紀(jì)勇平，趙龍友， 莊 杰，周 斌

(麗水市中心血站，浙江麗水323000)

人類血型抗原的基因頻率與分布狀況，隨著民族和地域的不同，會有很大的差異性。畬族作為我國一個歷史悠久的散居少數(shù)民族，全國約有人口70萬，公元二世紀(jì)至五世紀(jì)就已經(jīng)在長江中下游居住，目前主要分布在浙江和福建省的交界地帶，而浙江麗水為其主要的聚居區(qū)。目前國內(nèi)對于畬族稀有血型的篩查和研究較為局限，部分紅細(xì)胞血型的頻率尚不清楚。為獲得畬族人群更多的血型抗原信息資料，進(jìn)一步開展紅細(xì)胞血型抗原的生物學(xué)研究，同時解決臨床稀有血型輸配血困難等問題，我們對浙江麗水地區(qū)3 580例非血緣關(guān)系的麗水地區(qū)畬族獻(xiàn)血者樣本進(jìn)行了抗Ena、抗 H、抗 Lub、抗 Ge、Jk(a-b-)、抗 Wrb和成人i陽性等紅細(xì)胞稀有血型的頻率與分布情況進(jìn)行了研究。

一、材料和方法

1.樣本來源 選擇無血緣關(guān)系且父母3代均為畬族的獻(xiàn)血者為研究對象，共計3 580例，其中男2 055例，女1 525例，年齡18～55周歲。其中O型樣本1 498例。分別采取靜脈血3 mL，用EDTA抗凝，將受檢者血樣配制成3%紅細(xì)胞懸液備用。

2.試劑儀器 抗-H、抗-i、和鼠源性抗-GPA、抗-GPC 、抗-Lub(批號:20120710)、抗-Wrb以及羊抗鼠IgG(二抗)均由上海市血液中心提供。分析純尿素試劑:使用前配制為2 mol/L濃度的應(yīng)用液。KA-2200血庫專用離心機(KUBOTA公司)、振蕩器(Heidolph Titramax 101)、平板離心機(KUBOTA 8100)，U型96孔微量板(蘇州康容生物公司)。

3.篩選方法 96孔微量板法篩選成人i陽性血型、孟買/類孟買血型和Ge-血型 在96孔微量板中加入3%受檢紅細(xì)胞懸液20μL，并加入對應(yīng)的抗體應(yīng)用液20μL。置振蕩器上振蕩15 s混勻后在平板離心機以90×g離心5 min，輕敲板側(cè)觀察結(jié)果，紅細(xì)胞凝集為陽性，反之為陰性。成人i血型篩選，以新鮮臍血紅細(xì)胞作陽性對照。孟買/類孟買血型篩選只選擇初篩為O型的紅細(xì)胞樣本。

96孔微量板法篩選 Lub-血型、Ena-血型和Wrb-血型在96孔微量板中加入受檢紅細(xì)胞懸液20μL，并加入對應(yīng)的抗體20μL，800 rpm振蕩15 s混勻。將混勻后的96孔板加蓋置37℃水浴30 min，再加入二抗40μL，振蕩混勻后在平板離心機以90×g離心5 min，輕敲板側(cè)判讀結(jié)果。紅細(xì)胞凝集為陽性，反之為陰性。

96孔板篩選Jk(a-b-)表型每孔加入受檢者紅細(xì)胞懸液20μL及2 mol/L尿素溶液100μL，800 rpm振蕩15 s混勻，在平板離心機上560×g離心1 min，判讀結(jié)果。Jk(a+b+)、Jk(a+b-)、Jk(a-b+)表型紅細(xì)胞在尿素溶液中立即溶血，而Jk(a-b-)表型紅細(xì)胞在2M尿素下可保持30 min內(nèi)不溶血。

稀有血型的確認(rèn)經(jīng)上述方法初篩為稀有血型的樣本，分別通過鹽水凝集試驗或間接抗球蛋白試驗等血清學(xué)試管方法進(jìn)行復(fù)查確認(rèn)。

二、結(jié)果

在3 580例畬族獻(xiàn)血人群中分別篩選出Jk(a-b-)及 wrb-各 1例;未發(fā)現(xiàn) Ena-、Ge-、Lub-、成人i陽性等表型;對其中1 498例O型獻(xiàn)血者進(jìn)行篩選，未篩選出孟買/類孟買血型。結(jié)果見表1。

表1 浙江麗水畬族獻(xiàn)血人群稀有血型篩選結(jié)果

三、討論

中國是一個人口眾多的多民族國家，不同的民族和地域，人類血型抗原頻率分布不盡相同。目前國內(nèi)對于畬族稀有血型研究較少［1-2］，而浙江麗水畬族獻(xiàn)血人群 Lub-、Ena-、Ge-、Wrb-、Jk(ab-)、H-和成人i等紅細(xì)胞血型抗原的篩查目前尚未見報道。

Kidd(Jk)血型系統(tǒng)的相關(guān)抗體可引起速發(fā)和遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)，偶爾可引起新生兒溶血病，對Jk(a-b-)表型及其分子生物學(xué)研究，對于預(yù)防輸血反應(yīng)有較為重要的免疫學(xué)意義。本研究對3 580例畬族獻(xiàn)血者樣本篩查發(fā)現(xiàn)，浙江麗水畬族獻(xiàn)血人群中Jk(a-b-)表型頻率為0.028%，與國內(nèi)報道的廣西壯族人群Jk(a-b-)表型頻率為0.044%［3］，上海地區(qū)人群為0.004%［4］和新疆地區(qū)漢族人群為0.006%［5］有一定差異，而與廣東番禺地區(qū)獻(xiàn)血人群的0.029%［6］接近，低于太平洋群島波利尼亞人 0.10%～0.14%［7］，表明 Jk(a-b-)的表型頻率存在地區(qū)及民族分布的差異性。

抗-Wrb多為IgG性質(zhì)的抗體，可引起溶血性輸血反應(yīng)和新生兒溶血病，Wrb抗原陰性多存在于南美印第安人、美國土著人與蒙古人中。本研究調(diào)查在3 580例畬族獻(xiàn)血者樣本中篩選出一例Wrb-表型的稀有血型，表型頻率為0.028%。而在國內(nèi)新疆維吾爾族、廣州番禺地區(qū)漢族、廣西壯族等人群調(diào)查中均未發(fā)現(xiàn)相同的表型。

同時，在本次篩查中3 580例畬族獻(xiàn)血者樣本中未發(fā)現(xiàn) Ena-、Ge-、Lub-、成人 i等稀有表型，對其中1 498例O型獻(xiàn)血者進(jìn)行篩選，未篩選出孟買/類孟買血型。而在國內(nèi)廣西壯族及廣東番禺地區(qū)漢族人群的調(diào)查中Lub-表型頻率分別為1.26%和 0.048%［3，6］。1989年臺灣 Yang 等［8］曾報道922名中國人全部為Lu(a-b+)表型。

本研究針對浙江麗水地區(qū)畬族獻(xiàn)血人群Ena-、H-、Lub-、Ge-、Jk(a-b-)、Wrb-和成人 i陽性等紅細(xì)胞稀有血型的頻率篩查，結(jié)果顯示浙江麗水地區(qū)畬族作為一個少數(shù)民族群體，人群中稀有血型的表型頻率有其特點。同時本次篩查為進(jìn)一步開展紅細(xì)胞血型抗原的生物學(xué)研究，提供了詳實的畬族少數(shù)民族的血型信息和數(shù)據(jù)。為有針對性地向本地區(qū)少數(shù)民族提供良好的輸配血服務(wù)，提高臨床輸血安全發(fā)揮積極作用。

［1］周火根，金 蕾，傅啟華.浙江畬族Kidd、Duffy血型基因型的調(diào)查［J］.中國輸血雜志，2001，14(4):239.

［2］沈柏濤，王景仙.浙江畬族Duffy血型分布［J］.臨床輸血與檢驗，2001，3(1):46.

［3］焦 偉，黎海瀾，王 晨，等.廣西侗族人群稀有血型篩選［J］.中國輸血雜志，2011，24(5):435-436.

［4］朱自嚴(yán)，沈 偉，陳和平，等.上海地區(qū)部分人群Jk(a-b-)、Dib-、Wrb-、K0、Ena-、Tja-、Ge-稀有血型篩選［J］.中國輸血雜志，2002，15(4):232-233.

［5］方春富，吐遜古麗，周麗君，等.新疆人群稀有血型篩選結(jié)果分析［J］.中國輸血雜志，2011，24(8):696-697.

［6］嚴(yán)康峰，鄧詩楨，曾玫玫，等.廣州番禺地區(qū)獻(xiàn)血人群稀有血型的篩選［J］.中國輸血雜志，2007，20(4):290-291.

［7］朱發(fā)明，嚴(yán)力行.Jk(a-b-)表型分子生物學(xué)研究進(jìn)展［J］.國外醫(yī)學(xué)輸血及血液學(xué)分冊，2003，26(5):424-426.

［8］李 勇，馬嚴(yán)學(xué).實用血液免疫學(xué)血型理論和實驗技術(shù)［M］.北京:科學(xué)出版社，2006:237-238.