虢紅梅 張芳俠 陜西新藥技術(shù)開發(fā)中心(西安710075)

關(guān)節(jié)貼由赤芍、荊芥、防風(fēng)、乳香、沒藥等藥物組成，具有祛風(fēng)活血，通絡(luò)舒筋的功能。筆者參考相關(guān)文獻［1～4］，采用高效液相色譜法，以芍藥苷為檢測指標，對本品的質(zhì)量控制進行方法學(xué)研究，以進一步提高本品的內(nèi)控質(zhì)量標準。

1 儀器與試藥1.1 儀器 沃特斯2690型超高效液相色譜儀，PDA紫外可見檢測器;電子分析天平(北京賽多利斯天平有限公司，型號:BT25S，d=0.01mg;BS210S d=0.1mg)。

1.2 試藥 乙腈為色譜純試劑，水為純凈水，其它試劑均為分析純。芍藥苷購自中國藥品生物制品檢定所(供含量測定用，批號:100736-201337)。

2 方法學(xué)考察2.1 色譜條件 色譜柱:C18柱(150mm ×2.1mm，5μm);流動相:乙腈-0.1%磷酸(12∶88);檢測波長:230nm;流速:1.0mL。

2.2 溶液的制備 2.2.1 對照品溶液的制備:精密稱取芍藥苷對照品9.5mg，加甲醇制成每1mL含0.038mg的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備:取關(guān)節(jié)貼，揭去背襯，剪碎，取約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇25mL，稱定重量，浸泡4h，超聲提取20 min(100W，40kHz，25℃)，放冷，再稱定重量，用 75%甲醇補足減失的重量，搖勻，過0.22μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。

2.3 試驗方法 2.3.1 專屬性試驗:精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液(取不含赤芍的處方，按制備工藝制成缺赤芍的陰性對照品，再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液)各10μL，進行測定，結(jié)果供試品溶液在與對照品溶液對應(yīng)的位置上出現(xiàn)色譜峰，且陰性樣品對測定無干擾，見圖1。

圖1 芍藥苷含量測定陰性干擾圖

2.3.2 線性范圍的考察:分別精密吸取芍藥苷對照品溶液(0.38mg/mL)0.2μL、0.4μL、0.8μL、1.2μL、1.6μLl、2.0μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積，并以峰面積對進樣量進行回歸，回歸方程為A=1，415，947c – 9，949(r=0.9998)，可知芍藥苷在0.076 ～0.76μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 精密度考察:取同一供試品溶液，分別精密吸取10μL，連續(xù)進樣6次，色譜峰面積的 RSD=0.71%，提示儀器精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性考察:取同一批號關(guān)節(jié)貼6份，制備供試品溶液。精密吸取各供試品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，測定色譜峰面積，計算芍藥苷含量。其RSD=0.66%，提示方法重復(fù)性良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗:精密稱取同一批號關(guān)節(jié)貼樣品，按供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，分別在放置0、2、4、6、8、10h 進樣，結(jié)果峰面積積分值 RSD(%)為1.45。表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗:取已知含量的樣品，加入一定量對照品，按供試品制備方法制備樣品，測定總量，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 芍藥苷回收率試驗結(jié)果(n=6)

試驗結(jié)果表明，芍藥苷平均回收率為96.6%，RSD為2.26%，加樣回收率良好。

2.3.6 樣品測定結(jié)果:取3批樣品，按供試品制備方法和前述色譜條件測定，3批樣品的含量測定結(jié)果分別為:2.11(mg/g);2.32(mg/g);2.24(mg/g)。

3 結(jié)論與討論3.1 根據(jù)3批中試樣品含量測定結(jié)果，將本品含量限度確定為:本品含赤芍以芍藥苷計每克不得少于1.6mg。

3.2 曾用乙腈-水(18∶82)作為流動相進行檢測，但分離效果較差。乙腈－0.1%磷酸溶液(12∶88)時，能達到基線分離，與雜質(zhì)峰的分離度均符合要求。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:96.

［2］高建濤，王軍練，魏引平.高效液相色譜法測定健胃片中芍藥苷的含量［J］.醫(yī)學(xué)創(chuàng)新研究，2007，4(27):128.

［3］惠婷婷，夏忠庭，張?zhí)m蘭，等.HPLC法測定舒胃顆粒芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷的含量［J］.陜西中醫(yī)，2012，33(4):480-481.

［4］李雪晴，王 超，文愛東.HPLC測定益胃顆粒中芍藥苷的含量［J］.陜西中醫(yī)，2010，31(6):787-788.