張小博 李艷會(huì) 李開良 張 平 (吉林大學(xué)第一醫(yī)院肝膽胰外科，吉林 長(zhǎng)春 300)

胰腺癌是預(yù)后最差的腫瘤之一，具有發(fā)病隱匿、早期癥狀不典型、診斷困難、可出現(xiàn)局部淋巴結(jié)和血行轉(zhuǎn)移、惡性程度高以及對(duì)各種治療均不敏感等特點(diǎn)。有研究表明〔1〕，胰腺癌轉(zhuǎn)移是該病難以治愈的主要原因之一。腫瘤的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移等過程與腫瘤血管生成密切相關(guān)，也與多種細(xì)胞因子的作用有關(guān)〔2〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)主要作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一類活性依賴于鋅離子和鈣離子的蛋白水解酶，幾乎在所有腫瘤組織中的表達(dá)均較正常組織明顯增加〔3〕，其過量表達(dá)后打破癌細(xì)胞生存的微環(huán)境平衡狀態(tài)，破壞了細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)和基底膜(BM)的結(jié)構(gòu)，促進(jìn)了癌細(xì)胞的侵襲能力和轉(zhuǎn)移能力。本文分析胰腺癌組織的中VEGF、MMP-2、MMP-9的表達(dá)情況及相關(guān)性。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源 取自2009年1月至2013年1月于吉林大學(xué)第一醫(yī)院接受手術(shù)治療的50例胰腺癌患者手術(shù)切除病理標(biāo)本作為樣本。年齡34～76〔平均(55.2±10.3)歲〕，中位年齡55歲，其中男33例，女17例。病理分化情況:低分化腺癌13例，中分化23例，高分化14例。所有患者均有完整的臨床資料。另取同期行膽胰腺癌根治術(shù)(胰十二指腸切除術(shù))的膽管癌或胰腺癌癌旁1 cm正常胰腺組織10例作為對(duì)照。

1.2 SP法 所有標(biāo)本均經(jīng)過甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋;分別采用兔抗人VEGF多克隆抗體(bs-0279R)、兔抗人MMP-2多克隆抗體(bs-0412R)、兔抗人MMP-9多克隆抗體(bs-0397R)均購自北京博奧森生物制品廠。采用福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司的S-P免疫組化試劑盒及二氨基聯(lián)苯胺(DAB)染色，具體步驟參照邁新公司免疫組化染色步驟說明書。

1.3 結(jié)果判斷 參照文獻(xiàn)〔4～6〕，MMP-2、MMP-9、VEGF 表達(dá)判定陽性的標(biāo)準(zhǔn):胞質(zhì)有棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，高倍鏡下(400倍)隨機(jī)取10個(gè)高倍視野，陽性細(xì)胞數(shù)＞10%定為陽性，＜10%定為陰性。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞所占百分比結(jié)果評(píng)分相加，0～3分為陰性(－)，4～7分為陽性(+)。見表1。

表1 免疫組化計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，陽性率組間比較采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)分析用非參數(shù)相關(guān)(Spearman)分析。

2 結(jié)果

2.1 MMP-2表達(dá)及與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 MMP-2在胰腺癌組織及胰腺正常組織均有表達(dá)。胰腺癌患者M(jìn)MP-2陽性表達(dá)〔34例(68%)〕明顯高于胰腺正常組織〔2例(20%)〕(P＜0.05)。圖1。

MMP-2的陽性表達(dá)率隨著胰腺癌分化程度的降低而呈上升趨勢(shì)，但三者間表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。MMP-2陽性表達(dá)率隨著胰腺癌臨床分期的增高而增強(qiáng)(P＜0.05)，有、無轉(zhuǎn)移組間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而與年齡，性別，腫瘤部位及大小無關(guān)(P＞0.05)。見表2。

表2 MMP-2在胰腺癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n)

2.2 MMP-9的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 MMP-9在胰腺癌組織及胰腺正常組織均有表達(dá)。胰腺癌患者M(jìn)MP-9陽性表達(dá)〔32例(64%)〕高于胰腺正常組織〔1例(10%)〕(P＜0.01)。見圖1。

MMP-9陽性表達(dá)率隨著胰腺癌臨床分期的增高而增強(qiáng)P＜0.01，無轉(zhuǎn)移組間表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，但與年齡、性別、病理分化程度、腫瘤部位及大小無關(guān)(P＞0.05)。見表3。

表3 MMP-9在胰腺癌中的表達(dá)與腫瘤生物學(xué)指標(biāo)的關(guān)系(n)

2.3 VEGF的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)間的關(guān)系 VEGF在胰腺癌組織及胰腺正常組織均有表達(dá)。胰腺癌患者VEGF陽性表達(dá)〔32例(64%)〕高于胰腺正常組織〔2例(20%)〕(P＜0.05)。見圖1。

VEGF陽性表達(dá)率隨著胰腺癌臨床分期的增高而增強(qiáng)(P＜0.05)，有、無轉(zhuǎn)移組及不同胰腺癌分化程度組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與年齡、性別、腫瘤部位及大小無關(guān)(P＞0.05)。見表4。

表4 VEGF在胰腺癌中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(n)

2.4 MMP-2、MMP-9、VEGF在胰腺癌組織中表達(dá)相關(guān)性VEGF、MMP-2與MMP-9三者之間表達(dá)均具有高度相關(guān)性(P＜0.01，Kappa＞0.4)。其中 MMP-9(+)時(shí)，VERF(+)26 例，(－)6例;MMP-9(－)時(shí)，VEGF(+)6例，(－)12例;MMP-2(+)時(shí)，VEGF(+)29例，(－)5例;MMP-2(－)時(shí)，VEGF(+)3 例，(－)13例;MMP-9(+)時(shí)，MMP-2(+)28例，(－)4例;MMP-9(－)時(shí)，MMP-2(+)6例，(－)12例。

圖1 MMP-2、MMP-9、VEGF在胰腺癌組織的陽性表達(dá)(×400)

3 討論

腫瘤細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力作為腫瘤的主要特點(diǎn)之一，是決定惡性程度重要因素之一。其包括腫瘤細(xì)胞自身的黏附性降低，癌細(xì)胞與ECM之間相互作用。這將主要依賴于MMPs和VEGF的作用。MMPs是其中較為重要的一類，其中MMP-2、MMP-9的作用顯得尤為重要。Curran等〔7〕研究發(fā)現(xiàn)MTI-MMP可以激活 MMP-2酶原，激活的MMP-2反過來又可以激活MMP-9，從而形成正反饋回路，促進(jìn)惡性腫瘤的擴(kuò)散。血管的生成受到許多因子的調(diào)控，其中最重要的是VEGF，VEGF能誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，毛細(xì)血管袢形成，促進(jìn)新生血管形成，并可增加微血管通透性。An等〔8〕認(rèn)為VEGF是調(diào)控因子中目前針對(duì)腫瘤新生血管過程中最強(qiáng)的，具有高度特異性。Suzuki等〔9〕認(rèn)為VEGF具有促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖、促進(jìn)血管新生、增加血管通透性以及血管維持功能，還直接與腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)。

本研究提示MMP-2、MMP-9在胰腺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中都起著重要作用。另外提示，MMP-2、MMP-9通過降解BM及ECM，促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，且MMP-2、MMP-9表達(dá)率越高，該腫瘤的浸潤(rùn)性越強(qiáng)，因此，聯(lián)合檢測(cè)胰腺組織中MMP-2、MMP-9的表達(dá)，對(duì)于臨床上做出早期診斷，判斷預(yù)后具有一定的指導(dǎo)意義，同時(shí)又可為臨床選用合適的MMPs抑制劑進(jìn)行后期治療提供參考。VEGF的表達(dá)與胰腺癌的分化程度相關(guān)，這提示VEGF表達(dá)的高低與胰腺癌的惡性程度密切相關(guān)，而胰腺癌的惡性程度與預(yù)后密切相關(guān)。這與有關(guān)的研究成果相一致〔10～13〕。

本結(jié)果還表明MMP-2、MMP-9、VEGF可能在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展及血管生成中發(fā)揮協(xié)同作用，促進(jìn)BM及ECM的分解，有利于胰腺癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，但其機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

1 成文武，劉魯明，于爾辛.202例胰腺癌臨床分析〔J〕.中華消化雜志，2003;23(12):758-9.

2 Gupta MK，Qin RY.Mechanism and its regulation of tumor-induced angiogenesis〔J〕.World J Gastroenterol，2003;9(6):1144-55.

3 Mc Cawley LJ，Matrisian LM.Matrix metalloproteinases:they＇re not just for matrix any－more〔J〕.Curr Opin Cell Biol，2001;13(5):534-40.

4 Kikuchi R，Noguehi T，Takeno S，et al.Immunohistochemieal detection of membrane-type-l-matrix metalloproteinase in colorectal carcinoma〔J〕.Br J Cancer，2000;83:215-8.

5 譚江平，校宏兵.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)與結(jié)腸癌預(yù)后的關(guān)系〔J〕.中國癌癥雜志，2001;11(4):17-22.

6 Maeda K，Chung YS，Ogawa Y，et al.Prognostic value of vascular Endothelial growth factor expression in gastric carcinoma〔J〕.Cancer，1996;77(6):858-63.

7 Curran S，Murray G.Matrix metalloproteinases:molecular aspects of their:roles in tumour invasion and metastasis〔J〕.Eur J Cancer，2000;36(3):1621-30.

8 An FQ，Matsuda M，F(xiàn)ujii H，et al.Expression of vascular endothelial growth factor in surgical specimens of hepatocellular carcinoma〔J〕.J Cancer Res Clino Ncol，2000;126(3):153-60.

9 Suzuki K，Hayashi N，Miyamoto Y，et al.Expression of vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor in human hepatocellular carcinoma〔J〕.Cancer Res，1996;56(13):3004-9.

10 李春龍，崔云甫，杜雪飛，等.VEGF和MMP-9在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.世界華人消化雜志，2008;16(9):1012-6.

11 朱學(xué)鋒，陳益君，顧繼禮，等.基質(zhì)金屬蛋白酶-2在胰腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中國綜合臨床，2009;25(10):1032-4.

12 陳建峰.HIF-lα、VEGF在胰腺癌組織中的表達(dá)及臨床意義〔J〕.肝膽胰外科雜志，2008，20(5):343-4.

13 Bramhall SR，Neoptolemos JP，Stamp GW，et al.Imbalance of expression of matrix metalloproteinase(MMPs)and tissue inhibition of the matrix metalloproteinase(TIMPs)in human pancreatic carcinoma〔J〕.J Pathol，1997;182(3):347-55.