盧超等

摘要：用甲基-β-環(huán)糊精不飽和水溶液法制備丹參酮灌注液，并對其制備工藝進(jìn)行優(yōu)化。通過單因素試驗(yàn)確定影響丹參酮灌注液制備的主要工藝參數(shù)；以丹參酮ⅡA利用率為指標(biāo)，通過正交試驗(yàn)優(yōu)化甲基-β-環(huán)糊精不飽和水溶液法制備丹參酮灌注液制備工藝；采用HPLC法對丹參酮ⅡA的質(zhì)量濃度進(jìn)行測定，并計(jì)算其回收率及精密度等。結(jié)果表明：影響丹參酮灌注液制備的主要工藝參數(shù)為投料質(zhì)量比、溫度、乙醇含量；甲基-β-環(huán)糊精不飽和水溶液法制備丹參酮灌注液的最佳條件是甲基-β-環(huán)糊精與丹參酮提取藥粉投料質(zhì)量比80 ∶1，60 ℃下加熱1 h，乙醇含量為5%，攪拌時間3 h，該條件下丹參酮利用率為69.96%；丹參酮ⅡA含量測定方法穩(wěn)定性好，回收率高。

關(guān)鍵詞：甲基-β-環(huán)糊精；丹參酮灌注液；丹參酮ⅡA；HPLC法

中圖分類號： S859.5+3文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2014）10-0200-04

收稿日期：2013-11-04

基金項(xiàng)目：國家科技支撐計(jì)劃（編號：2006BAD04A05-04 ）。

作者簡介：盧超（1989—），男，四川廣元人，碩士研究生，主要從事中獸藥新制劑研究。E-mail：luc19898@126.com。

通信作者：梁劍平，博士，研究員，主要從事天然藥物化學(xué)研究。Tel：（0931）2115286；E-mail：liangjp100@sina.com。丹參酮（tanshinone）是一類從中藥丹參中提取出的脂溶性菲醌類化合物，包括丹參酮Ⅰ、ⅡA、 ⅡB，隱丹參酮，異丹參酮Ⅰ、ⅡA，異隱丹參酮等十多種酮類單體，均含有鄰醌或?qū)︴Y(jié)構(gòu)，其自身及其代謝產(chǎn)物能參與機(jī)體多種生化反應(yīng)，作為輔酶對某些生化反應(yīng)起促進(jìn)、干擾、電子傳遞作用，因此丹參酮表現(xiàn)出多種藥理作用，如天然抗氧化、心血管藥理作用、抗菌消炎、抗癌、抗病毒等作用。在抗菌消炎方面，丹參酮對以金黃色葡萄球菌為主的急性感染特別是對耐藥金黃色葡萄球菌株感染有顯著療效[1-3]。但丹參酮水溶性差，理化性質(zhì)不穩(wěn)定，這大大限制了其應(yīng)用。

甲基-β-環(huán)糊精（M-β-CD）是一種常用包合輔料，具有外親水、內(nèi)疏水的分子結(jié)構(gòu)，溶解度大于β-CD，在25 ℃水中的溶解度可達(dá)到為570 g/L，既溶于水，又溶于有機(jī)溶劑，形成的包合物水溶性增加，可提高藥物溶出速度；環(huán)糊精甲基化后，封閉了其分子內(nèi)羥基，可以抑制其與藥物的不穩(wěn)定反應(yīng)[4]。不飽和水溶液法是將M-β-CD配制成不飽和水溶液，從而對丹參酮原料藥粉進(jìn)行攪拌包合，制成穩(wěn)定的丹參酮包合液。

奶牛乳房炎是奶牛三大常見疾病之一，一直以來給奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失。用丹參酮藥物治療奶牛乳房炎已有很長時間，但由于丹參酮原藥在水中溶解度差的問題一直沒有被很好解決，在一定程度上限制了丹參酮藥物療效的發(fā)揮[5]。本研究通過采用M-β-CD不飽和水溶液法制備出用于治療奶牛乳房炎的丹參酮灌注液，并經(jīng)正交試驗(yàn)優(yōu)化制備工藝，旨在提高丹參酮藥物水溶性，為奶牛乳房炎的臨床治療提供參考。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1藥品與試劑丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品（批號110766-200619）購自中國藥品生物制品鑒定所；丹參酮原料藥粉（丹參酮含量41.70%，丹參酮ⅡA含量11.57%，隱丹參酮含量3.16%）由本實(shí)驗(yàn)室自行提??；M-β-CD購自山東淄博千匯生物科技有限公司，含量≥98%；無水甲醇、無水乙醇、正磷酸為分析純；乙腈為色譜純。

1.1.2儀器Waters2695高效液相色譜儀；磁力加熱攪拌器（德國Heidolph公司，MR3001型）；電子分析天平（德國 Sartorious 公司，BT25S型）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海鴻都電子科技有限公司，DHG-9070型）；循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；0.22 μm微孔濾膜（天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

1.2丹參酮含量測定方法

1.2.1檢測波長選擇稱取丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)品11.48 mg，置于25 mL棕色容量瓶中，加無水甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，作為標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。吸取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液1 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，加無水甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成 45.92 μg/mL 溶液備用。另取適量M-β-CD制成輔料溶液。用HPLC法在200～400 nm波長掃描標(biāo)準(zhǔn)品貯備液及輔料溶液。

1.2.2色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動相A，以0.026%磷酸溶液為流動相B，按表1進(jìn)行梯度洗脫。檢測波長為270 nm，柱溫為25 ℃，流速為 1.2 mL/min。理論板數(shù)按丹參酮ⅡA峰計(jì)算應(yīng)不低于2萬。

表1梯度洗脫情況

時間（min）流動相A（%）流動相B（%）0～2060～9010～4020～30 90 10

1.2.3標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制吸取標(biāo)準(zhǔn)品貯備液1 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，加無水甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。另分別吸取該溶液0.4、0.8、1.2、1.6、2 mL于2 mL離心管中，加無水甲醇稀釋至刻度，配制成濃度分別為9.18、18.37、27.55、36.74、45.92 μg/mL的系列對照品溶液備用，以甲醇溶液作空白對照，在“1.2.1”節(jié)中選擇的波長處測定上述標(biāo)準(zhǔn)品吸光度。以峰面積對進(jìn)樣質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸分析。

1.2.4供試樣品制備取適量灌注液，加入等體積無水乙醇解包合，超聲15 min，靜置12 h，旋蒸除去乙醇，再用乙酸乙酯萃取3次，收集乙酸乙酯層溶液，旋蒸濃縮，甲醇溶解并定容至100 mL容量瓶中，稱取該溶液適量并用甲醇稀釋10倍，即得供試樣品。

1.2.5定量測定與丹參酮ⅡA利用率的計(jì)算取供試品溶液，測定其峰面積，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算樣品中丹參酮ⅡA含量，并計(jì)算利用率。

丹參酮ⅡA利用率=灌注液中丹參酮ⅡA量/投入原料藥中丹參酮ⅡA量×100%；

投入原料藥中丹參酮ⅡA量=投入原藥量×11.57%。

1.2.6回收率試驗(yàn)取9份適量M-β-CD，加蒸餾水至刻度，分3組，每組3份。每組分別加入適量丹參酮ⅡA對照品溶液，配制成質(zhì)量濃度分別為10、15、20 μg/mL的樣品溶液，渦旋混合均勻后按照“1.2.4”節(jié)中供試樣品制備方法進(jìn)行處理，按“1.2.2”節(jié)色譜條件測定峰面積，并分別計(jì)算回收率及RSD值。

1.2.7精密度試驗(yàn)取“1.2.6”節(jié)回收率試驗(yàn)中相同濃度的丹參酮ⅡA對照品溶液，按照色譜條件連續(xù)測定6次，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。

1.2.8重復(fù)性試驗(yàn)取同一樣品，按“1.2.4”節(jié)的方法制備5份供試品，按“1.2.2”的方法進(jìn)樣分析，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。

1.2.9穩(wěn)定性試驗(yàn)取“1.2.7”節(jié)中的15 μg/mL溶液，分別放置0、6、12、24、48、72 h后進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。

1.3丹參酮灌注液的制備

采用M-β-CD不飽和水溶液法制備丹參酮灌注液。稱取適量M-β-CD置于圓底燒瓶中，加入適量蒸餾水，加熱溶解，制成濃度20%的不飽和M-β-CD溶液，水浴保溫。另取適量丹參酮原料藥粉，用少量無水乙醇溶解并緩慢滴加入M-β-CD溶液中，同時加熱攪拌一定時間后冷卻，經(jīng)022 μm濾膜過濾除菌，收集濾液。

1.4丹參酮灌注液制備工藝單因素試驗(yàn)

1.4.1投料質(zhì)量比單因素試驗(yàn)M-β-CD與丹參酮的投料質(zhì)量比分別為5 ∶1、10 ∶1、20 ∶1、40 ∶1、80 ∶1，60 ℃（加熱1 h）磁力攪拌6 h，對各組樣品液丹參酮 Ⅱ A利用率進(jìn)行比較。

1.4.2攪拌溫度單因素試驗(yàn)攪拌溫度分別為23 ℃、40 ℃、60 ℃（加熱1 h）、60 ℃（加熱6 h），投料質(zhì)量比為 80 ∶1，磁力攪拌6 h，對各組樣品液丹參酮ⅡA利用率進(jìn)行比較。

1.4.3攪拌時間單因素試驗(yàn)攪拌時間分別為3、6、12、24 h，投料質(zhì)量比為80 ∶1，60 ℃（加熱1 h）下磁力攪拌，對各組樣品液丹參酮ⅡA利用率進(jìn)行比較。

1.4.4乙醇含量單因素試驗(yàn)乙醇含量分別為5%、10%、15%，投料質(zhì)量比為80 ∶1，60 ℃（加熱1 h）磁力攪拌6 h，對各組樣品液丹參酮ⅡA利用率進(jìn)行比較。

1.4.5攪拌速度單因素試驗(yàn)攪拌速度分別為300、500、700 r/min，投料質(zhì)量比為80 ∶1，60 ℃（加熱1 h）攪拌6 h，對各組樣品液丹參酮ⅡA利用率進(jìn)行比較。

1.4.6pH值單因素試驗(yàn) pH值分別為6.5、7.5、8.5、9.5，投料質(zhì)量比為80 ∶1，60 ℃（加熱1 h）攪拌6 h，對各組樣品液丹參酮ⅡA利用率進(jìn)行比較。

1.5丹參酮-M -β-CD灌注液制備工藝優(yōu)化

采用L9（34）正交試驗(yàn)表，綜合考察投料質(zhì)量比、攪拌溫度、攪拌時間、乙醇含量對丹參酮ⅡA利用率的影響。制備丹參酮-M-β-CD灌注液正交試驗(yàn)的因素、水平見表2。

2.2丹參酮灌注液制備工藝單因素試驗(yàn)結(jié)果

投料質(zhì)量比單因素試驗(yàn)表明，M-β-CD與丹參酮藥粉投料質(zhì)量比分別為5 ∶1、10 ∶1、20 ∶1、40 ∶1、80 ∶1時，丹參酮ⅡA利用率分別為1.82%、3.71%、17.83%、28.54%、8429%，因此將兩者投料質(zhì)量比初步設(shè)定為80 ∶1。

攪拌溫度單因素試驗(yàn)表明，攪拌溫度分別為23 ℃、40 ℃、60 ℃（加熱1 h）、60 ℃（加熱6 h）時，丹參酮ⅡA利用率分別為62.85%、45.74%、73.05%、45.01%，由于β類環(huán)糊精的載藥特性及制備反應(yīng)特點(diǎn)，適當(dāng)加熱有利于反應(yīng)進(jìn)行，加熱過度可能導(dǎo)致逆反應(yīng)發(fā)生，故將攪拌溫度初步設(shè)定為60 ℃（加熱1 h）。

攪拌時間單因素試驗(yàn)表明，攪拌時間分別為3、6、12、24 h時，丹參酮ⅡA利用率分別為60.94%、73.05%、62.58%、72.43%，攪拌時間在≥6 h后丹參酮ⅡA利用率已經(jīng)沒有明顯提高，故為了提高制備工藝效率，將攪拌時間初步設(shè)定為6 h。

乙醇含量單因素試驗(yàn)表明，乙醇含量分別為5%、10%、15%時，丹參酮ⅡA利用率分別為13.97%、54.21%、4823%，制備過程中加入適量乙醇有助于將原料藥粉分散于水溶液中，可以加快反應(yīng)過程，但加入過量乙醇會加速反應(yīng)結(jié)合物的降解，故初步將乙醇含量設(shè)定為10%。

攪拌速度單因素試驗(yàn)表明，攪拌速度為300、500、700 r/min 時，丹參酮ⅡA利用率分別為78.06%、58.05%、60.99%，攪拌速度在300 r/min時效率最高，但綜合考慮試驗(yàn)誤差因素，在3種攪拌速度情況下丹參酮ⅡA利用率相差不大，表明該因素不是影響工藝制備的主要因素。

pH值單因素試驗(yàn)表明，pH值分別為6.5、7.5、8.5、9.5時，丹參酮ⅡA利用率分別為56.73%、62.82%、49.44%、6140%，pH值為75時可獲得最大的丹參酮ⅡA利用率，但可以看出，在本研究pH值范圍內(nèi)丹參酮ⅡA利用率變化不大，表明pH值也不是影響工藝制備的主要因素。

2.3丹參酮-M-β-CD灌注液制備工藝的優(yōu)化

通過比較表4中的極差（R值），各因素對試驗(yàn)結(jié)果影響的大小順序?yàn)橥读腺|(zhì)量比>攪拌溫度>乙醇濃度>攪拌時間。投料質(zhì)量比是影響工藝的主要因素，攪拌溫度、乙醇濃度次之，攪拌時間影響最小。最佳制備條件為A2B2C2D1。方差分析表明（表5），若α=0.05，因素A有顯著影響；若α=0.1，因素A、B、D均有顯著影響。綜合直觀分析和方差分析結(jié)果，最佳工藝條件為A2B2D1，即M-β-CD與丹參酮藥粉投料質(zhì)量比為80 ∶1，攪拌溫度為60 ℃（加熱1 h），乙醇含量為5%，攪拌時間對制備影響不顯著，為節(jié)省工藝時間，定為3 h即可。

因素偏差平方和自由度F值F0.1臨界值A(chǔ)351.163278.6489B68.961215.4459C4.46521.0009D49.162211.0119誤差 4.4602

2.4丹參酮灌注液有效成分溶解度結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果顯示，通過M-β-CD對丹參酮的包合作用，丹參酮灌注液中治療奶牛乳房炎最關(guān)鍵的2種單體丹參酮ⅡA及隱丹參酮在水中的溶解度分別可達(dá)0.38、0.14 g/L，丹參酮在水中溶解度可達(dá)1.32～1.82 g/L，較丹參酮原料藥粉在水中溶解度有很大提高[6]。

3結(jié)論與討論

本研究對丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的線性關(guān)系、回收率、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示，丹參酮ⅡA在270 nm波長處有最大吸收，在質(zhì)量濃度9.18～45.92 μg/mL時其與峰面積有良好線性關(guān)系。該方法回收率較好，精密度符合要求，且結(jié)果快捷、準(zhǔn)確，可用于丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的測定。

本研究采用丹參酮ⅡA作為標(biāo)準(zhǔn)品測定灌注液中丹參酮含量，其實(shí)也可采用隱丹參酮作為標(biāo)準(zhǔn)品，只是考慮到丹參酮ⅡA的保留時間較為靠后，與其他物質(zhì)保留時間值區(qū)分明顯，不易受干擾，故選擇丹參酮ⅡA作標(biāo)準(zhǔn)品。但在投料質(zhì)量比單因素試驗(yàn)中可以看出，在投料質(zhì)量比較低時，M-β-CD對隱丹參酮的包合效果好（丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度與隱丹參酮質(zhì)量濃度比值數(shù)倍于兩者在原料藥粉中的比值）；在投料質(zhì)量比較高時，M-β-CD對丹參酮ⅡA的包合效果更佳，目前對該現(xiàn)象的研究不多，有待進(jìn)一步研究。

M-β-CD可以增加藥物的溶解度，提高藥物穩(wěn)定性，是β類環(huán)糊精共有特點(diǎn)之一，但由于M-β-CD水溶性好，達(dá)到570 g/L，若按一般文獻(xiàn)報(bào)道的采用飽和水溶液法制備[7-8]，將M-β-CD制備飽和水溶液后，其黏稠度特別大，不利于包合反應(yīng)進(jìn)行，故本研究將M-β-CD水溶液濃度調(diào)至20%，能得到良好的包合效果。同時，包絡(luò)復(fù)合物在水溶液中隨溫度升高使其被包絡(luò)的水溶性物質(zhì)加大釋放速度和釋放量，在適當(dāng)條件下可以使釋放出的物質(zhì)濃度與包絡(luò)在M-β-CD的物質(zhì)濃度達(dá)到平衡，所以制備過程中最好開始時溫度高一點(diǎn)，處理過程中逐漸降溫，故本研究中所有加熱溫度均只加熱1 h，后逐漸降溫?cái)嚢鑋9]。

目前中藥制劑所面臨的共同問題是成分復(fù)雜、純化到高含量品質(zhì)成本高、各有效成分發(fā)揮藥效方式研究不明確，對中藥新劑型研究帶來一定難度，本研究中丹參酮研究也遇到類似問題[10]，采用的丹參酮藥粉中總酮含量僅為41.70%（經(jīng)一般工藝純化得到的較好結(jié)果），丹參酮ⅡA含量11.57%，隱丹參酮含量3.16%，所以對于包合進(jìn)入M-β-CD中的物質(zhì)成分復(fù)雜多樣，對此包合物進(jìn)行表征和鑒定有一定難度。本研究也對灌注液進(jìn)行了30 d的穩(wěn)定性檢查，結(jié)果表明灌注液穩(wěn)定性良好。

本研究先采用單因素試驗(yàn)確定基本因素及其大致適用范圍，再通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化確定出最佳制備工藝條件：M-β-CD 與丹參酮藥粉投料質(zhì)量比為80 ∶1，溫度為60 ℃（加熱1 h），乙醇含量為5%。

對于水溶性差的原料藥進(jìn)行環(huán)糊精包合制備以增加其水溶性的研究很多 [11-14]。本研究也是利用M-β-CD的獨(dú)特分子結(jié)構(gòu)及包合特性來增加丹參酮的溶解度，同時結(jié)合該藥治療奶牛乳房炎的臨床目的及局部給藥（乳房灌注）的給藥方式，從而制備出一種新的中獸藥制劑，并通過試驗(yàn)優(yōu)化其制備工藝，檢查其溶解度和穩(wěn)定性。丹參酮-M-β-CD灌注液顯著提高了藥物的溶解度和穩(wěn)定性，并且丹參酮含量達(dá)到治療濃度，能夠滿足獸醫(yī)臨床需要。

參考文獻(xiàn)：

[1]房其年，張佩玲，徐宗沛. 丹參抗菌有效成分的研究[J]. 化學(xué)學(xué)報(bào)，1976，3（3）：197-209.

[2]高玉桂，宋玉梅，楊友義，等. 丹參酮的藥理[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào)，1979，2（3）：75-82.

[3]陳向榮，陸京伯，石漢平. 丹參的藥理作用研究新進(jìn)展[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2001，21（1）：44-45.

[4]崔福德. 藥劑學(xué)[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2011：447-453.

[5]羅昕，徐月紅，陳寶，等. 羥丙基-β-環(huán)糊精對隱丹參酮的增溶作用及其包合物的制備[J]. 中國中藥雜志，2005，30（17）：1328-1331.

[6]聶陽，李苑新，劉波，等. 丹參酮干乳劑的制備及體外溶出度的研究[J]. 中成藥，2008，30（6）：831-835.

[7]周一萬，李 濤，劉潤強(qiáng)，等. 冬青油羥丙基-β-環(huán)糊精包合物制備工藝及殺蟲活性研究[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010（10）：110-114.

[8]魏海濤，宋 敏，李亮華，等. 氟苯尼考-β-環(huán)糊精包合物的研制[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30（4）：94-97.

[9]廖鋒慧.不同環(huán)糊精衍生物對三種不同分子量藥物包合熱力學(xué)研究[D]. 重慶：重慶大學(xué)，2011.

[10]張霄翔，陳少兵，王艷萍. 總丹參酮提取與純化工藝研究[J]. 中藥材，2008，31（3）：431-434.

[11]安琳娜.環(huán)糊精包合技術(shù)用于提高難溶性藥物溶解性的研究[D]. 北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)，2010.

[12]伍永富，吳品江，魏萍，等. Box-Behnken設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化木犀草素-β-環(huán)糊精包合物的制備工藝研究[J]. 中草藥，2010，41（7）：1094-1099.

[13]朱素燕. β-環(huán)糊精及其衍生物包合對難溶性藥物的增溶作用研究[D]. 杭州：浙江大學(xué)，2006.

[14]陶濤. 羥丙基倍他環(huán)糊精的特性及其藥劑學(xué)應(yīng)用[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2002，33（6）：304-308.

因素偏差平方和自由度F值F0.1臨界值A(chǔ)351.163278.6489B68.961215.4459C4.46521.0009D49.162211.0119誤差 4.4602

2.4丹參酮灌注液有效成分溶解度結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果顯示，通過M-β-CD對丹參酮的包合作用，丹參酮灌注液中治療奶牛乳房炎最關(guān)鍵的2種單體丹參酮ⅡA及隱丹參酮在水中的溶解度分別可達(dá)0.38、0.14 g/L，丹參酮在水中溶解度可達(dá)1.32～1.82 g/L，較丹參酮原料藥粉在水中溶解度有很大提高[6]。

3結(jié)論與討論

本研究對丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的線性關(guān)系、回收率、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示，丹參酮ⅡA在270 nm波長處有最大吸收，在質(zhì)量濃度9.18～45.92 μg/mL時其與峰面積有良好線性關(guān)系。該方法回收率較好，精密度符合要求，且結(jié)果快捷、準(zhǔn)確，可用于丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的測定。

本研究采用丹參酮ⅡA作為標(biāo)準(zhǔn)品測定灌注液中丹參酮含量，其實(shí)也可采用隱丹參酮作為標(biāo)準(zhǔn)品，只是考慮到丹參酮ⅡA的保留時間較為靠后，與其他物質(zhì)保留時間值區(qū)分明顯，不易受干擾，故選擇丹參酮ⅡA作標(biāo)準(zhǔn)品。但在投料質(zhì)量比單因素試驗(yàn)中可以看出，在投料質(zhì)量比較低時，M-β-CD對隱丹參酮的包合效果好（丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度與隱丹參酮質(zhì)量濃度比值數(shù)倍于兩者在原料藥粉中的比值）；在投料質(zhì)量比較高時，M-β-CD對丹參酮ⅡA的包合效果更佳，目前對該現(xiàn)象的研究不多，有待進(jìn)一步研究。

M-β-CD可以增加藥物的溶解度，提高藥物穩(wěn)定性，是β類環(huán)糊精共有特點(diǎn)之一，但由于M-β-CD水溶性好，達(dá)到570 g/L，若按一般文獻(xiàn)報(bào)道的采用飽和水溶液法制備[7-8]，將M-β-CD制備飽和水溶液后，其黏稠度特別大，不利于包合反應(yīng)進(jìn)行，故本研究將M-β-CD水溶液濃度調(diào)至20%，能得到良好的包合效果。同時，包絡(luò)復(fù)合物在水溶液中隨溫度升高使其被包絡(luò)的水溶性物質(zhì)加大釋放速度和釋放量，在適當(dāng)條件下可以使釋放出的物質(zhì)濃度與包絡(luò)在M-β-CD的物質(zhì)濃度達(dá)到平衡，所以制備過程中最好開始時溫度高一點(diǎn)，處理過程中逐漸降溫，故本研究中所有加熱溫度均只加熱1 h，后逐漸降溫?cái)嚢鑋9]。

目前中藥制劑所面臨的共同問題是成分復(fù)雜、純化到高含量品質(zhì)成本高、各有效成分發(fā)揮藥效方式研究不明確，對中藥新劑型研究帶來一定難度，本研究中丹參酮研究也遇到類似問題[10]，采用的丹參酮藥粉中總酮含量僅為41.70%（經(jīng)一般工藝純化得到的較好結(jié)果），丹參酮ⅡA含量11.57%，隱丹參酮含量3.16%，所以對于包合進(jìn)入M-β-CD中的物質(zhì)成分復(fù)雜多樣，對此包合物進(jìn)行表征和鑒定有一定難度。本研究也對灌注液進(jìn)行了30 d的穩(wěn)定性檢查，結(jié)果表明灌注液穩(wěn)定性良好。

本研究先采用單因素試驗(yàn)確定基本因素及其大致適用范圍，再通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化確定出最佳制備工藝條件：M-β-CD 與丹參酮藥粉投料質(zhì)量比為80 ∶1，溫度為60 ℃（加熱1 h），乙醇含量為5%。

對于水溶性差的原料藥進(jìn)行環(huán)糊精包合制備以增加其水溶性的研究很多 [11-14]。本研究也是利用M-β-CD的獨(dú)特分子結(jié)構(gòu)及包合特性來增加丹參酮的溶解度，同時結(jié)合該藥治療奶牛乳房炎的臨床目的及局部給藥（乳房灌注）的給藥方式，從而制備出一種新的中獸藥制劑，并通過試驗(yàn)優(yōu)化其制備工藝，檢查其溶解度和穩(wěn)定性。丹參酮-M-β-CD灌注液顯著提高了藥物的溶解度和穩(wěn)定性，并且丹參酮含量達(dá)到治療濃度，能夠滿足獸醫(yī)臨床需要。

參考文獻(xiàn)：

[1]房其年，張佩玲，徐宗沛. 丹參抗菌有效成分的研究[J]. 化學(xué)學(xué)報(bào)，1976，3（3）：197-209.

[2]高玉桂，宋玉梅，楊友義，等. 丹參酮的藥理[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào)，1979，2（3）：75-82.

[3]陳向榮，陸京伯，石漢平. 丹參的藥理作用研究新進(jìn)展[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2001，21（1）：44-45.

[4]崔福德. 藥劑學(xué)[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2011：447-453.

[5]羅昕，徐月紅，陳寶，等. 羥丙基-β-環(huán)糊精對隱丹參酮的增溶作用及其包合物的制備[J]. 中國中藥雜志，2005，30（17）：1328-1331.

[6]聶陽，李苑新，劉波，等. 丹參酮干乳劑的制備及體外溶出度的研究[J]. 中成藥，2008，30（6）：831-835.

[7]周一萬，李 濤，劉潤強(qiáng)，等. 冬青油羥丙基-β-環(huán)糊精包合物制備工藝及殺蟲活性研究[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010（10）：110-114.

[8]魏海濤，宋 敏，李亮華，等. 氟苯尼考-β-環(huán)糊精包合物的研制[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30（4）：94-97.

[9]廖鋒慧.不同環(huán)糊精衍生物對三種不同分子量藥物包合熱力學(xué)研究[D]. 重慶：重慶大學(xué)，2011.

[10]張霄翔，陳少兵，王艷萍. 總丹參酮提取與純化工藝研究[J]. 中藥材，2008，31（3）：431-434.

[11]安琳娜.環(huán)糊精包合技術(shù)用于提高難溶性藥物溶解性的研究[D]. 北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)，2010.

[12]伍永富，吳品江，魏萍，等. Box-Behnken設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化木犀草素-β-環(huán)糊精包合物的制備工藝研究[J]. 中草藥，2010，41（7）：1094-1099.

[13]朱素燕. β-環(huán)糊精及其衍生物包合對難溶性藥物的增溶作用研究[D]. 杭州：浙江大學(xué)，2006.

[14]陶濤. 羥丙基倍他環(huán)糊精的特性及其藥劑學(xué)應(yīng)用[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2002，33（6）：304-308.

因素偏差平方和自由度F值F0.1臨界值A(chǔ)351.163278.6489B68.961215.4459C4.46521.0009D49.162211.0119誤差 4.4602

2.4丹參酮灌注液有效成分溶解度結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果顯示，通過M-β-CD對丹參酮的包合作用，丹參酮灌注液中治療奶牛乳房炎最關(guān)鍵的2種單體丹參酮ⅡA及隱丹參酮在水中的溶解度分別可達(dá)0.38、0.14 g/L，丹參酮在水中溶解度可達(dá)1.32～1.82 g/L，較丹參酮原料藥粉在水中溶解度有很大提高[6]。

3結(jié)論與討論

本研究對丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的線性關(guān)系、回收率、精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性等進(jìn)行了考察，結(jié)果顯示，丹參酮ⅡA在270 nm波長處有最大吸收，在質(zhì)量濃度9.18～45.92 μg/mL時其與峰面積有良好線性關(guān)系。該方法回收率較好，精密度符合要求，且結(jié)果快捷、準(zhǔn)確，可用于丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度的測定。

本研究采用丹參酮ⅡA作為標(biāo)準(zhǔn)品測定灌注液中丹參酮含量，其實(shí)也可采用隱丹參酮作為標(biāo)準(zhǔn)品，只是考慮到丹參酮ⅡA的保留時間較為靠后，與其他物質(zhì)保留時間值區(qū)分明顯，不易受干擾，故選擇丹參酮ⅡA作標(biāo)準(zhǔn)品。但在投料質(zhì)量比單因素試驗(yàn)中可以看出，在投料質(zhì)量比較低時，M-β-CD對隱丹參酮的包合效果好（丹參酮ⅡA質(zhì)量濃度與隱丹參酮質(zhì)量濃度比值數(shù)倍于兩者在原料藥粉中的比值）；在投料質(zhì)量比較高時，M-β-CD對丹參酮ⅡA的包合效果更佳，目前對該現(xiàn)象的研究不多，有待進(jìn)一步研究。

M-β-CD可以增加藥物的溶解度，提高藥物穩(wěn)定性，是β類環(huán)糊精共有特點(diǎn)之一，但由于M-β-CD水溶性好，達(dá)到570 g/L，若按一般文獻(xiàn)報(bào)道的采用飽和水溶液法制備[7-8]，將M-β-CD制備飽和水溶液后，其黏稠度特別大，不利于包合反應(yīng)進(jìn)行，故本研究將M-β-CD水溶液濃度調(diào)至20%，能得到良好的包合效果。同時，包絡(luò)復(fù)合物在水溶液中隨溫度升高使其被包絡(luò)的水溶性物質(zhì)加大釋放速度和釋放量，在適當(dāng)條件下可以使釋放出的物質(zhì)濃度與包絡(luò)在M-β-CD的物質(zhì)濃度達(dá)到平衡，所以制備過程中最好開始時溫度高一點(diǎn)，處理過程中逐漸降溫，故本研究中所有加熱溫度均只加熱1 h，后逐漸降溫?cái)嚢鑋9]。

目前中藥制劑所面臨的共同問題是成分復(fù)雜、純化到高含量品質(zhì)成本高、各有效成分發(fā)揮藥效方式研究不明確，對中藥新劑型研究帶來一定難度，本研究中丹參酮研究也遇到類似問題[10]，采用的丹參酮藥粉中總酮含量僅為41.70%（經(jīng)一般工藝純化得到的較好結(jié)果），丹參酮ⅡA含量11.57%，隱丹參酮含量3.16%，所以對于包合進(jìn)入M-β-CD中的物質(zhì)成分復(fù)雜多樣，對此包合物進(jìn)行表征和鑒定有一定難度。本研究也對灌注液進(jìn)行了30 d的穩(wěn)定性檢查，結(jié)果表明灌注液穩(wěn)定性良好。

本研究先采用單因素試驗(yàn)確定基本因素及其大致適用范圍，再通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化確定出最佳制備工藝條件：M-β-CD 與丹參酮藥粉投料質(zhì)量比為80 ∶1，溫度為60 ℃（加熱1 h），乙醇含量為5%。

對于水溶性差的原料藥進(jìn)行環(huán)糊精包合制備以增加其水溶性的研究很多 [11-14]。本研究也是利用M-β-CD的獨(dú)特分子結(jié)構(gòu)及包合特性來增加丹參酮的溶解度，同時結(jié)合該藥治療奶牛乳房炎的臨床目的及局部給藥（乳房灌注）的給藥方式，從而制備出一種新的中獸藥制劑，并通過試驗(yàn)優(yōu)化其制備工藝，檢查其溶解度和穩(wěn)定性。丹參酮-M-β-CD灌注液顯著提高了藥物的溶解度和穩(wěn)定性，并且丹參酮含量達(dá)到治療濃度，能夠滿足獸醫(yī)臨床需要。

參考文獻(xiàn)：

[1]房其年，張佩玲，徐宗沛. 丹參抗菌有效成分的研究[J]. 化學(xué)學(xué)報(bào)，1976，3（3）：197-209.

[2]高玉桂，宋玉梅，楊友義，等. 丹參酮的藥理[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào)，1979，2（3）：75-82.

[3]陳向榮，陸京伯，石漢平. 丹參的藥理作用研究新進(jìn)展[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2001，21（1）：44-45.

[4]崔福德. 藥劑學(xué)[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2011：447-453.

[5]羅昕，徐月紅，陳寶，等. 羥丙基-β-環(huán)糊精對隱丹參酮的增溶作用及其包合物的制備[J]. 中國中藥雜志，2005，30（17）：1328-1331.

[6]聶陽，李苑新，劉波，等. 丹參酮干乳劑的制備及體外溶出度的研究[J]. 中成藥，2008，30（6）：831-835.

[7]周一萬，李 濤，劉潤強(qiáng)，等. 冬青油羥丙基-β-環(huán)糊精包合物制備工藝及殺蟲活性研究[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010（10）：110-114.

[8]魏海濤，宋 敏，李亮華，等. 氟苯尼考-β-環(huán)糊精包合物的研制[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，30（4）：94-97.

[9]廖鋒慧.不同環(huán)糊精衍生物對三種不同分子量藥物包合熱力學(xué)研究[D]. 重慶：重慶大學(xué)，2011.

[10]張霄翔，陳少兵，王艷萍. 總丹參酮提取與純化工藝研究[J]. 中藥材，2008，31（3）：431-434.

[11]安琳娜.環(huán)糊精包合技術(shù)用于提高難溶性藥物溶解性的研究[D]. 北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)，2010.

[12]伍永富，吳品江，魏萍，等. Box-Behnken設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化木犀草素-β-環(huán)糊精包合物的制備工藝研究[J]. 中草藥，2010，41（7）：1094-1099.

[13]朱素燕. β-環(huán)糊精及其衍生物包合對難溶性藥物的增溶作用研究[D]. 杭州：浙江大學(xué)，2006.

[14]陶濤. 羥丙基倍他環(huán)糊精的特性及其藥劑學(xué)應(yīng)用[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2002，33（6）：304-308.