李 強(qiáng) 李江民 文 婧 (遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科，貴州 遵義 563000)

本研究采用鏈霉親合素-生物素過氧化物酶復(fù)合物(SABC)法檢測了兩型慢性鼻竇炎患者上頜竇黏膜局部白細(xì)胞介素(IL)-1、IL-8、干擾素(INF)-γ和粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激集落因子(GM-CSF)等細(xì)胞因子以及細(xì)胞間黏附分子(ICAM)-1、血管細(xì)胞黏附分子(VCAM)-1的表達(dá)情況，為進(jìn)一步了解慢性鼻竇炎不同類型發(fā)病機(jī)制的差異提供參考數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年2月至2013年2月在我院接受診斷與治療的慢性鼻竇炎患者54例，其中男39例，女15例;年齡19 ～59 歲，平均(46.25±10.22)歲;根據(jù)1997 年海口慢性鼻竇炎鼻息肉臨床分型分期及內(nèi)鏡手術(shù)療效評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)將54例慢性鼻竇炎患者的疾病類型分為Ⅰ型(n=30例)和Ⅱ型(n=24例)。其中Ⅰ型組30例，男21例，女9例;年齡20～59歲，平均(46.38±10.19)歲;Ⅱ型組24 例，男18例，女 6例;年齡19～58歲，平均(46.03±10.62)歲;另外選擇同期在我院接受診斷與治療的上頜竇囊腫患者30例(對照組)，均無鼻部癥狀，其中男20 例，女10 例;年齡21～62歲，平均(46.16±10.42)歲;各組的年齡、性別比較無明顯差異，具有可比性(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本制作 手術(shù)切除上頜竇黏膜標(biāo)本，常規(guī)10%甲醛固定，先在鐵模具中加入一些液態(tài)石蠟，稍微冷卻，然后再將待包埋的組織置于石蠟之中，并排列整齊，再將塑料模具盒蓋上，最后加入少許液體石蠟，進(jìn)行冷凍，使石蠟變成固態(tài)〔1〕。將包埋好的組織從模具上取下來，并置于石蠟切片機(jī)上，切片機(jī)通過調(diào)節(jié)上下左右來使組織和切割方向一致，然后調(diào)節(jié)切片的厚度，切片厚度5 μm〔2～4〕。當(dāng)組織載玻片置于40℃溫水中之前，要先將水浴中的氣泡趕走，以免氣泡受熱上浮而貼到組織上，組織受熱展開，最好是組織不起皺紋，用載玻片撈組織時(shí)，一般取載玻片的下1/3或者下1/2，一般每種組織撈5～6張，其中2～3張是備用的，每張載玻片上通常撈兩份組織，做對照使用，誤差較小，而且撈載玻片的時(shí)候最好方向一致，以便觀察，再將撈出來的載玻片置于架子上，放入37℃溫箱中烘干〔5〕。

1.2.2 試劑 采用SABC法〔6〕測定，試劑盒均購自北京中山生物技術(shù)公司，IL-1、IL-8、INF-γ和 GM-CSF等細(xì)胞因子以及ICAM-1、VCAM-1的單克隆抗體均由ZYMED公司生產(chǎn)。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)步驟 (1)常規(guī)脫蠟;(2)抗原修復(fù);(3)血清封閉;(4)加一抗，對照組加磷酸鹽緩沖液(PBS);(5)加生物素化二抗加 SABC;(6)顯色〔7，8〕。

1.2.4 陽性細(xì)胞計(jì)數(shù) 采用雙盲法在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜呈棕黃色者為細(xì)胞因子染色陽性細(xì)胞，每張切片觀察10個(gè)高倍視野(×400)，計(jì)算每個(gè)高倍鏡視野下陽性細(xì)胞平均數(shù)〔9，10〕。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

所檢上頜竇黏膜為假覆層柱狀纖毛上皮，病變區(qū)黏膜上皮有許多脫落區(qū)，上頜竇黏膜中幾種細(xì)胞因子主要由黏膜下及血管周圍的炎性細(xì)胞(如淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞以及部分上皮細(xì)胞)表達(dá)。Ⅰ型組黏膜肥厚增生，黏膜下有大量炎性細(xì)胞浸潤及不同程度的促炎細(xì)胞因子表達(dá)，黏附分子在黏膜下小血管上皮細(xì)胞及部分腺體細(xì)胞呈陽性表達(dá)。Ⅱ型組黏膜大部分呈息肉樣變化，高度水腫，黏膜內(nèi)有多種炎性細(xì)胞浸潤及細(xì)胞因子的表達(dá)，黏附分子在黏膜下小血管上皮細(xì)胞及部分腺體細(xì)胞呈陽性表達(dá)。Ⅰ型組患者的 IL-1、IL-8、INF-γ、GM-CSF、ICAM-1、VCAM-1等細(xì)胞因子水平與對照組比較有明顯差異(t=12.32、11.54、6.74、3.25、4.18、2.68，P＜0.05)。Ⅱ型組患者的IL-1、IL-8、INF-γ、GM-CSF、ICAM-1 等細(xì)胞因子水平與對照組比較有明顯差異(t=11.22、11.87、6.98、5.01、7.23，P＜0.05)。Ⅰ型組與Ⅱ型組相比較，在IL-1、GM-CSF、ICAM-1等三個(gè)細(xì)胞因子比較有明顯差異(t=6.12、3.88、3.41，P＜0.05)。見表 1。

表1 三組患者的IL-1、IL-8、INF-γ、GM-CSF、ICAM-1、VCAM-1等細(xì)胞因子水平對比(s)

表1 三組患者的IL-1、IL-8、INF-γ、GM-CSF、ICAM-1、VCAM-1等細(xì)胞因子水平對比(s)

與對照組比較:1)P＜0.05;與Ⅱ型組比較:2)P＜0.05

GM-CSF ICAM-1 VCAM-1Ⅰ型組 30 11.12±2.301)2) 10.80±2.861) 8.55±1.931) 2.26±0.631)2) 7.22±2.501)2) 1.62±0.651)組別 n IL-1 IL-8 INF-γ.14±1.88 1.26±0.56Ⅱ型組 24 6.93±1.601) 11.11±2.121) 9.70±1.891) 5.96±1.521) 9.77±3.431) 1.34±0.77對照組 30 5.54±1.11 4.20±0.92 3.82±1.32 1.74±0.32 4

3 討論

近年文獻(xiàn)報(bào)道〔11〕，鼻竇炎存在局部微環(huán)境控制下的炎癥反應(yīng)，其中與炎癥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞因子參與了慢性鼻竇炎患者的炎癥調(diào)節(jié)、免疫防御、損傷愈合等病理生理過程。目前認(rèn)為細(xì)胞因子和細(xì)胞黏附分子在鼻竇炎局部微環(huán)境的炎癥反應(yīng)中起重要作用。但是，目前有關(guān)細(xì)胞因子在慢性鼻竇炎發(fā)病過程中作用機(jī)制的研究結(jié)果尚不一致〔12～14〕。本研究采用SABC法檢測了兩型慢性鼻竇炎患者上頜竇黏膜局部IL-1、IL-8、INF-γ和GM-CSF等細(xì)胞因子以及ICAM-1、VCAM-1的表達(dá)情況。本研究結(jié)果表明在鼻竇炎鼻息肉組織的病理變化與細(xì)胞因子有密切的關(guān)系，并與相關(guān)學(xué)者的研究結(jié)果一致〔15〕。Ⅰ型組與Ⅱ型組IL-1、GM-CSF、ICAM-1水平有明顯差異，這可能是由于Ⅰ、Ⅱ兩型鼻竇炎在發(fā)病機(jī)制方面存在差異。

綜上，促炎細(xì)胞因子及ICAM-1在慢性鼻竇炎發(fā)病中起一定的作用，但兩型鼻竇炎起作用的細(xì)胞因子并不相同，通過對不同細(xì)胞因子類型及黏附分子的研究可進(jìn)一步了解慢性鼻竇炎不同類型發(fā)病機(jī)制的差異。

1 呂 晶，劉紅剛.IgG4在鼻腔鼻竇炎性病變組織中的表達(dá)及其意義〔J〕.中華病理學(xué)雜志，2013;42(6):386-91.

2 孫照環(huán)，鄭 巖，王海琦.觀察鼻內(nèi)鏡術(shù)后鼻黏膜誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的表達(dá)〔J〕.中國中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科雜志，2013;21(2):127-8，132.

3 何 寧，梁建平，陳 俊，等.鼻息肉組織總IgE表達(dá)與IgE介導(dǎo)Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)的關(guān)系〔J〕.中國臨床新醫(yī)學(xué)，2012;5(8):699-702.

4 胡彬雅，趙斯君，任基浩，等.Toll樣受體4 mRNA在慢性鼻竇炎兒童扁桃體組織及外周血單核細(xì)胞的表達(dá)〔J〕.中國中西醫(yī)結(jié)合耳鼻咽喉科雜志，2011;19(5):314-6，327.

5 王 鋒，王德輝.人鈣離子激活的氯離子通道在慢性鼻竇炎鼻竇黏膜中表達(dá)的研究〔J〕.中國眼耳鼻喉科雜志，2011;11(4):211-4.

6 何 寧，梁建平，陳 俊，等.IGF-ⅠR在鼻息肉組織中的表達(dá)與變應(yīng)性因素的關(guān)系〔J〕.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2011;25(22):1019-22.

7 王煉紅.PCNA與LNGFr在嗅黏膜中的表達(dá)對慢性鼻竇炎伴嗅覺障礙患者的影響〔J〕.中國醫(yī)刊，2013;48(7):87-9.

8 盧智慧.兒童慢性鼻竇炎151例臨床分析〔J〕.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2011;25(17):800-1.

9 彭向東，姚 婕，褚玉敏，等.慢性鼻竇炎160例臨床分析〔J〕.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013;12(12):956-7.

10 章錦秀，史劍波.慢性鼻竇炎鼻分泌物中嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白的表達(dá)及臨床意義〔J〕.暨南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版)，2011;32(2):215-7.

11 王鵬舉，沈 瑩.慢性鼻竇炎患者手術(shù)前后血清表皮生長因子含量的變化〔J〕.臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2011;25(2):49-50.

12 曹雪秋.鼻內(nèi)鏡治療老年慢性鼻竇炎鼻息肉122例〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2013;33(6):1399-400.

13 鄒 華，高 偉，田 鵬，等.慢性鼻竇炎伴鼻息肉與HLA-DPB1、DQB1基因相關(guān)性研究〔J〕.中國免疫學(xué)雜志，2011;27(10):899-902.

14 Muneif AS，左可軍，史劍波，等.難治性慢性鼻竇炎的相關(guān)因素探討〔J〕.中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志，2010;45(12):1003-7.

15 劉亦青，欒德恒，高 昆，等.慢性鼻竇炎患者變應(yīng)性因素臨床分析〔J〕.山東醫(yī)藥，2012;52(46):82-3.