許建強(qiáng) 董鮮紅 馮一凡 西安三佳藥業(yè)有限責(zé)任公司(西安710075)

梔黃利膽膠囊處方來源于臨床經(jīng)驗(yàn)方，由梔子、黃芩、葉下珠、夏枯草等藥物組成，具有清熱化濕，利膽退黃之功效。為了有效地控制該制劑的制備工藝，本文參考相關(guān)文獻(xiàn)［1～5］，采用正交試驗(yàn)法，以梔子苷結(jié)合干膏得率為優(yōu)選指標(biāo)，確定其最佳水提取工藝條件。

1 儀器與試藥1.1 儀器 Waters高效液相色譜儀(LabAlliance型恒流泵;Waters966二極管陣列檢測器，活德國際貿(mào)易(上海)有限公司;Millennium32色譜工作站);C18色譜柱(Diamosil4.6×250mm，5μm)、KQ3200型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)、BP211D型電子分析天平(德國賽多利斯天平有限公司)、超純水器(Millipore)。

1.2 試藥 梔子苷對照品(批號:110749-200714)購自中國藥品生物制品檢定所;試驗(yàn)所用中藥均購自同仁堂西安西大街店，經(jīng)馮一凡研究員檢驗(yàn)均符合《中國藥典》2010年版一部的規(guī)定;所用化學(xué)試劑為分析純(西安化學(xué)試劑廠)、液相用試劑為色譜純(美國TEDIA公司)、水為超純水。

2 方法與結(jié)果2.1 水提取工藝正交設(shè)計(jì)為了確定最佳的水提取工藝，以提取次數(shù)(A)、提取時間(B)、加水量(C)作為影響因素，分別根據(jù)單因素預(yù)試驗(yàn)結(jié)果選擇三個水平，以L9(34)表安排試驗(yàn)，篩選最佳的水提取工藝條件，因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2.2 樣品溶液的制備 按處方比例量稱取水提工藝部分的藥材共89g，平行9份，隨機(jī)編①～⑨號，按L9(34)正交表下設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行提取，合并提取液。將上述提取液濃縮，定容至一定體積，制得樣品溶液。

2.3 干膏得率的測定 精密吸取9個樣品溶液各25mL，置于已恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3h，取出，置干燥器中冷卻30min后，迅速精密稱重，計(jì)算干膏量和干膏得率。

2.4 梔子苷的含量測定 2.4.1 色譜條件:色譜柱:C18色譜柱(Diamosil4.6 ×250mm，5μm);流動相:乙腈-0.02mol/L 磷酸氫二鈉(12∶88);流速 1.0mL·min－1;檢測波長240nm;柱溫:室溫;進(jìn)樣量10μL。

2.4.2 對照品溶液的制備:精密稱取在105℃干燥2h的梔子苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含梔子苷0.1mg的溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液的制備:分別精密吸取9個樣品溶液各5mL，置10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，濾過，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。

2.4.4 測定法:分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測定并計(jì)算。

2.5 結(jié)果及分析 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表2 L9(34)正交試驗(yàn)表及結(jié)果

表3 方差分析表

試驗(yàn)結(jié)果表明，影響提取效果因素順序?yàn)樘崛〈螖?shù)(A)＞加水量(C)＞提取時間(B)。從方差分析可知，提取次數(shù)對提取效果有顯著影響，提取時間、加水量對提取效果的影響無顯著性差異。從省時、節(jié)約、降低成本等角度綜合考慮，確定方案A3B2C3為最佳提取工藝條件，即加12倍量水，提取三次，第一次1.5h，第二、三次各 1.0h。

2.6 工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 按處方量比例量稱取各藥材共267g，平行三份，按正交試驗(yàn)優(yōu)選的提取工藝條件試驗(yàn)，并測定梔子苷含量和干膏得率。結(jié)果見表4。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

三次驗(yàn)證試驗(yàn)表明，梔子苷含量和干膏得率均較穩(wěn)定，說明優(yōu)選的提取條件基本可行。

3 討 論3.1 梔子為該方君藥 梔子苷為其主要有效成分，具有較強(qiáng)的保肝、利膽、促進(jìn)胰腺分泌、抗菌、抗炎等與該方功能主治相對應(yīng)的藥理活性［6］，且其含量測定有成熟方法;而干膏得率是評價提取效率的傳統(tǒng)手段，可簡便、直觀地體現(xiàn)工藝的提取效率，因此選擇以梔子苷的含量并結(jié)合干膏得率作為水提取工藝優(yōu)選的指標(biāo)是合理和可行的。

3.2 正交試驗(yàn)所優(yōu)選的工藝參數(shù) 進(jìn)行工藝驗(yàn)證試驗(yàn)，梔子苷含量和干膏得率均較穩(wěn)定，而且接近于正交試驗(yàn)的最高值，可為梔黃利膽膠囊的大量生產(chǎn)提供依據(jù)。

［1］國家藥典委員會.中國藥典［S］.一部.北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:1.

［2］胡 遠(yuǎn)，童榮生，楊 勇.正交設(shè)計(jì)法優(yōu)化理氣復(fù)胃口服液的提取工藝［J］.中國藥業(yè)，2013，22(17):40-41.

［3］蔡 軍.正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選退黃口服液提取工藝［J］.中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10(26):128-130.

［4］羅海霞，王紅霞.高效液相色譜法測定茵梔黃顆粒中梔子苷的含量［J］.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2013，7(14):11-12.

［5］郜鳳香，梁 艷.高效液相色譜法測定芎菊上清丸中梔子苷含量［J］.中國藥業(yè)，2012，21(23):14-15.

［6］王志超，楊小龍，張 珂，等.梔子苷藥理作用的研究進(jìn)展［J］.河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)，2012，30(12):159-160.