈沖CO2激光磨削去表皮后進行黑素細胞移植。所有患者均至少跟蹤觀察6個月。結(jié)果30例甲狀腺功能異?；颊咧?平均復(fù)色47%,7例復(fù)色面積超過90%,9例復(fù)色面積為50%～89%,53.3%達到＞50%的復(fù)色。無甲狀腺功能異常組平均復(fù)色75%,13例達到＞90%的復(fù)色,11例有50%～89%的復(fù)色,痊愈率與有效率分別為43.3%、80%,均較甲狀腺功能異常組療效明顯,兩組間差異有統(tǒng)計學意義(均P＜0.05)。移植部位位于面頸部、移植面積＞20 cm2時,組間有效率差異也有統(tǒng)計學意義(均P＜0.05)。表皮吸皰于腰部皮膚的痊愈率與有效率均為最差。結(jié)論臨床或亞臨床的甲狀腺異常會對白癜風的自體黑素細胞移植療效產(chǎn)生負面影響。

白癜風;黑素細胞;自體移植;甲狀腺

白癜風治療困難,通過自體培養(yǎng)并移植黑素細胞,能夠為白癜風白斑區(qū)域提供新的黑素細胞來源,是一種治療穩(wěn)定期白癜風患者的有效手段之一[1-2]。盡管本病病因不明,但多傾向于自身免疫學說。自身免疫性甲狀腺疾病同為自身免疫性疾病,與白癜風的相關(guān)性已被證實[3-4]。我們探討伴甲狀腺功能異常白癜風患者的自體培養(yǎng)黑素細胞移植治療的臨床療效,現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

對象與方法

一、對象

2012年2月至2013年6月,我院白癜風門診患者60例,均符合文獻[5]診斷標準。甲狀腺功能包括,促甲狀腺激素(TSH)、三碘甲狀腺原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、游離三碘甲狀腺原氨酸(FT3)、游離甲狀腺素(FT4),抗甲狀腺過氧化物酶抗體(抗TPOAb),激素和抗體水平超過正常上限值被認為是異常。上述指標中的一項及一項以上指標異常則被認為甲狀腺指標異常。將患者分為2組,甲狀腺功能異常組30例中男9例,女21例,年齡10～55歲,平均(28.6±9.8)歲;9例為節(jié)段型,21例為尋常型。無甲狀腺功能異常組為同期該門診進行黑素細胞移植且無伴發(fā)甲狀腺異常的患者,男16例,女14例,平均(23.6±12.6)歲;18例為節(jié)段型,12例為尋常型。移植部位分為面頸、軀干、四肢和手足。排除標準為伴有糖尿病、類風濕性關(guān)節(jié)炎、斑禿等其他自身免疫性疾病。兩組在性別、年齡、病程上差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05),具有可比性。病期參照白癜風活動程度指標(VIDA)評分標準[6],均為穩(wěn)定期白癜風患者,病程1～30年,病情穩(wěn)定均在6個月以上。試驗方案經(jīng)本院倫理委員會批準,所有患者均簽署知情同意書。

二、試劑和儀器

F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胎牛血清、谷氨酰胺、慶大霉素、0.25%胰酶、0.02%乙二胺四乙酸(EDTA)、0.05%胰酶-EDTA、D-Hank液、基因素(geneticin)均為美國Gibco公司產(chǎn)品。霍亂毒素(CT)、異丁基甲基黃嘌吟(IBMX)均為美國Sigma公司產(chǎn)品。人重組堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)為美國Pepro-Tech公司產(chǎn)品。倒置顯微鏡和立體顯微鏡購于日本Olympus公司,超脈沖CO2激光機為美國科醫(yī)人公司產(chǎn)品。

三、方法

1.表皮細胞懸液制備和黑素細胞培養(yǎng)[7]：當細胞數(shù)量達到移植要求時,將黑素細胞從培養(yǎng)瓶上消化下來,離心收集黑素細胞懸浮于F12培養(yǎng)基中備用。

2.黑素細胞移植：用復(fù)方利多卡因軟膏涂于移植區(qū)皮膚表面作局部麻醉,用超脈沖CO2激光磨削(能量225 mJ/s)去除表皮層,根據(jù)移植白斑區(qū)面積按6×104～1×105細胞/cm2收集黑素細胞,用巴氏吸管將細胞懸液均勻接種在去表皮層的移植區(qū),無菌凡士林紗布覆蓋,外敷含F(xiàn)12培養(yǎng)液濕紗布,包扎固定,囑咐患者平臥休息1 h,7～10 d后去除紗布,1個月后觀察療效,所有患者均至少跟蹤觀察6個月。

3.療效判斷：治療前后及治療過程中均拍照,用Adobe Photoshop7.0圖像軟件系統(tǒng)測復(fù)色面積。療效標準：痊愈為色素恢復(fù)90%～100%,顯效為色素恢復(fù)50%～89%,好轉(zhuǎn)為色素恢復(fù)10%～49%,無效為色素恢復(fù)＜10%。痊愈率=痊愈例數(shù)/總例數(shù)×100%。有效率=(痊愈+顯效)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

4.統(tǒng)計學分析：使用SPSS17.0統(tǒng)計軟件分析,各組間差異比較采用χ2檢驗,α=0.05。

結(jié) 果

一、細胞培養(yǎng)

從患者表皮中分離到的黑素細胞數(shù)量為(0.47±0.25)×104/cm2。表皮細胞懸液接種至培養(yǎng)瓶2 h后細胞開始貼壁。在第3天加入基因素,3～4 d后即可選擇性去除角質(zhì)形成細胞和成纖維細胞而獲得純黑素細胞。在經(jīng)過15～30 d(平均24.2 d)的培養(yǎng)后進行傳代,接種的細胞均為第2～5代黑素細胞,用于移植的細胞數(shù)量平均為(5.6±3.4)×106個,至移植時黑素細胞的數(shù)量增加44～315倍。

二、移植療效比較

除無甲狀腺功能異常組1例患者出現(xiàn)移植區(qū)皮膚紅腫且紅腫消退后白斑區(qū)無復(fù)色外,余患者均無過敏、感染等不良反應(yīng)。甲狀腺功能異常組4例患者供皮區(qū)出現(xiàn)同形反應(yīng),平均復(fù)色17.5%,無甲狀腺功能異常組1例患者伴供皮區(qū)同形反應(yīng),復(fù)色70%。60例穩(wěn)定期白癜風患者,移植6個月后隨訪,甲狀腺功能異常組30例平均復(fù)色47%,7例復(fù)色面積超過90%,痊愈率為23.3%,9例復(fù)色面積為50%～89%,有效率53.3%,治療面積平均為48.2 cm2,最大面積達120 cm2。無甲狀腺功能異常組30例平均復(fù)色75%,13例達到＞90%的復(fù)色,11例有50%～89%的復(fù)色,痊愈率與有效率分別為43.3%、80%,平均治療面積為(52.7±37.3)cm2,治療最大面積為150 cm2。

1.兩組間移植療效比較：甲狀腺功能異常組30例痊愈7例,顯效9例,好轉(zhuǎn)5例,無效9例,有效率與痊愈率分別為53.3%、23.3%,無甲狀腺功能異常組30例痊愈13例,顯效11例,好轉(zhuǎn)2例,無效4例,有效率與痊愈率分別為80%、43.3%,均高于甲狀腺功能異常組患者。兩組療效間、有效率與痊愈率比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。由于無甲狀腺功能異常組平均秩次為25.87＜甲狀腺功能異常組的平均秩次35.13,故無甲狀腺功能異常組的療效明顯好于甲狀腺異常治療組。

2.移植部位：見表1。甲狀腺功能異常組內(nèi)各移植部位間療效差異、有效率與痊愈率差異均無統(tǒng)計學意義(均P＞0.05)。兩組間不同部位比較中,面頸部有效率差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),且無甲狀腺功能異常組有效率明顯高于甲狀腺功能異常組(92.9%比42.9%),而痊愈率差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。軀干部位移植療效比較中,有效率與痊愈率差異均無統(tǒng)計學意義(均P＞0.05)。四肢與手足因入選病例較少未進行統(tǒng)計學分析。

3.移植面積：甲狀腺功能異常組移植面積≤20 cm2的有效率為62.5%,痊愈率為25%;面積＞20 cm2有效率50%,痊愈率22.7%。面積≤ 20 cm2的有效率與痊愈率均高于面積＞20 cm2,但組內(nèi)移植面積間有效率與痊愈率差異均無統(tǒng)計學意義(均P＞0.05)。無甲狀腺功能異常組移植面積≤20 cm2的皮損,有效率與痊愈率分別為75%和75%,兩組間有效率和痊愈率比較,差異均無統(tǒng)計學意義(均P＞0.05);面積 ＞20 cm2的白斑,有效率為80.8%,痊愈率為38.5%,兩組間有效率差異有統(tǒng)計學意義(均P＜0.05),無甲狀腺功能異常組高于甲狀腺功能異常組,而痊愈率無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

4.吸皰部位：在白癜風患者正常皮膚處吸皰制備表皮細胞懸液,8例甲狀腺功能異常組患者取自腹部正常皮膚,13例取自臀部,9例取自腰部皮膚,痊愈率分別為25%、30.8%、11.1%,有效率分別為75%、53.8%、33.3%,吸皰于腰部皮膚的痊愈率與有效率均最差。甲狀腺功能異常組內(nèi)各吸皰部位療效、痊愈率與有效率差異無統(tǒng)計學意義(均P＞0.05)。無甲狀腺功能異常組8例取自腹部,18例取自臀部,4例取自腰部皮膚,痊愈率分別為37.5%、44.4%、50%;有效率則 75%、83.3%、75%,兩組間相同吸皰部位間療效差異均無統(tǒng)計學意義(均P＞0.05)。

5.白癜風類型：見表2。30例甲狀腺功能異常組患者中節(jié)段型白癜風有效率66.7%,痊愈率33.3%;尋常型白癜風有效率47.6%,痊愈率19.0%。節(jié)段型白癜風的有效率、痊愈率均高于尋常型白癜風,但兩者的有效率與痊愈率差異無統(tǒng)計學意義(均P＞0.05)。兩組間相同白癜風類型間比較,痊愈率與有效率均無統(tǒng)計學意義(均P＞0.05)。

6.甲狀腺功能異常組復(fù)色水平與甲狀腺功能和抗體水平的相關(guān)分析：見表3。TSH水平與抗TPOAb水平存在正相關(guān)(r=0.396),且相關(guān)性具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05),余各項指標間相關(guān)性差異均無統(tǒng)計學意義。

討 論

白癜風發(fā)病率約為1%～2%[8],易伴發(fā)甲狀腺異常(橋本甲狀腺炎,Graves病,甲狀腺功能減退等)。Pagovich等[9]報告25%白癜風患者伴發(fā)甲狀腺異常,常規(guī)篩查甲狀腺功能已為大多數(shù)患者所接受[10-13]。我們使用體外培養(yǎng)的自體黑素細胞移植治療了30例伴發(fā)甲狀腺異常的穩(wěn)定期白癲風患者和30例甲狀腺功能正常移植患者,30例甲狀腺功能異常組患者有效率與痊愈率分別為53.3%、23.3%,而無甲狀腺功能異常組這一比例分別為80%、43.3%,均明顯高于甲狀腺功能異常組患者。無甲狀腺功能異常組平均復(fù)色75%也明顯高于甲狀腺功能異常組的47%,可能與二者均存在自身免疫異常,影響移植療效有關(guān)。甲狀腺功能異常組中53.3%的患者達到了50%以上的復(fù)色,較無甲狀腺功能異常組有著較為明顯的差距,與洪為松等的報道有較大差距[1-2，14]。上述結(jié)果均表明,臨床或亞臨床的甲狀腺異常會對白癜風的自體黑素細胞移植療效產(chǎn)生負面影響。

我們的資料顯示,面頸部移植療效無甲狀腺功能異常組顯著高于甲狀腺功能異常組,且差異有統(tǒng)計學意義,其余部位療效雖有差異,但未發(fā)現(xiàn)有統(tǒng)計學意義。對于白癜風皮損移植面積,甲狀腺功能異常組未發(fā)現(xiàn)其與移植療效相關(guān),但當白斑＞20 cm2時,兩組間有效率差異明顯(50.0%比80.8%)。此外,表皮吸皰部位和白癜風的類型的各項比較均未發(fā)現(xiàn)差異有統(tǒng)計學意義,但若吸皰于腰部皮膚,其痊愈率與有效率均最差,對此結(jié)果尚需進一步研究。

表1 白癜風患者不同部位皮損移植療效比較(例)

表2 兩組不同白癜風類型間比較(例)

表3 甲狀腺功能異常組復(fù)色水平與甲狀腺功能和抗體水平的Pearson相關(guān)分析

[1]Hong WS，Hu DN，Qian GP，et al.Treatment of vitiligo in children and adolescents by autologous cuhured pure melanocytes transplantation with comparison of efficacy to results in adults[J].J Eur Acad Dermatol Venereol，2011，25(5):538-543.

[2]Chen YF，Yang PY，Hu DN，et al.Treatment of vitiligo by transplantation of cultured pure melanocyte suspension:analysis of 120 cases[J].J Am Acad Dermatol，2004，51(1):68-74.

[3]Cho SB，Kim JH，Cho S，et al.Vitiligo in children and adolescents:association with thyroid dysfunction[J].J Eur Acad Dermatol Venereol，2011，25(1):64-67.

[4]Williamson S，Greene SA.Incidence of thyrotoxicosis in childhood:a national population based study in the UK and Ireland[J].Clin Endocrinol(Oxf)，2010，72(3):358-363.

[5]中國中西醫(yī)結(jié)合學會皮膚性病專業(yè)委員會色素病學組.白癜風臨床分型及療效標準(2003年修訂稿)[J].中華皮膚科雜志，2004，37(7):440.

[6]Njoo MD，Das PK，Bos JD，et al.association of the Kobner phenomenon with disease activity and therapeutic responsiveness in vitiligo vulgaris[J].Arch Dermatol，1999，135(4):407-413.

[7] 洪為松，傅麗芳，尉曉冬，等.黑素細胞個體化培養(yǎng)體系的建立及應(yīng)用[J].中華皮膚科雜志，2011，44(9):618-622.

[8]Mulekar SV.Melanocyte-keratinocyte cell transplantation for stable vitiligo[J].Int J Dermatol，2003，42(2):132-136.

[9]Pagovich OE，Silverberg JI，F(xiàn)reilich E，et al.Thyroid abnormalities in pediatric patients with vitiligo in New York City[J].Cutis，2008，81(6):463-466.

[10]Kroon MW，Joore IC，Wind BS，et al.Low yield of routine screening for thyroid dysfunction in asymptomatic patients with vitiligo[J].Br J Dermatol，2012，166(3):532-538.

[11]Vrijman C，Kroon MW，Limpens J，et al.The prevalence of thyroid disease in patients with vitiligo:a systematic review[J].Br J Dermatol，2012，167(6):1224-1235.

[12]Uncu S，Yayli S，Bahadir S，et al.Relevance of autoimmune thyroiditis in children and adolescents with vitiligo[J].Int J Dermatol，2011，50(2):175-179.

[13]Kakourou T，Kanaka-Gantenbein C，Papadopoulou A，et al.Increased prevalence of chronic autoimmune(Hashimoto′s)thyroiditis in children and adolescents with vitiligo[J].J Am Acad Dermatol，2005，53(2):220-223.

[14] 洪為松，傅麗芳，尉曉冬，等.自體黑素細胞移植治療243例面頸部白癜風療效及相關(guān)因素分析[J].中華移植雜志，2011，5(4):277-281.

2013-10-08)

(本文編輯:吳曉初)

Autologous melanocyte transplantation for the treatment of vitiligo in patients with abnormal thyroid function:a clinical observation

Li Wei，Hong Weisong，F(xiàn)u Lifang，Wei Xiaodong，Xu Aie.Department of Dermatology，Affiliated Third People′s Hospital of Hangzhou，Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310009，China

Xu Aie，Email:xuaiehz@msn.com

ObjectiveTo evaluate the therapeutic efficacy of autologous melanocyte transplantation for the treatment of vitiligo in patients with abnormal thyroid function.MethodsA total of 60 patients with vitiligo were enrolled in this study，including 30 with abnormal thyroid function and 30 without.Epidermal sheets were obtained by suction blister biopsy from the normal skin of all the patients followed by melanocyte isolation and culture.After 2-5 passages of subculture，the melanocytes were transplanted onto vitiliginous lesions，which were abraded previously by ultra-pulsed CO2laser，in the corresponding patients.All the patients were followed for 6-12 months.ResultsOf the 30 patients with abnormal thyroid function，7 patients achieved more than 90%repigmentation，9 patients 50%-89%repigmentation，53.3%more than 50%repigmentation，with the average repigmentation rate being 47%within 6 months after the transplantation.Meanwhile，13 out of the 30 patients without abnormal thyroid function showed more than 90%repigmentation，11 showed 50%-89%repigmentation，with the average repigmentation rate being 75%.Both the cure rate and response rate were significantly higher in the patients without abnormal thyroid function than in those with(cure rate，43.3%vs.23.3%，P＜ 0.05;response rate，80%vs.53.3%，P＜ 0.05).Significant differences were also found in the response rate for lesions on the face or neck and for those sized more than 20 cm2between the two groups of patients(bothP＜0.05).The lesions transplanted with epidermal melanocytes from the waist exhibited the lowest cure rate and response rate.ConclusionClinical or subclinical thyroid dysfunction may have a negative impact on the efficacy of autologous melanocyte transplantation in vitiligo.

Vitiligo;Melanocytes;Autologous transplantation;Thyroid

10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2014.05.009

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生重大科技計劃(WKJ2012-2-036)

310009杭州,浙江中醫(yī)藥大學附屬杭州市第三人民醫(yī)院皮膚科

許愛娥,Email：xuaiehz@msn.com