冀瑞萍，胡變芳，韓 笑

（晉中學院生物科學與技術學院，山西晉中 030600）

垂柳（Salix babylonica L.）為楊柳科柳屬植物，在我國各地均有分布.明代李時珍所著《本草綱目》中早有記載，柳為本經(jīng)下品，其性寒、味微苦，具有祛風、利尿、止痛、消腫的功能[1]2031.現(xiàn)代臨床上還將其用于治療冠狀動脈粥樣硬化性心臟病、慢性氣管炎、燒燙傷[2]124.近期研究表明，柳葉乙醇提取物具有抗動脈硬化的活性[3].現(xiàn)已知垂柳葉的成分種類大概包括：異黃酮、鞣質(zhì)、鄰苯二酚、生物堿、柳甾酮、山萘酚、槲皮素、酚類、糖苷類等[4].已見報道的具有抗氧化活性的天然物質(zhì)有：黃酮、鞣質(zhì)、苯丙素、香豆素、生物堿、萜類、烯酸、蒽醌、多糖、多肽等[5].

我國垂柳資源十分豐富，而它的藥用、抗氧化性等應用價值尚未得到合理的開發(fā)利用.本文對垂柳葉提取物的抗氧化性及其與其他抗氧化劑的協(xié)同作用進行了研究，以期為垂柳資源的綜合開發(fā)利用提供參考資料.

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗材料

垂柳樹葉：采集于晉中學院校園.于晴日清晨隨機摘取無蟲癭病害的新鮮柳葉，用清水洗凈，瀝干后放置烘箱中80℃烘干，粉碎備用.

大豆油：市售新制大豆油（清澈、淡黃色），來自晉中市榆次油廠.

1.1.2 實驗藥品

無水乙醇、三氯甲烷、冰乙酸、五水硫代硫酸鈉、無水碳酸鈉、碘化鉀、檸檬酸、淀粉指示劑，以上均為國產(chǎn)化學分析純.

1.1.3 實驗儀器

SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵（鄭州市長城科工貿(mào)有限公司）系列電子天平（常州市幸運電子設備有限公司）、BGZ系列電熱鼓風干燥箱（上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠）、MLS-3750高壓蒸汽滅菌器（三洋電機株式會社）、電熱套（北京科偉永興儀器有限公司）.堿式滴定管、鐵架臺、碘量瓶、移液管、燒杯、稱量紙若干.

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗原理

參考GB/T5538-2005動植物油脂過氧化測定方法[6]，采用間接碘量法氧化還原滴定反應來測定油脂的過氧化值（POV，%）.油脂在氧化過程產(chǎn)生過氧化物，與碘化鉀作用生成游離碘，碘單質(zhì)會與淀粉指示劑反應生成藍色復合物，以已知濃度的硫代硫酸鈉溶液滴定，反應體系中的碘單質(zhì)即被還原，隨著硫代硫酸鈉的加入，當溶液中的碘單質(zhì)消耗殆盡時，溶液藍色即消失，根據(jù)所消耗的硫代硫酸鈉溶液的體積即可算出油脂所含的氧化物的物質(zhì)的量，計算油脂的POV，從而得知油脂的氧化程度.

反應原理如下：

2Na2S2O3+I2=Na2S4O6+2NaI

通過比較添加了柳葉提取物的油脂與空白油脂的氧化速度，可大致確定柳樹葉提取物的抗氧化能力.因油脂在剛開始氧化的72 h氧化速率較慢，氧化程度不甚明顯，綜合考慮實驗數(shù)據(jù)的可用性，每隔48 h取樣進行氧化還原滴定.

1.2.2 實驗步驟

1.2.2.1 制備柳葉提取物

①預處理：將垂柳干葉放入研缽中研磨至粉末，稱取50 g放入錐形瓶中.

②醇提：在錐形瓶中加入150mL乙醇溶液（75%），搖勻，置于遮光陰涼處，靜置24 h后抽濾，取濾液，待用.

③減壓蒸餾：將濾液進行減壓蒸餾約5 h，直到乙醇不再蒸出時停止蒸餾，得粗提物，將粗提物放入小錐形瓶中，待用.

1.2.2.2 抗氧化性實驗組的設置

分別稱取20 g油脂9份，置于50mL小錐形瓶中.其中第①份為空白對照；第②、③、④、⑤份分別按照油重的20%、40%、60%、80%，添加柳葉粗提物；第⑥、⑦份加入油重的40%柳葉粗提物并分別置于37℃、0℃保存；第⑧份加入油重40%的檸檬酸；第⑨份加入油重20%的柳葉粗提物及20%的檸檬酸.

表1 各實驗組處理

將上述油脂樣品在70℃下攪拌混合均勻，使添加物充分溶解.為了促進油脂的氧化，所有樣品每隔12 h充分攪拌1min，重新放置.

1.2.2.3 試劑的配制

飽和碘化鉀溶液：稱取14 g碘化鉀，10mL水溶解，微熱使其溶解，冷卻后貯存于棕色瓶中.

三氯甲烷-冰乙酸溶液（2∶3）：取40mL三氯甲烷加60mL冰乙酸，混勻.

0.02mol/L硫代硫酸鈉標準溶液：稱取0.2486 g的五水硫代硫酸鈉以及0.002 g碳酸鈉，加入500mL煮沸過的無菌蒸餾水中.

淀粉指示劑（5 g/L）：稱取可溶性淀粉0.5 g，加入少許水，調(diào)成糊狀，倒入100mL沸水中調(diào)勻、煮沸，取上清液.

1.2.2.4 抗氧化值的測定

稱取2 g油脂（標準至0.0002 g）于碘量瓶中，加入20mL三氯甲烷-冰乙酸（2∶3）混合液，立即振搖使樣品完全溶加解，入1mL飽和碘化鉀溶液，加塞，輕輕振搖30 s，在暗處放置3min，取出后加入100mL蒸餾水，搖勻，立即用0.002mol/L的硫代硫酸鈉溶液滴定，當溶液顏色變?yōu)榈S色時，加入1mL（5 g/L）淀粉指示劑，繼續(xù)滴定至藍色消失.

取相同量的三氯甲烷-冰乙酸溶液，碘化鉀溶液，蒸餾水，按同樣的方法做空白試劑實驗.

式中：

C（mol/L）：硫代硫酸鈉標準溶液濃度；

V（mL）：試樣消耗硫代硫酸鈉標準溶液體積；

Vo（mL）：空白試劑消耗硫代硫酸鈉標準溶液體積；

M（g）：樣品質(zhì)量；

0.1269為換算常數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度粗提物對油脂的抗氧化性比較

初始值為0.087.

由表2可看出，各組油脂的POV隨時間推移而增大，表明油脂逐漸被空氣所氧化.其中，空白油脂的POV最大，隨著加入粗提物的濃度增大，油脂的過氧化值變小，隨著時間的推移，在144 h的滴定實驗中，第④組60%和第⑤組80%的POV差異甚微，60%以上的濃度增加抗氧化效果增加不明顯.因此，設定濃度60%為垂柳葉粗提物抗氧化濃度的閾值.

表2 不同濃度提取物的抗氧化性能比較（POV）

2.2 相同濃度粗提物在不同溫度下對油脂的抗氧化性比較

由表3可看出，溫度對于油脂的氧化作用影響較明顯，溫度越高油脂的過氧化值越高，37℃處理的油脂氧化程度最高，5℃處理的油脂氧化程度最小.且隨著時間的推移，5℃處理的油脂POV變化幅度較室溫和37℃的處理組低.因此，添加抗氧化劑的油脂也應保存于較低溫度下.

表3 相同濃度提取物在不同溫度下抗氧化性能比較（POV）

初始值為0.087.

2.3 相同濃度的粗提物與人工合成抗氧化劑對油脂的抗氧化性比較

由表4可看出，同樣添加量的情況下，垂柳葉粗提物的抗氧化性不如檸檬酸，但在粗提物與檸檬酸的協(xié)同作用下，油脂的氧化程度仍要比單純添加垂柳葉粗提物的油脂低，表明垂柳葉粗提物與檸檬酸有一定的協(xié)同增效作用.

表4 提取物與檸檬酸抗氧化性能比較（POV）

初始值為0.087.

3 討論

近幾年，天然抗氧化劑的開發(fā)與研究越來越受到重視[7～11]，本文研究了垂柳葉的抗氧化能力.

研究結(jié)果表明，垂柳葉粗提物具有一定的抗氧化作用，且其抗氧化性隨著濃度升高而增強，但60%為增強閾值；溫度垂柳葉抗氧化作用影響較明顯，溫度越高油脂的過氧化值越高，添加抗氧化劑的油脂也應保存于較低溫度下.與檸檬酸等人工合成抗氧化劑相比，垂柳葉粗提物的抗氧化活性不如檸檬酸，但與檸檬酸協(xié)同作用后，抗氧化能力增強.

垂柳葉粗提物的提取方法應能夠?qū)⑺璩煞峙c其他成分進行最大程度的分離且保證得率，本文采用75%乙醇、料液比1：3、時間24 h進行提取，減壓蒸餾5 h，但更精細的提取方法需進一步研究.

本文采用碘量滴定法對垂柳葉粗提物的POV進行了測定，由于未去除提取物中的葉綠素，其較深的顏色對滴定終點的判斷也造成了一定的干擾，因此，應進一步探究更精確的測定方法.

同時，為了準確了解垂柳葉中抗氧化活性成分，應對活性成分進行分離提取.

總之，柳樹栽種廣泛，柳葉來源豐富，成本較低.因此，從柳葉中提取抗氧化劑應用于醫(yī)藥、美容、保健品開發(fā)具有一定的可行性.

［1］李時珍.本草綱目［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1982.

［2］江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典（上）［M］.上海：上?？茖W技術出版社，1986.

［3］張晶，鄭毅男，韓立坤.旱柳葉中抗血栓、抗動脈硬化活性成分的研究［J］.中藥材，1999，22（3）：131～133.

［4］劉墨祥，劉海英，鄭毅男，等.柳屬植物化學成分及其生物活性研究的新進展［N］.吉林農(nóng)業(yè)大學學報，1997，19（2）：115～122.

［5］鄒坤，張如意，趙玉英.天然產(chǎn)物抗氧化構(gòu)效關系及作用機理的研究概況［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1993，5（3）：66～71.

［6］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.GB/T 5538-2005動植物油脂過氧化值測定［S］.2005，11.

［7］周云波.竹葉黃酮的抗氧化性研究［J］.文山師專學報，2000，11（1）：94～98.

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［9］張加研，付惠，劉祥義.黑荊樹皮中抗氧化性物質(zhì)化學成分研究初探［J］.林產(chǎn)化工通訊，2004，38（2）：14～17.

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［11］陸瑞利.黃山欒樹葉中具有清除自由基活性物質(zhì)的分離和制備［J］.安徽農(nóng)業(yè)大學學報，2004，31（2）：207～211.