秦莉花 鐘華美 陳曉陽 吳艷飛 李 晟 黃 寬 (湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 40208)

冠蓋藤，又名青棉花藤、花藤、猴頭藤，為虎耳草科植物〔1〕，主要分布在長江以南各省區(qū)，野生于溪旁，山谷，林下，常以氣根攀附于谷溝濕潤石崖或喬木上〔2〕。民間用于骨性關(guān)節(jié)炎(OA)治療，其療效顯著。本研究旨在通過建立炎癥和疼痛模型以探討其抗炎鎮(zhèn)痛作用。

1 材料與方法

1.1 動物 健康KM小鼠，清潔級，體重18～22 g，雌雄皆用;健康SD大鼠，雄性，清潔級，體重180～220 g，以上動物均由長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實驗動物科技服務(wù)部代購，動物合格證號:scxk(湘)2009-0012。

1.2 藥物 冠蓋藤采于湖南省懷化市沅陵縣，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室鑒定為柔毛冠蓋藤，制備成水煎液;復(fù)方阿司匹林片(大連美創(chuàng)藥業(yè)有限公司，國藥準字H20024666);雷公藤多甙片(上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司，批號Z31020415)。以上藥物用時均由生理鹽水配成所需濃度。

1.3 試劑與儀器 二甲苯(天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號20080921);角叉菜膠(Sigma公司，批號45F-0427);冰醋酸(濰坊潤潔化學(xué)有限公司);其他試劑均為市售分析純。電子天平(德國Sartorius公司產(chǎn)品，型號BP211D);泰盟PV-200足趾容積測量儀(成都泰盟科技有限公司);GJ28402型熱板測痛儀(浙江寧海白石電子醫(yī)藥儀器)。

1.4 冠蓋藤對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 50只KM小鼠，按體質(zhì)量隨機分成5組，每組10只，即模型組、阿司匹林組、冠蓋藤低、中、高劑量組(GGT低、中、高劑量組)。GGT低、中、高劑量組生藥分別按2.31、4.62、9.24 g/kg，阿司匹林組按0.20 g/kg，模型組予相應(yīng)量生理鹽水，均灌胃給藥，連續(xù)7 d。參照文獻〔3，4〕，于末次給藥30 min后，立即在右耳前后兩面均勻涂抹二甲苯0.02 ml/只致炎，左耳不涂做對照。致炎后30 min處死小鼠，用7 mm打孔器分別取兩耳相同部位耳片。以左右耳質(zhì)量之差為其腫脹程度，計算各組耳腫脹度。炎癥抑制率(%)=(模型組腫脹度-給藥組腫脹度)/模型組腫脹度)×100%。

1.5 冠蓋藤對角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足趾腫脹的影響 SD大鼠50只，按體重隨機分成5組，即模型組、雷公藤組、GGT低劑量組、GGT中劑量組、GGT高劑量組。GGT低、中、高劑量組給藥同上(二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗);雷公藤組予雷公藤多甙片混懸液15.44 mg/kg;模型組予相應(yīng)量生理鹽水;均灌胃給藥，連續(xù)7 d。參照文獻〔5～7〕，正式實驗開始前按后足容積法測定實驗大鼠右后足容積，測2次，取平均值作為致炎前足趾容積。末次給藥后1 h，分別在大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠混懸液 0.1 ml/只致炎，測定 2、4、6 h 右后足跖容積。

1.6 冠蓋藤對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 50只KM小鼠，按體質(zhì)量隨機分成5組，分組同上。GGT低、中、高劑量組給藥同上(二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗);阿司匹林組予阿司匹林0.20 g/kg;模型組予相應(yīng)量生理鹽水;均灌胃給藥，連續(xù)7 d。參照文獻〔8，9〕，與末次給藥30 min后，小鼠腹腔注射0.6% 冰醋酸0.1 ml/10 g，記錄小鼠扭體潛伏期及15 min內(nèi)各組小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)。

1.7 冠蓋藤對小鼠熱板致痛實驗的影響 參照文獻〔10，11〕，KM小鼠，置于(55±0.5)℃熱板上，記錄小鼠自熱板上至出現(xiàn)舔后足反應(yīng)所需時間，即為痛閾值，凡＜5 s或＞30 s及跳躍的小鼠均淘汰，合格小鼠再測1次痛闊值，取兩次平均值。取合格小鼠50只，按照痛閾值隨機分為5組，分組同上。GGT低、中、高劑量組給藥同上(二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗);阿司匹林組予阿司匹林0.20 g/kg;模型組予相應(yīng)量生理鹽水;均灌胃給藥，連續(xù)7 d。于末次給藥30 min后測定痛閾值，并計算痛閾提高百分率，痛閾提高百分率=(給藥后平均痛閾值－給藥前平均痛閾值)/給藥前平均痛閾值×100%。

2 結(jié)果

2.1 冠蓋藤對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響 與模型組比較，各藥物組均能減輕二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，GGT高劑量效果接近阿司匹林組。見表1。

表1 冠蓋藤對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(s，n=10)

表1 冠蓋藤對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(s，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與阿司匹林組比較:3)P＜0.01

組別 腫脹度(mg)抑制率(%)模型組 13.53±1.62 －阿司匹林組 5.13±1.452) 62.08 GGT高劑量組 7.64±1.322)3) 43.53 GGT中劑量組 9.52±1.632)3) 29.63 GGT低劑量組 11.87±2.071)3) 12.26

2.2 冠蓋藤對角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響 致炎后2 h，與模型組比較，各藥物組能顯著減少角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹;與雷公藤組比較，GGT高、中、低劑量組均無差異(P＞0.05)。致炎后4 h，與模型組比較，GGT高、中劑量組和雷公藤組能顯著減少角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹;與雷公藤組比較，GGT高、中、低劑量組均無統(tǒng)計學(xué)意義。致炎后6 h，與模型組比較，雷公藤組能顯著減少角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹;與雷公藤組比較，GGT中、低劑量組有顯著性差異(P＜0.05)。見表2。

表2 冠蓋藤對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響(s，n=10)

表2 冠蓋藤對角叉菜膠致大鼠足跖腫脹的影響(s，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與雷公藤組比較:3)P＜0.01

組別 給藥前容積(ml)致炎后腫脹足容積(ml)2 h 4 h 6 h模型組 1.34±0.12 1.89±0.13 1.73±0.10 1.67±0.09雷公藤組 1.36±0.13 1.66±0.152)1.59±0.162)1.53±0.132)GGT 高劑量 1.35±0.08 1.59±0.122)1.60±0.041) 1.58±0.06 GGT 中劑量 1.38±0.10 1.70±0.152)1.62±0.101)1.63±0.083)GGT 低劑量 1.36±0.09 1.73±0.141) 1.69±0.13 1.65±0.103)

2.3 冠蓋藤對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響 潛伏期方面，與模型組比較，各藥物組的潛伏期明顯延長，有顯著性差異;與阿司匹林組比較，GGT低劑量組有顯著性差異。扭體次數(shù)方面，與模型組比較，各藥物組扭體次數(shù)明顯降低，有顯著性差異;與阿司匹林組比較，GGT低劑量組有顯著性差異。見表3。

表3 冠蓋藤對小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響(s，n=10)

表3 冠蓋藤對小鼠醋酸扭體反應(yīng)的影響(s，n=10)

與模型組比較:1)P＜0.05，2)P＜0.01;與阿司匹林組比較:3)P＜0.01，下表同

組別 潛伏期(s)扭體次數(shù)(次)模型組 278.16±21.23 34.90±5.88阿司匹林組 363.40±15.292) 15.30±5.522)GGT 高劑量組 342.50±20.232) 18.60±5.832)GGT 中劑量組 339.90±21.352) 22.80±6.652)GGT 低劑量組 302.70±43.091)3) 29.00±4.611)3)

2.4 冠蓋藤對小鼠熱板致痛實驗的影響 與模型組比較，各藥物組給藥后痛閾值均升高，與阿司匹林組比較，GGT低劑量組有顯著性差異(P＜0.05)。見表4。

表4 冠蓋藤對小鼠熱板致痛實驗的影響(s，n=10)

表4 冠蓋藤對小鼠熱板致痛實驗的影響(s，n=10)

組別 痛閾值(s)給藥前 給藥后痛閾提高百分率(%)模型組 14.82±2.11 15.11±3.05 1.96阿司匹林組 13.96±2.09 20.40±2.672) 46.13 GGT 高劑量組 14.54±2.17 19.72±2.522) 35.62 GGT 中劑量組 14.62±3.38 19.23±2.312) 31.53 GGT 低劑量組 13.99±2.08 16.32±2.463) 1.67

3 討論

OA是從關(guān)節(jié)軟骨起病，影響整個關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)，包括軟骨下骨、韌帶、滑膜、關(guān)節(jié)囊及關(guān)節(jié)外肌肉，最終因關(guān)節(jié)軟骨全部脫失而導(dǎo)致關(guān)節(jié)畸形和功能喪失的一種疾病〔12〕?，F(xiàn)代研究表明OA的癥狀體征主要表現(xiàn)為:疼痛、局部性晨僵、腫脹、畸形。本病隨其病情發(fā)展，嚴重影響到中老年人生活質(zhì)量。

本研究采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠致大鼠足趾腫脹兩種非特異性炎癥模型評價冠蓋藤對早期急性炎癥的影響;以醋酸致小鼠扭體和熱板法兩種用于鎮(zhèn)痛藥粗篩的經(jīng)典常用方法評價冠蓋藤的鎮(zhèn)痛作用。本實驗結(jié)果提示冠蓋藤水提取物有明顯的鎮(zhèn)痛作用。

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