高日明，馬立峰，李 敏，范秀麗，孫樹(shù)民 ，趙心力*

(1.金宇保靈生物藥品有限公司，呼和浩特010030;2.內(nèi)蒙古自治區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，呼和浩特010020;3.內(nèi)蒙古民族大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古通遼028042)

口蹄疫(foot and mouth disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒屬、細(xì)小RNA病毒科的口蹄疫病毒引起的偶蹄動(dòng)物高度接觸性傳染病，被列為A類(lèi)傳染病的首位［1－2］，嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。世界衛(wèi)生組織(OIE)將其列為必須報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國(guó)將它列為一類(lèi)動(dòng)物傳染病。至今，對(duì)該病尚無(wú)有效的治療藥物，疫苗免疫是有效地預(yù)防該病的手段之一。為有效控制口蹄疫，我國(guó)將其列為強(qiáng)制免疫病種。市售牛羊口蹄疫疫苗都是全病毒滅活疫苗，有6個(gè)生產(chǎn)廠家提供疫苗，2012年內(nèi)蒙古自治區(qū)使用了4個(gè)廠家的牛羊口蹄疫O－AsiaⅠ型雙價(jià)滅活疫苗和和1個(gè)廠家牛羊口蹄疫A型滅活疫苗。為準(zhǔn)確掌握牛羊口蹄疫免疫效果，給牛羊口蹄疫防控工作提供依據(jù)與參考，2012年對(duì)內(nèi)蒙古自治區(qū)的牛羊口蹄疫苗田間免疫效果進(jìn)行了檢測(cè)，具體結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 血清來(lái)源 2012年全國(guó)重大疫病集中強(qiáng)制免疫期間，委托內(nèi)蒙古自治區(qū)縣級(jí)動(dòng)物疫控機(jī)構(gòu)，采集8個(gè)旗縣免疫口蹄疫疫苗后15、30、60 d的4528份牛血清和4784份羊血清。

1.1.2 檢測(cè)試劑 液相阻斷ELISA試劑盒，均購(gòu)自中國(guó)蘭州獸醫(yī)研究所，O型LPB－ELISA試劑盒:批號(hào) 2012040501、2012070901、2012102901;Asia 型LPB －ELISA 試 劑 盒:批 號(hào) 2012031602、2012070901、2012101602。

1.1.3 疫苗 牛羊口蹄疫雙價(jià)滅活疫苗(O型和AsiaⅠ)分別來(lái)自A公司生產(chǎn)(批號(hào)1006044J，簡(jiǎn)稱(chēng)A);金宇保靈生物藥品有限公司生產(chǎn)(批號(hào)0216030，簡(jiǎn)稱(chēng)金宇);B公司生產(chǎn)(批號(hào)2010014，簡(jiǎn)稱(chēng)B);C公司生產(chǎn)(批號(hào)1006003，簡(jiǎn)稱(chēng)C)。

1.2 方法 采用液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，對(duì)不同廠家生產(chǎn)的牛羊口蹄疫雙價(jià)滅活疫苗(O型和AsiaⅠ)免疫效果、規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)飼養(yǎng)牛羊的免疫效果和2012年不同地區(qū)牛羊免疫效果進(jìn)行檢測(cè);采用3ABC－ELISA檢測(cè)試劑盒，對(duì)2012年內(nèi)蒙古部分地區(qū)牛羊自然感染抗體進(jìn)行了檢測(cè)和比較。檢測(cè)方法按照液相阻斷ELISA和3ABCELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 不同廠家口蹄疫O型和AsiaⅠ雙價(jià)滅活疫苗免疫效果檢測(cè) 采用四個(gè)廠家生產(chǎn)的口蹄疫雙價(jià)滅活疫苗進(jìn)行了免疫試驗(yàn)，分四組(每組15頭牛)，分別檢測(cè)免疫前、一免后15 d、一免后30 d、一免后60 d進(jìn)行采血，檢測(cè)免疫抗體水平。并對(duì)一免后30 d免疫抗體水平不合格的牛進(jìn)行了加強(qiáng)免疫，結(jié)果見(jiàn)表1、表2，其數(shù)據(jù)均值見(jiàn)圖1、圖2。

表1 注射四個(gè)不同廠家口蹄疫雙價(jià)滅活苗O型抗體合格率結(jié)果

圖1 加強(qiáng)免疫組O型口蹄疫抗體消長(zhǎng)結(jié)果

由表1及其數(shù)據(jù)均值圖1可見(jiàn)，在注射疫苗前被檢測(cè)動(dòng)物的抗體合格率在53%左右，一免后15 d都能達(dá)到農(nóng)業(yè)部免疫抗體合格率不低于70%的要求，加強(qiáng)免疫后抗體合格率三個(gè)廠家能達(dá)到100%，相比較C廠家的結(jié)果差，免疫合格率為為93.3%。

表2 注射四個(gè)不同廠家口蹄疫雙價(jià)滅活苗Asia型抗體合格率結(jié)果

圖2 加強(qiáng)免疫組Asia型口蹄疫抗體消長(zhǎng)結(jié)果

由表2及其數(shù)據(jù)均值圖2可見(jiàn)，在注射疫苗前被檢測(cè)動(dòng)物的抗體合格率基本在53%左右，一免后15 d都能達(dá)到農(nóng)業(yè)部免疫抗體合格率不低于70%的要求，加強(qiáng)免疫后抗體合格率三個(gè)廠家能達(dá)到100%，相比較C廠家的結(jié)果差些。

2.2 規(guī)模化奶牛場(chǎng)與散養(yǎng)奶?？谔阋叩拿庖咝Ч容^ 在呼和浩特地區(qū)選取5個(gè)規(guī)模化奶牛場(chǎng)、5個(gè)奶牛散養(yǎng)戶(hù)，每組隨機(jī)采樣20份，結(jié)果見(jiàn)表3。

可以看出:(1)規(guī)模化奶牛場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)口蹄疫免疫抗體合格率分別為88%和74%，達(dá)到農(nóng)業(yè)部免疫抗體合格率不低于70%的要求;(2)規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)的免疫抗體水平略高于散養(yǎng)戶(hù)的免疫抗體水平。

2.3 不同地區(qū)2012年牛羊口蹄疫的免疫檢測(cè)結(jié)果

選取了內(nèi)蒙古東、中、西部地區(qū)的8個(gè)旗縣血清樣品，監(jiān)測(cè)了牛O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)4528頭份，亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)4517頭份，A型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)4519頭份;監(jiān)測(cè)羊O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)4784頭份，亞洲Ⅰ型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)4670頭份，結(jié)果見(jiàn)表4、表5。

表3 規(guī)模化奶牛場(chǎng)與散養(yǎng)奶?？谔阋叩拿庖咝Ч麢z測(cè)結(jié)果

表4 2012年內(nèi)蒙古部分地區(qū)牛口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)情況

表5 2012年內(nèi)蒙古部分地區(qū)羊口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)情況

可以看出:(1)8個(gè)旗縣的口蹄疫總體抗體合格率均達(dá)到了農(nóng)業(yè)部免疫抗體合格率不低于70%的要求;(2)免疫牛的口蹄疫抗體合格率O型和AsiaⅠ的要高于A型，牛的O型和AsiaⅠ口蹄疫抗體合格率明顯高于羊的口蹄疫抗體合格率;(3)不同地區(qū)免疫牛羊后口蹄疫抗體合格率參差不齊。

2.4 不同地區(qū)2012年口蹄疫感染抗體的測(cè)定結(jié)果 采用非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)試劑盒(3ABCELISA)共檢測(cè)2012年不同地區(qū)牛血清2538頭份、羊2754頭份，檢測(cè)陽(yáng)性的刮取OP液進(jìn)行PCR復(fù)檢，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 2012年內(nèi)蒙古部分地區(qū)非結(jié)構(gòu)蛋白抗體的測(cè)定結(jié)果(試劑盒)

可以看出:(1)采用試劑盒檢驗(yàn)的不同地區(qū)的非結(jié)構(gòu)蛋白抗體陽(yáng)性率高低不同，陽(yáng)性率最低0.00%，陽(yáng)性率最高3.02%;(2)為進(jìn)一步確定是否存在假陽(yáng)性，陽(yáng)性的樣品刮取OP液進(jìn)行PCR復(fù)檢，結(jié)果為陰性。

3 討論

3.1 內(nèi)蒙古自治區(qū)的牛羊口蹄疫免疫效果總體良好。從監(jiān)測(cè)結(jié)果看無(wú)論是規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)還是散養(yǎng)戶(hù)，口蹄疫疫苗的三個(gè)血清型免疫抗體合格率均超過(guò)70%。說(shuō)明內(nèi)蒙古自治區(qū)大力推行口蹄疫疫苗強(qiáng)制免費(fèi)免疫，提高了牛羊的免疫力，已經(jīng)獲得了一定的成效。

3.2 從本次監(jiān)測(cè)結(jié)果看，不同廠家疫苗的免疫效果有差異，這可能與不同廠家疫苗毒株來(lái)源、生產(chǎn)工藝、疫苗抗原含量有關(guān)，因此相關(guān)部門(mén)應(yīng)加強(qiáng)疫苗質(zhì)量監(jiān)管。四個(gè)廠家生產(chǎn)的口蹄疫雙價(jià)滅活疫苗注射后60 d，總體免疫合格率均高于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，這與徐名能等［3］實(shí)驗(yàn)結(jié)論相一致。

3.3 規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)免疫效果比散養(yǎng)戶(hù)免疫效果好，這與呂艷秋［4］實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致，并且不同地區(qū)的免疫效果不同。推測(cè)其原因可能有以下幾種:一是農(nóng)村的散養(yǎng)戶(hù)集中動(dòng)物和保定動(dòng)物存在困難，免疫密度低于規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)，補(bǔ)免不及時(shí)，導(dǎo)致抗體水平較低;二是，從本次監(jiān)測(cè)結(jié)果看，不同的疫苗生產(chǎn)廠家，疫苗免疫效果參差不齊;三是可能與疫苗接種技術(shù)、疫苗使用和保管不當(dāng)有關(guān)。因此，散養(yǎng)戶(hù)應(yīng)定期開(kāi)展口蹄疫免疫抗體水平監(jiān)測(cè)，及時(shí)掌握群體的免疫水平，及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)免疫苗，以利于口蹄疫的防控。

［1］ Gurumurthy C B ，San Yal A ，Ven Kataramananr，et al.Genetic diversity in the VP1 gene of foot－and－mouth disease virus serotype Asia Ⅰ［J］.Arch Virol，2002，147(1):85 －102.

［2］ Sahle M，Venter E H，Dwarka R M，et al.Molecular epidemiology of serotype O foot－and－mouth disease virus isolated from cattle in Ethiopia between 1979 2001.Onderstepoort［J］.J Vet Res，2004，71:129 －138.

［3］ 徐名能，駱旭銘，鄧文煌.牛用口蹄疫AsiaⅠ－O型雙價(jià)滅活苗與豬用口蹄疫O型滅活苗對(duì)豬的免疫效果比較試驗(yàn)［J］.廣東畜牧獸醫(yī)科技，2010，3:34 －36.

［4］ 呂艷秋.牛口蹄疫Asia I－O型雙價(jià)滅活疫苗免疫抗體跟蹤試驗(yàn)［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2009，2:41 －42.